HPLC法測定含乳飲料中的三聚氰胺

張淑芳，崔婷婷

（1.烏蘭察布市產(chǎn)品質(zhì)量計量檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古烏蘭察布 012000；2.烏蘭察布市檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古烏蘭察布 012000）

三聚氰胺（Melamine）是一種白色粉末狀物質(zhì)，是一種化工原料，用于制造三聚氰胺樹脂，嚴(yán)禁人為添加到食品中[1]。三聚氰胺雖有低毒性，但同時攝入三聚氰胺和三聚氰酸會導(dǎo)致嚴(yán)重的腎毒性[2-3]。在傳統(tǒng)的檢驗檢測方法中，主要采用凱氏定氮法對待測物質(zhì)進(jìn)行含氮量的測定，最終確定蛋白質(zhì)的含量。這種檢驗檢測方法只能測得含氮量的多少，忽略了氮的來源和種類，一些不法商家添加三聚氰胺，從而提高含氮量，造成食品中蛋白質(zhì)含量高的假象。此類不合格食品被人食用后嚴(yán)重影響人體健康，在社會上也造成了惡劣影響[4]。本實驗中，利用高效液相色譜儀檢測三聚氰胺的含量，為保障食品安全提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

6種含乳飲料樣品隨機市購；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度為99.5%，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司）；甲醇（色譜純，天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司）；乙腈（色譜純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司）；檸檬酸（河北省保定化學(xué)試劑廠）；辛烷磺酸鈉（色譜純，天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司）；試驗用水為自制超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1260高效液相色譜儀系統(tǒng)，配有可變波長紫外檢測器（Variable Wavelength Ultraviolet Detector，VWD）；電子分析天平（賽多利斯）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

色 譜 柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；進(jìn)樣量：20μL；流速 1.0 mL/min；檢測波長：240 nm；離子對試劑緩沖液-乙腈（90∶10，V/V）為流動相。

1.3.2 樣品處理

按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》（GB/T 22388—2008）第一法處理樣品[5]。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶液稀釋，得到1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL 及20.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍

利用上述方法進(jìn)行實驗，以峰面積y為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)x繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為y=61.304 179 9x-36.316 309、相關(guān)系數(shù)為0.999 89、線性范圍為1.0～20.0 μg/mL。三聚氰胺的相關(guān)系數(shù)R2大于0.99，具有良好的線性關(guān)系。

圖1 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 精密度試驗

取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，各進(jìn)樣6次，計算精密度，見表1。實驗結(jié)果表明，1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.15%、8.87%、4.04%、2.56%及2.53%，均小于10%，實驗重現(xiàn)性好，精密度符合要求。

表1 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液精密度試驗

2.3 加標(biāo)回收率試驗

取空白樣品，加入已知濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，測3次，結(jié)果如表2。由表2可知，三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均回收率為87.974%，準(zhǔn)確度好。

表2 三聚氰胺加標(biāo)回收率試驗（n=3）

2.4 部分市售樣品檢測

如圖2所示，三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)品保留時間為20.963 min。隨機選取部分市售含乳飲料樣品6種，按照上述的實驗方法進(jìn)行。圖3是該6種市售含乳飲料樣品其中一種三聚氰胺色譜圖，在20.963 min時，沒有任何峰出現(xiàn)，說明該樣品不含三聚氰胺。其他5個樣品圖和圖3相似，都沒有在20.963 min出現(xiàn)峰。結(jié)果表明，這6種含乳飲料樣品均沒有非法添加劑三聚氰胺檢出，符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。該方法簡單方便，可以用于含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺的檢測。

圖2 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（濃度1.0μg/mL）

圖3 某含乳飲料樣品中三聚氰胺色譜圖

3 結(jié)論

本文利用高效液相色譜法檢測含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺，該方法簡單方便，重復(fù)性與準(zhǔn)確度好，方便實驗室檢測含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺。