微柱凝膠法與凝聚胺法在臨床交叉配血中的比較

張璐璐

（沈陽市骨科醫(yī)院承基醫(yī)院，遼寧 沈陽 110000）

在對輸血患者進(jìn)行治療前，交叉配血測定是一項十分重要的項目，科學(xué)準(zhǔn)確的交叉配血能夠保證臨床輸血的安全性和有效性。凝聚胺法（manual polybrene test，MPT）操作簡便，可以在很短的時間里產(chǎn)生效果，會釋放出更多的正電荷和血紅胞的負(fù)電荷產(chǎn)生一定的中和作用，從而減少血紅胞之間的距離，使正常的血紅胞之間產(chǎn)生不特定的凝集，可以迅速檢測到血清中的IgG抗體。但是，在免疫或紅細(xì)胞抗原弱的情況下，用MPT進(jìn)行血液檢測，容易出現(xiàn)漏診。微柱凝膠法（microcolumn gel test，MGT）[1]是一種改良的血清學(xué)技術(shù)，操作便捷、節(jié)省時間、敏感度高、陽性陰性結(jié)果顯著、結(jié)果容易記錄，具有標(biāo)準(zhǔn)特征、自動特征和重復(fù)性強(qiáng)特征[2]。所以MGT在外國國家應(yīng)用較為普遍，在我國也多應(yīng)用于不完全抗體篩查、抗體測定、交叉配血和血型鑒別[3]。MGT已廣泛用于臨床上的跨血液配型，它是離心技術(shù)、生物化學(xué)凝膠篩選技術(shù)和免疫化學(xué)抗原抗體作用三種技術(shù)的綜合產(chǎn)物，具有操作方便、容易判斷、影響因子低、敏感性高、特異性好等特點(diǎn)，而且可以進(jìn)行大容量、多樣本的交叉配制。但是這種方法檢查費(fèi)用較高，孵化和離心需要一定的過程，會延誤急救患者的救治，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的結(jié)果。針對于此，本文將著重分析MGT與MPT在臨床交叉配血中的應(yīng)用，選擇沈陽市骨科醫(yī)院承基醫(yī)院接診的192例維持性血液透析患者開展調(diào)研。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取沈陽市骨科醫(yī)院承基醫(yī)院于2016年2月至2019年3月收住的192例患者進(jìn)行初次輸血不規(guī)則抗體測定，均為陰性的維持性血液透析患者，其中男性82例，女性110例，年齡13～77歲。每例輸血次數(shù)最多36次，最少1次。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均需要輸血治療。②患者的資料完整，自愿入組研究，簽署知情同意書。③輸血前接受較差配血檢驗。排除標(biāo)準(zhǔn)：①中途退出研究者。②合并其他重大疾病的患者。

1.2 方法 MGT交叉配血操作流程：第一步在凝膠卡片上記錄供血人員的姓名、主側(cè)管、次側(cè)管。第二步制備供、受血人員0.50%RBC懸液，在主側(cè)加進(jìn)50 μL供血人員的RBC懸液和受血人員的25 μL血漿；在次側(cè)加進(jìn)50 μL受血人員RBC懸液及供血人員25 μL血漿。放置在37 ℃孵育15 min，1000 r/min，離心10 min。最后分析結(jié)果，RBC均勻沉浸在管底患者判定為陰性，懸浮在凝膠表面或者膠中判定為陽性。

MPT交叉配血試驗依據(jù)試劑盒的說明書進(jìn)行。對MGT交叉配血陽性標(biāo)本處理：主側(cè)陽性標(biāo)本、次側(cè)陽性標(biāo)本分別應(yīng)用MPT予以交叉配血，凡是次側(cè)陽性標(biāo)本用患者RBC進(jìn)行直接抗人球蛋白測定。

1.3 觀察指標(biāo) ①對比MGT和MPT法交叉配血結(jié)果，包含交叉配血聯(lián)合、主側(cè)凝集、次側(cè)凝集、主次側(cè)均凝集。②輸血次數(shù)和不規(guī)則抗體陽性的關(guān)系。③對比MGT和MPT測定結(jié)果。④對比MGT和MPT測定時間。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0軟件記錄本次研究數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用[n（%）]形式表達(dá)，行卡方檢驗。MGT和MPT的檢測時間采用（±s）表示，行t檢驗。P＜0.05提示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MGT和MPT交叉配血結(jié)果對比 MPT中8例主側(cè)凝集患者和26例次凝集中均測定出不完全抗體，12例主次測均呈現(xiàn)為凝集狀態(tài)，經(jīng)過37 ℃水浴10 min后，鏡檢紅細(xì)胞不凝集，數(shù)據(jù)顯示為冷凝集，124例次MGT次凝集患者，紅細(xì)胞直接抗人球蛋白測定全部呈現(xiàn)為陽性。8例主側(cè)凝集患者均測定出不完全抗體，經(jīng)過配型后行O型洗滌紅細(xì)胞懸液輸注，26例MPT次側(cè)凝集患者改為輸入同型洗滌紅細(xì)胞，12例冷凝級和其余90例MPT配血聯(lián)合患者輸入用RBC懸液，30日后隨訪，輸血未存在不良反應(yīng)。見表1。

表1 MGT和MPT法交叉配血結(jié)果對比

2.2 輸血次數(shù)和不規(guī)則抗體陽性的關(guān)系 在輸血次數(shù)不斷增加中，不規(guī)則抗體陽性也隨之提升，陽性率均有所提升，二者之間具有相關(guān)性。本次研究中輸血次數(shù)為1～、6～、11～、15～、20～，例次分別為384、186、154、130、70，共計924例次；不規(guī)則抗體陽性分別為18例（4.69%）、20例（10.75%）、26例（16.88%）、30例（23.08%）、30例（42.86%），共計124例（13.42%）。

2.3 MGT和MPT測定結(jié)果對比 MGT測定總陽性率＞MPT，MGT和MPT配血不相合，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。見表2。

表2 MGT和MPT測定結(jié)果對比

2.4 MGT和MPT測定時間對比 MGT的平均檢測時間為（11.51±2.31）min，MPT的平均檢測時間為（29.63±3.63）min，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=58.3539，P=0.0000＜0.05）。

3 討論

近幾年，血液中的不良反應(yīng)發(fā)生率呈上升趨勢，這與其他血液系統(tǒng)不合、免疫性疾病、溶血性疾病等因素密切相關(guān)。因此，在進(jìn)行血液輸入之前，應(yīng)與患者進(jìn)行交流，以掌握患者的病情和使用狀況，選擇更精確、更敏感的血液配型，以保證患者的安全。維持性血液透析是慢性腎功能衰竭尿毒癥患者生命的基本治療形式，血液透析患者中常出現(xiàn)程度不同的重度貧血和中度貧血[4]。本文分析中，MPT中8例主側(cè)凝集患者和26例次凝集中均測定出不完全抗體，12例主次測均呈現(xiàn)為凝集狀態(tài)，124例次MGT次凝集患者，紅細(xì)胞直接抗人球蛋白測定全部呈現(xiàn)為陽性。8例主側(cè)凝集患者均測定出不完全抗體，經(jīng)過配型后行O型洗滌紅細(xì)胞懸液輸注，26例MPT次側(cè)凝集患者改為輸入同型洗滌紅細(xì)胞，12例冷凝級和其余90例MPT配血聯(lián)合患者輸入用RBC懸液，30日后隨訪輸血未存在不良反應(yīng)。在透析進(jìn)行中輸注血液和血液制品，是保證患者安全透析的關(guān)鍵舉措，維持性血液透析患者需要經(jīng)過多次且反復(fù)輸血，造成血漿中蛋白質(zhì)，包含IgG及補(bǔ)體等，非特異性吸附于紅細(xì)胞表面中，以此讓患者的紅細(xì)胞致敏。在MGT法中，微柱凝膠內(nèi)含有抗體IgG、C3d溶液[5]，其可以和人紅細(xì)胞中的IgG和補(bǔ)體結(jié)合，在人體外產(chǎn)生凝集[6]。

通過本次數(shù)據(jù)分析，隨輸血次數(shù)不斷增加，不規(guī)則抗體陽性及陽性率也有所提升，二者之間具有相關(guān)性。本次研究中輸血次數(shù)為1～、6～、11～、15～、20～，例次分別為384、186、154、130、70，共計924例次；不規(guī)則抗體陽性分別為4.69%、10.75%、16.88%、23.08%、42.86%，共計13.42%。這一數(shù)據(jù)說明，對于需要輸血的維持性血液透析患者來說，容易出現(xiàn)配血結(jié)果無法判定的問題。在124例次MGT交叉配血試驗次側(cè)凝集中，直接抗人球蛋白測定均呈現(xiàn)為陽性，這也給臨床輸血帶來難度，在這一狀態(tài)下聯(lián)合MPT予以交叉配血就顯得十分關(guān)鍵[7]。

在臨床上，輸血主要是通過補(bǔ)充失血量、維持血容量、調(diào)節(jié)血壓、補(bǔ)充氧或補(bǔ)充凝血成分等多種方式來進(jìn)行，特別是對重癥患者的救治，可以迅速補(bǔ)充血容量，改善休克狀態(tài)。交叉配型為臨床上的一個先決條件，即要密切注意患者與供血人的血液（紅細(xì)胞、血清/血漿）的配型，如果在主側(cè)處出現(xiàn)了凝集，就不允許進(jìn)行輸血；如果出現(xiàn)一側(cè)紅細(xì)胞，就應(yīng)盡量少輸入。目前，在血液中進(jìn)行交叉配制的有微柱凝膠法、聚凝胺法等，都有各自的優(yōu)點(diǎn)和不足之處，微柱凝膠法由于靈敏度高、操作方便、重復(fù)性好，已逐步發(fā)展為跨界輸注的一種重要方法。

當(dāng)前臨床多采用MPT，是通過中和細(xì)胞表面的負(fù)電荷，以此縮短紅細(xì)胞之間距離，導(dǎo)致RBC非特異性凝集狀態(tài)，促進(jìn)RBC抗原和IgG、IgM抗體聯(lián)合，當(dāng)加進(jìn)重懸液后，如出現(xiàn)和RBC抗原有關(guān)的IgG或者IgM抗體，凝集不消失，如果沒有和RBC抗原有關(guān)的IgG或IgM抗體，凝聚胺引發(fā)的凝集現(xiàn)象消失[8]。MGT法的基本原理為，RBC和血清在含有葡聚糖凝膠的小試管中孵育，經(jīng)過離心處理。如果抗原抗體無法適應(yīng)，則RBC沉浸在管底，也就是陰性狀態(tài)。如果抗原抗體相互適應(yīng)，則抗體吸附于凝膠中，從而讓RBC不易下沉，被固定于凝膠之間，也就是陽性反應(yīng)[9]。聯(lián)合上述結(jié)果和不完全抗體篩查數(shù)據(jù)，臨床對不完全抗體陰性、冷凝集、MPT交叉配血陰性的90例血液透析患者，輸注RBC懸液，在輸注后的30日內(nèi)隨訪未出現(xiàn)不良反應(yīng)。

當(dāng)前MPT多應(yīng)用于基層醫(yī)院中，在測定敏感度方面，有數(shù)據(jù)分析MGT相對于MPT高于2～6個滴度[10]。MGT已經(jīng)成為當(dāng)前輸血檢查的推薦形式，也是凝膠過濾方法和抗原抗體反應(yīng)的聯(lián)合，和MPT對比，此種方式具有更高的靈敏度，結(jié)果更為精準(zhǔn)。也有結(jié)果分析，交叉配血過程中靈敏度相比于MPT高出1～5個滴度，能夠捕捉到較小的抗原抗體反應(yīng)，另外操作容易掌握，結(jié)果更加平穩(wěn)，可以反復(fù)，不會過多的受人為因素影響。根據(jù)本文結(jié)果分析，MGT法測定總陽性率＞MPT，MGT法和MPT配血不相合，組間存在差異性（P＜0.05）。由此數(shù)據(jù)也進(jìn)一步證實(shí)，MGT相比于MPT交叉配血，更能提升測定的靈敏度，不規(guī)則抗體測定的陽性率高于微柱凝膠，最主要是能夠排除冷凝集的干擾特征，為了確保輸血的安全，提供主要依據(jù)。應(yīng)用MPT交叉配血雖然能夠快速測定出不完全抗體，但是對于冷凝集標(biāo)本存在假陽性，也在一定程度上導(dǎo)致醫(yī)師判斷失誤，從而延長交叉配血試驗時間，給交叉配血帶來一定難度，導(dǎo)致?lián)尵葧r間延誤。通過研究分析兩種方法，次側(cè)配血不合較多。這是由于患者紅細(xì)胞被本身的抗體致敏，直抗陽性是次側(cè)不合的關(guān)鍵因素，多發(fā)于淋巴細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤（MM）、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）中，藥物抗體引起免疫性溶血反應(yīng)所致[11-12]。

MPT中的多胺是一種高價的季胺鹽聚合物，溶解后能產(chǎn)生一定量的正電荷，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短紅細(xì)胞之間的距離，產(chǎn)生可逆的非特異性凝集，但如果與抗體致敏的紅細(xì)胞凝集，則會不可逆的出現(xiàn)凝集，以此判斷接受血液者與獻(xiàn)血者的血液是否能夠結(jié)合。MPT是一種快速簡便的方法，但MPT不能檢測-k抗體。如果患者有反復(fù)輸血、懷孕或溶血性貧血、自身免疫性抗體、紅細(xì)胞抗原較弱，檢測過程不需要使用其他設(shè)備，適合在急診配血中使用，但是弊端在于使用該檢測方法可能會出現(xiàn)漏檢問題[13-14]。

MGT是近年來推廣的新技術(shù)，已逐步應(yīng)用于臨床。MGT的操作簡便，結(jié)果易于判斷，特異性、靈敏度和重復(fù)性高。在測試過程中對操作人員的依賴性很小，結(jié)果可以保存很長時間，檢查結(jié)果可以在隨訪期間隨時復(fù)查。在抗球蛋白試劑中加入紅細(xì)胞鹽水懸液后，如果紅細(xì)胞表面抗體球蛋白與試劑中的抗體發(fā)生特異性反應(yīng)，紅細(xì)胞就會凝集，離心后可觀察到紅細(xì)胞是聚集在凝膠上還是聚集在凝膠中部，以確定是否為陽性，如聚集在底部，則為陰性。MGT可以有效地降低人為失誤的概率，且結(jié)果更加精準(zhǔn)。這種方法通常需要30 min左右的離心機(jī)輔助，能夠減少人工成本，但是弊端在于需要配血的時間較長，所以在急癥以及緊急血液配型中并不適用[15-16]。

MPT所用的凝聚胺為高價的陽離子型季胺鹽聚合物，其能在溶化后生成一定數(shù)量的正電，中和紅細(xì)胞的距離，減少其距離，形成可逆性的、不特定的凝集，但如果與抗體引起敏感的紅細(xì)胞，就會形成不可逆轉(zhuǎn)的凝集，以此來判定受血人與供血人的血能否融合。結(jié)果表明，MPT具有快速、簡便、快速的優(yōu)點(diǎn)，而且具有較高的陽性檢出率。如果有輸血史、妊娠史、溶血性貧血、紅細(xì)胞上抗體、紅細(xì)胞上抗體等，容易出現(xiàn)漏檢。MGT是一種新技術(shù)，其在實(shí)際生產(chǎn)中正逐步被采用，這種檢測技術(shù)操作簡便，易于判斷，特異性高，靈敏度高，重復(fù)性好，對受試者的依賴程度低，可以長時間的保留結(jié)果，并可在以后的處理中對檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。當(dāng)將受試者的血球生理鹽水懸浮液注入到抗球蛋白試劑時，如果與血清中的抗原發(fā)生了特異的反應(yīng)，那么可以進(jìn)行凝集，然后開展離心處理。MGT可以減少人為錯誤發(fā)生的概率，從而使計算的精度得到提高。但由于需要使用離心和孵化設(shè)備，因此需要30 min的時間，不宜在緊急情況下進(jìn)行血液調(diào)配[17-18]。

在常規(guī)意義上，MPT是一種最常應(yīng)用的交叉配血方式，MGT在測定RBC吸附的免疫球蛋白和補(bǔ)體中，相比于MPT有更為顯著的優(yōu)越性特征。所以臨床建議將MGT和MPT聯(lián)合應(yīng)用，通過這兩種路徑記錄RBC凝聚情況，對非特異性凝集導(dǎo)致的配血結(jié)果判定困難，具有更為顯著的互補(bǔ)特征，有助于臨床更快速的提升輸血安全性和有效性。