棒毛絡新婦Trichonephila clavate的脂溶性成分、微量元素及氨基酸分析研究

李文銳 代欣桃 顧小亮 楊志斌 聞焜 楊自忠

摘要：目的研究棒毛絡新婦Trichonephila clavate中含有的脂溶性成分、微量元素和氨基酸。方法采用氣相色譜-質譜（GC-MS）聯用儀、電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS）和氨基酸分析儀分別分析棒毛絡新婦中的脂溶性成分、微量元素及氨基酸。結果自棒毛絡新婦脂溶性提取物中共鑒定出26個脂溶性成分，占離子流圖總峰面積的94.52%，其中，油酸乙酯和亞油酸乙酯含量較高。富含7種人體必需微量元素，其中Fe和Zn含量較高，重金屬元素As和Pb的含量符合限度要求。此外，棒毛絡新婦中共含有17種氨基酸，其中6種為人體必需氨基酸。結論本研究將為進一步開展蜘蛛資源的開發利用提供參考依據。

關鍵詞：棒毛絡新婦;脂溶性成分;氨基酸;微量元素

【中圖分類號】 F763 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）10--03

蜘蛛在自然界種類較多，分布較廣，數量較大，是農林害蟲的重要天敵[1-2]，也是人類重要的藥用資源和食物資源[3-4]。棒毛絡新婦Trichonephila clavata（L.Koch，1878）是一種常見蜘蛛，民間俗稱花蜘蛛、草蜘蛛，常見于我國南方各省份，北方的北京、河北、山西、陜西、河南和遼寧也有分布[5]。

食用蜘蛛在我國雖然不普遍，但在世居海南的黎族和云南的傣族、景頗族、布朗族、彝族常有食用蜘蛛的習俗，如海南的黎族喜食海南單柄蛛、施氏單柄蛛、廣西纓毛蛛;而云南的西雙版納的布朗族喜食橫紋金蛛Argiope bruennichi（Scopoli，1772）、傣族喜食斑絡新婦Nephila pilipes（Fabricius，1793），德宏的傣族、景頗族喜食大囊地蛛Atypus sacculatus Zhu et al.，2006，瀘水的傈僳族和雙柏的彝族喜食棒毛絡新婦Trichonephila clavata（L.Koch，1878）[3-4]。

為了探索蜘蛛的營養成分，揭示其對人類營養價值的秘密，本課題組選擇了棒毛絡新婦Trichonephila clavata（L.Koch，1878）作為研究對象，采用GC-MS、ICP-MS和氨基酸分析儀對該蜘蛛的脂溶性成分、微量元素和氨基酸進行分析研究，研究結果將為進一步開展蜘蛛資源的開發利用提供參考依據。

1儀器與材料

1.1儀器

7890A/5975C型氣相色譜-質譜聯用儀（美國Agilent公司）;Ethos Up型微波消解儀（意大利Milestone公司）;Agilent 7900型電感耦合等離子體質譜儀（美國Agilent公司）;S-433D型氨基酸自動分析儀（德國賽卡姆公司）。

1.2樣品與試劑

樣品采集自云南省大理市龍龕碼頭洱海周邊地區，陰干。批號：20181101-20181110，經大理大學昆蟲生物醫藥研究院楊自忠教授鑒定為棒毛絡新婦Trichonephila clavate（L.Koch，1878），標本及樣品現保存于大理大學昆蟲生物醫藥研究院。多元素混合標準溶液（含Cr、Fe、Ni、Zn、As、Se、Sr、Mo、Ba、Pb，國家有色金屬及電子材料分析測試中心，100.0μg/mL，批號：17DA224）;混合內標溶液（45Sc、72Ge、103Rh、115In、185Re、209Bi，美國Agilent公司，10μg/mL，批號：5188-6525）;雞肉成分分析標準物質（地球物理地球化學勘查研究所，批號：GBW10018）;17種氨基酸混合標準溶液：谷氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸、精氨酸、脯氨酸（德國塞卡姆公司，批號：09070113，濃度均為2.5?mol.mL-1）;甲醇（色譜純，批：10945607 812）和硝酸（質量分數65%，批號：K47365856 551）均購于德國默克公司;其他試劑均為分析純，水為超純水。

2方法與結果

2.1樣品制備將干燥的棒毛絡新婦蟲體用中藥粉碎機打碎，過40目篩，樣品粉末于干燥器中保存備用。

2.2脂溶性成分分析

2.2.1供試品溶液制備稱取備用樣品15g，用石油醚進行索氏提取1h，提取液減壓濃縮得浸膏，取浸膏10mg，加石油醚溶解并定容為濃度1mg/mL的溶液，上機備用。

2.2.2 GC-MS條件Agilent HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）色譜柱;起始柱溫60℃;10℃/min升至160℃，保留3 min;5℃/min升至200℃，保留10 min;5℃/min升至240℃，保留5 min;3℃/min升至250℃，保留5 min;2℃/min升至260℃，保留3 min;300℃后運行3 min;前進樣口溫度200℃;載氣為高純氦氣;進樣量1.0μL（分流比10：1）;柱流量：1.0 mL/min。離子源：電離能量70 eV;離子源溫度230℃;四級桿溫度150℃;質量掃描范圍為m/z 50-550，溶劑延遲3 min。

2.2.3樣品測定樣品按“2.2.2”項下條件測定，得到總離子流圖，見圖1。通過NIST11.L標準譜庫檢索（取相似度90%以上），各成分相對百分含量采用面積歸一化法進行計算，見表1。

2.3微量元素分析[6]

2.3.1精密稱取樣品粉末約0.3 g，置聚四氟乙烯消解罐中，加入6 mL硝酸和2 mL雙氧水，微波消解，消解功率1800 w，30 min內升至190℃，保持20 min。冷卻，于130℃趕酸至溶液剩余約1.0 mL，轉入50 mL量瓶，超純水定容。同法制備試劑空白溶液。

2.3.2 ICP-MS工作條件射頻功率1550 w，等離子氣體流量15.0 L·min-1，霧化氣體流量0.99 L·min-1，輔助氣體流量0.90 L·min-1，采樣深度10.0 mm;霧化室溫度2℃，重復次數3次。

2.3.3樣品測定精密稱取10批樣品（20181101-20181110），按照“2.3.1”的方法和“2.3.2”項下條件分別處理和測定10種微量元素，結果見表2。

2.4氨基酸分析

2.4.1參考文獻方法[7]制備茚三酮溶液，樣品稀釋液和流動相。

2.4.2樣品的制備精密稱取樣品粉末約0.3g于水解管中，加6 mol/L的鹽酸6 mL，苯酚9 mg，充氮氣，融封，置110℃干燥箱中水解22 h，冷卻后濾過至蒸發皿中，蒸干，殘渣加超純水溶解并稀釋至25 ml，搖勻，精密量取2 mL，用樣品稀釋液定容至10 mL，備用。

2.4.3標準品溶液的制備精密量取混合對照品溶液適量，用樣品稀釋液逐級稀釋為10、20、40、60、80、100 mmol/mL的系列混合標準溶液。

2.4.4色譜條件色譜柱：LCA KO6/Na分離柱4.6×150 mm;流速：洗脫泵0.45 mL/min，衍生泵0.25 mL/min;檢測波長：570 nm和440 nm，柱溫：57℃;進樣體積：50μL。梯度洗脫（0～2.5 min，100%A;2.5～11.0 min，85%A;11.0～17.0 min，80%A;17.0～23.0 min，67%A;23.0～29.0 min，20%A;29.0～42.0 min，100%B）。

2.4.5樣品測定精密稱取10批（20181101-20181110）樣品，按“2.4.2”的方法和“2.4.4”項下條件分別處理和測定，采用外標一點法計算各氨基酸的含量。結果見表3。

3討論

本研究從棒毛絡新婦脂溶性提取物中共分離鑒定了26個化學成分，其中，油酸乙酯和亞油酸乙酯含量較高，油酸乙酯主要作為潤滑劑;亞油酸乙酯為多不飽和脂肪酸類物質，能調節人體的脂質代謝，治療和預防心腦血管疾病，促進生長發育，具有防癌抗癌作用，參與機體免疫調節[8]。

本實驗采用ICP-MS法同時測定棒毛絡新婦中10種元素的含量，結果顯示棒毛絡新婦中富含人體必需微量元素Fe、Zn、Sr、Cr、Se、Ni和Mo，這些元素是人體重要生理功能的物質基礎，對人體健康具有積極意義[9]。其中Fe和Zn的含量較高，Fe參與血紅蛋白的形成，具有造血功能;Zn對人體健康有重要的調控功能，可以增強免疫力，加快生長發育，缺乏可導致細菌、病毒等反復感染[10]。另外，兩種重金屬元素As和Pb的含量符合2012年我國頒布的《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》對重金屬含量的限度要求：As≤2.0 ug/g、Pb≤5.0 ug/g。

由本研究表6可知，檢測的17種氨基酸中，含6種人體必需氨基酸，藥效氨基酸約占氨基酸總量的53%。其中甘氨酸和谷氨酸的含量較高。甘氨酸有神經活動抑制性的遞質作用，對生物體內代謝調節起重要作用;谷氨酸為主要的鮮味氨基酸，可以參與肌肉、肝臟和大腦等組織的解毒活動。

本實驗研究結果證實，棒毛絡新婦不僅是人類重要的藥食資源，還具有一定的營養價值，是極具開發利用的可更新的自然資源。但此次研究樣品采集地單一，所檢測的數據不足以代表我國棒毛絡新婦的整體情況，因此還需進一步探討。

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基金項目 ： 國家地方聯合工程研究中心創新能力建設項目（云發改高技[2015]395）;云南省科技創新平臺建設項目（2015DG030）;云南省應用基礎研究青年項目（2016FD074）;云南省重大科技專項計劃（202002AA100007）。

作者簡介 ; 李文銳（1987-），女，本科，主管藥師，研究方向：食品藥品檢驗檢測。

通訊作者 ： 楊自忠（1969-），男，博士，教授，研究方向：蛛形動物資源及開發利用。