胸腔積液病理診斷中細胞蠟塊技術與傳統涂片技術的應用對比

林秋月，林秀香

福建省莆田市第一醫院病理科，福建莆田 351100

胸腔積液是一種常見的臨床炎性疾病，循環障礙、惡性腫瘤均可引起，以病理性積液在胸膜腔內積聚為特征，其發生和胸部損傷和胸膜通透性增加、靜水壓在胸膜腦細血管內增高和壁層胸膜淋巴回流障礙等因素相關，發病后患者容易出現咳痰、發熱和呼吸困難等癥狀[1]。由于該疾病初期無顯著癥狀表現易被患者忽略，發病后病情往往已發展至中晚期，錯過手術治療最佳時期，部分患者因胸腔積液入院檢查，所以對胸腔積液細胞學結果準確檢測，對臨床疾病的鑒定有重要意義。以往傳統涂片技術是主要檢測手段，該方法存在制片不均勻、陽性率低下，缺乏組織形態結構或明顯増生的間皮細胞等局限性，導致診斷效果不理想，易出現漏診[2]。因此，為避免上述情況發生，利用胸腔積液制作細胞塊不僅可以做常規HE染色,顯示組織結構,利用其可以反復、連續切片的特點，結合免疫組化,分子病理鑒別腫瘤細胞來源,為分子靶向藥物的選擇提供臨床依據顯得尤為重要。該研究以2019年6月—2021年4月時段該院接收的84例胸腔積液患者為研究對象，以傳統涂片技術作為參照，對開展細胞蠟塊技術的效果情況做進一步分析。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準 研究所選病例均伴呼吸異常、發熱和胸腔積液過多現象；研究所選病例年齡均≥19歲，但≤74歲；選取患者均知曉同意研究進行。

1.2.2 排除標準 伴惡性腫瘤者；伴嚴重精神功能異常者；對研究進行不配合者。

1.3 方法

采集研究所選對象的胸腔積液標本。對照組患者采取傳統涂片技術，觀察組患者采取細胞蠟塊技術，具體操作開展如下。

1.3.1 對照組①把采集的標本置于常溫環境下30 min左右(送檢量一般需要50~200 mL)，如果長時間延長送檢,則應該放入4℃冰箱保存或加入固定劑，然后輕輕地把送檢液體上部倒掉,取下層液體，20 mL離心管4管或50 mL離心管2管,放入離心機內。轉速2 000 r/min,離心10 min,隨機取20 mL 2管或50 mL 1管。

②用移液管小心吸去上清液，輕輕向下斜置試管(注意沉淀物必須是凝聚在底部不會流動的)，用吸水紙或棉簽吸去管口多余的液體。

③用吸管吸取沉淀物上層細胞（吸取沉淀物時，將試管口向下傾斜45℃），防止試管壁上的液體流入管底，造成細胞稀釋，這是離心細胞塊制片的關鍵。

④涂片要求涂片均勻，平整，不能太厚。

1.3.2 觀察組 ①取剩余的20 mL 2管或50 mL 1管（如果是血性液體時，可加入冰醋酸乙醇液體處理后離心沉淀）。

②加入10%中性甲醛溶液，將沉淀物打勻（如果沉淀物量較少，應放至1 mL的尖頭離心管內）。

娘子關泉域巖溶地下水主要接受降雨入滲及河流、水庫等地表水滲漏補給。城市及工礦企業主要分布于陽泉市內各河流的中上游地區，大量污染物隨地表水一起進入地下含水層，產生了對地下水的污染[1]。近年來，陽泉市政府在環境治理方面做了大量扎實有效的工作，開展了泉域保護、污水處理廠建設、垃圾電廠建設、黑臭水體治理等工作，娘子關泉域水環境得到有效改善。

③以轉速2 000 r/min，離心10 min。吸干上清液，輕輕地沿管壁加入95%乙醇，靜置1~2 h。用尖頭的硬簽輕輕地將沉淀物挑出,放在包埋紙上，可用伊紅染色標記，包好放入包埋框內蓋好,再放入常規脫水機程序內處理。待充分進行常規脫水，浸蠟，石蠟包埋，切片染色和鏡檢等操作,待標本鏡驗完成后，通過結合免疫組織化學技術，對涂片及細胞塊的效果進行診斷鑒別。

1.4 觀察指標

①觀察分析兩組經檢測方法后的診斷效果情況。

②觀察分析免疫組織化學技術聯合細胞蠟塊的分型診斷情況。

1.5 統計方法

采用SPSS 25.0統計學軟件進行數據分析，計數資料以頻數和百分比（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者臨床特征分析

在研究選取的84例患者中，男占63.10%，女占36.90%；年齡＜65歲者占54.76%，年齡≥65歲者占45.24%；發病部位：右側占52.38%，左側占47.62%；血性胸腔積液占21.43%，非血性胸腔積液占78.57%；渾濁胸腔積液占82.14%，透明胸腔積液占17.86%。見表1。

表1 患者臨床特征分析Table 1 Analysis of clinical characteristics of patients

2.2 兩組診斷結果比較

對照組、觀察組疑似惡性腫瘤細胞檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；對照組惡性腫瘤細胞檢出率是19.05%，明顯低于觀察組的54.76%，差異有統計學意義（P＜0.05）；對照組未檢出腫瘤細胞所占比是50.00%，明顯高于觀察組的19.05%，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組診斷結果比較[n（%）]Table 2 Comparison of diagnosis results between the two groups[n(%)]

2.3 免疫組織化學技術聯合細胞蠟塊的分型診斷情況分析

對細胞蠟塊診斷陽性標本34例，通過與免疫組織化學方法相結合，經采取Syn和TTF-1、CgA和CK7、WT-1和P63、CK5/6和Calretinin等標記開展組織學分型。其中，腺癌（64.71%）的所占比最高，其次分別是無法確定 （14.71%）、其他類型腫瘤（8.82%）、鱗癌（2.94%）、小細胞癌（2.94%）、惡性間皮瘤（2.94%）、惡性淋巴瘤（2.94%），見表3。

表3 免疫組織化學技術聯合細胞蠟塊的分型診斷情況分析Table 3 Analysis of the typing and diagnosis of immunohistochemistry combined with cell wax block

3 討論

近年來，由于病理制片技術質控的加強和細胞塊制作新技術的推廣，使疾病的陽性檢出率大大提高。

胸腔積液是一種受多原因影響而引發胸膜內部液體過多，且影響該病因的因素較多，判斷該病難度較大，如炎性胸腔積液的中間皮細胞受炎性刺激，易出現不典型增生，且間皮細胞以輕度異型性為主，其核輕度增大，容易產生假桑葚立體結構[3]；另外，經放療后間皮細胞受放射線刺激影響，會出現不典型增生，腺癌細胞等惡性腫瘤細胞容易和這些細胞形態混淆[4-5]。

對于傳統的細胞涂片檢測技術，通常在制作時易使涂片制作厚薄程度出現差異，細胞退變、重疊、黏液覆蓋率較高而且易發生掉片情況，發生腫瘤細胞丟失情況，不僅會增加炎性細胞，而且還會提高血細胞假陰性率[6-7]。所以，在檢測胸腔積液細胞中，傳統涂片檢測技術的實施往往會產生敏感度低下問題，通常在50%~78%之間[8-9]。該檢測方法的應用可靠性低，難以令人信服，無法有效滿足臨床需求。相比之下，細胞蠟塊制片技術的應用，通過開展離心固定切片方式對腫瘤細胞聚集，能有效保證腫瘤細胞結構的清晰性，從而能保持其組織結構和其排列方式的一致性，能防止發生細胞人為重疊情況，提高診斷胸腔積液細胞的準確性[10-11]。細胞蠟塊制片技術在血性胸腔積液中，對紅細胞溶解的方式能有效清除對紅細胞產生的制片干擾，而且還能使其制片背景更具干凈性與整潔性，可保留核的特異性及腫瘤細胞的完整性，使檢測陽性率有效提高[12-13]。有報道指出，予以患者采取細胞蠟塊制片技術檢測，能有效提高診斷細胞病理的準確性，而且此檢測方法也具有一定有效性[14-15]。細胞蠟塊制片技術不僅具備可重復性，同時還能提供較多的類似于細胞和組織學的形態特征，與傳統涂片制片技術相比，有效性更好，而且對于原發灶不明確和無法取得組織標本的患者，該技術經細胞蠟塊采取免疫組織化學染色，能標記相應抗體，對細胞學診斷準確性的提高有重要意義，同時還能有效判斷惡性腫瘤細胞的來源，從而能更好地開展臨床指導[16]。有研究指出，以非小細胞癌為例，在細胞蠟塊中，大部分患者均能通過形態學準確診斷鱗癌、腺癌病情，隨后利用免疫組織化學標記物Syn和P63、CK7和CgA及WT-1等標記后，能準確獲取分型信息[17]。在該次研究中，以該院接收的84例胸腔積液患者為對象，經對上述闡述總結可知，對照組惡性腫瘤細胞檢出率是19.05%，明顯低于觀察組的54.76%（P＜0.05）；對照組未檢出腫瘤細胞所占比是50.00%，明顯高于觀察組的19.05%（P＜0.05），說明，在胸腔積液病理診斷中實施細胞蠟塊技術能準確進行診斷，并通過結合免疫化學技術，可使診斷價值進一步提升，為臨床對治療方案的制訂提供借鑒與參考，有較好的臨床應用價值。另外，在上述研究結果中還可知，經采取Syn和TTF-1、CgA和CK7、WT-1和P63、CK5/6和Calretinin等標記開展組織學分型發現，腺癌22例、鱗癌1例、小細胞癌1例、惡性間皮瘤1例、惡性淋巴瘤1例、其他類型腫瘤3例、無法確定5例。對于無法確定分型的5例患者，其原因是，由于胸腔積液外觀相對透明清洗，且有較少纖維成分，所以離心沉淀物獲取較少；有些細胞異型性無顯著，易被看作為退變間皮細胞。

在喻鑫等[17]研究中，以胸腔積液患者500例為研究對象，分別實施傳統涂片技術和細胞蠟塊技術開展病理診斷。從上述研究結果中可知，行細胞蠟塊技術后患者惡性檢出率為69.00%，明顯高于行傳統涂片技術檢查的42.00%；行細胞蠟塊技術后疑似惡性檢出率為16.00%，低于傳統涂片技術的22.00%；細胞蠟塊技術檢出率為15.00%，低于傳統涂片技術的36.00%（P＜0.05）。相比傳統涂片技術，細胞蠟塊技術的應用其診斷準確性更高。由此說明，病理診斷胸腔積液患者時，實施細胞蠟塊技術，能使陽性檢出率有效提高，確保病理診斷準確性。

在胡瓊[18]學者的研究中，選取120例胸腔積液者為對象，根據診斷方法實施的不同進行分組，即對照組（開展傳統涂片技術診斷）、研究組（開展細胞蠟塊技術診斷）。其結果顯示，研究組惡性腫瘤率為41.7%，惡性腫瘤細胞率為45.0%，均高于對照組的23.3%、31.7%（P＜0.05）。由此說明，細胞蠟塊技術可準確診斷胸腔積液病理結果，且相比傳統涂片技術，診斷準確率更好，可為臨床治療方案的制訂提供借鑒及參考。上述內容與該次研究報道相符。

綜上所述，在病理診斷胸腔積液中細胞蠟塊技術的應用能有效提高診斷準確率，使診斷治療療效提升，同時還能提高胸腔積液細胞學診斷檢出率及準確性，應用價值高。