LBC 聯(lián)合BRAF V600E 檢測診斷甲狀腺乳頭狀癌的價(jià)值

郭勇

菏澤市立醫(yī)院乳腺甲狀腺外科，山東菏澤 274000

作為一種甲狀腺惡性結(jié)節(jié)之中最為常見的病理類型， 甲狀腺乳頭狀癌患者在早期并沒有顯著的不適癥狀，進(jìn)行初診時(shí)，無法發(fā)現(xiàn)其存在的異常情況[1]。目前在臨床中對甲狀腺疾病首選的診斷方式是常規(guī)超聲檢查，其具備敏感度較高、無創(chuàng)傷、無輻射以及簡便的優(yōu)點(diǎn)，但也存在特異度較低等缺點(diǎn)[2]。 而作為常規(guī)超聲檢查的重要補(bǔ)充， 液基細(xì)胞學(xué) （liquidbased cytology，LBC）檢查在對惡良性結(jié)節(jié)鑒別時(shí)，病理生理的基礎(chǔ)便在解剖結(jié)構(gòu)和空間分布之中微血管的差異[3-4]。而在B-Raf 原癌基因（B-Rafprotooncogene，BRAF）中，最為常見的突變便是第600 位密碼子突變（V600E）。 同時(shí)BRAF V600E 基因突變同時(shí)也是甲狀腺癌的一種常見基因突變類型， 在甲狀腺乳頭狀癌中占據(jù)高達(dá)80%， 與甲狀腺癌的侵襲程度具有直接關(guān)系[5-7]。現(xiàn)階段，臨床中對于甲狀腺乳頭狀癌患者采取LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測的研究較少。基于此，該文選取2017 年11 月—2019年11 月該院收治的98 例疑似甲狀腺乳頭狀癌患者為研究對象，對LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的應(yīng)用效果進(jìn)行分析探究?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)抽取該院98 例疑似甲狀腺乳頭狀癌患者，為研究對象均簽署知情同意書。 患者年齡20~53 歲，平均（34.1±2.12）歲；男46 例，女52 例；病灶直徑0.4~0.9 cm，平均（0.63±0.15）cm；體質(zhì)量51~83 kg，平均（77.12±4.23）kg；病程1~5 個(gè)月，平均（2.28±0.15）個(gè)月。 該研究由該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)開展。

納入標(biāo)準(zhǔn)： ①患者存在甲狀腺乳頭狀癌相關(guān)癥狀； ②實(shí)施的手術(shù)方式為甲狀腺全切術(shù)以及甲狀腺次全切術(shù)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①診斷回聲顯示，并不是低回聲的結(jié)節(jié)；②結(jié)節(jié)的最大直徑>1 cm；③結(jié)節(jié)中存在粗大鈣化， 并且結(jié)節(jié)的成分不能顯示； ④合并有多發(fā)性結(jié)節(jié)；⑤合并有嚴(yán)重的心肺功能損傷，無法使用超聲造影檢查；⑥術(shù)后病理診斷，發(fā)現(xiàn)其為單純性或者結(jié)節(jié)性甲狀腺腫大等非腫塊病癥。

1.2 方法

常規(guī)超聲檢查：使用彩色多普勒超聲診斷儀，使用的探頭頻率設(shè)置為15 MHz，機(jī)械指數(shù)設(shè)定在0.08~0.14 之間。 其總增益應(yīng)在88%左右，深度3 mm。 臨床醫(yī)師應(yīng)引導(dǎo)患者完全暴露其頸部， 利用常規(guī)灰階超聲，對患者甲狀腺區(qū)域進(jìn)行掃描，具體應(yīng)包含結(jié)界內(nèi)部回聲、結(jié)節(jié)內(nèi)部、結(jié)節(jié)邊界、患者血液循環(huán)、結(jié)節(jié)的形態(tài)和大小、結(jié)節(jié)周圍組織的病變狀況等內(nèi)容。

在超聲的引導(dǎo)之下，將細(xì)針傳入到目標(biāo)結(jié)節(jié)，隨后將針芯拔出， 在結(jié)節(jié)內(nèi)部沿不同方向使用穿刺針進(jìn)行快速穿插， 數(shù)次后利用虹吸原理將甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行吸取，在囊實(shí)性結(jié)節(jié)中穿取實(shí)性部位細(xì)胞，隨后對穿刺標(biāo)本立刻進(jìn)行BRAF V600E 基因聯(lián)合LBC 檢測。 其中穿刺標(biāo)本應(yīng)使用95%無水乙醇濕法進(jìn)行固定，采取蘇木精-伊紅染色法進(jìn)行染色，隨后在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。

LBC 檢查： 將30 mL 細(xì)胞保存液直接注入穿刺標(biāo)本中，進(jìn)行離心后去上清液，將膠質(zhì)、黏液以及血細(xì)胞成分去除，使用自動(dòng)液基細(xì)胞制片儀進(jìn)行制片、封片以及HE 染色，在顯微鏡下實(shí)施細(xì)胞學(xué)診斷。

BRAF V600E 基因檢測：將含有800 μl RNA later 保存液注入穿刺標(biāo)本中， 并在PRC 管之中實(shí)施BRAF V600E 基因檢測。在進(jìn)行DNA 分離之后，將樣本基因組DNA 進(jìn)行提取，隨后利用aRT-PCR，實(shí)現(xiàn)基因擴(kuò)增，使用擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)法，以及BRAF V600E基因突變試劑盒，實(shí)施BRAF V600E 基因檢測。

手術(shù)病理診斷：對于活檢組織進(jìn)行HE 染色，在低倍鏡下對患者的內(nèi)部回聲以及病灶形態(tài)進(jìn)行觀察，使用高倍鏡觀察患者的細(xì)胞和組織具體情況?；颊呷绻诘捅剁R下出現(xiàn)砂礫體， 應(yīng)使用高倍鏡進(jìn)行檢查，將砂礫體的數(shù)量進(jìn)行記錄，并且觀察患者結(jié)節(jié)組織的結(jié)構(gòu)、數(shù)量、邊界以及形態(tài)。

1.3 觀察指標(biāo)

將患者的手術(shù)病理診斷結(jié)果作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，對患者采取常規(guī)超聲和LBC 聯(lián)合BRAF V600E基因檢測的特異度、敏感度、準(zhǔn)確度進(jìn)行對比分析。其中準(zhǔn)確度為診斷結(jié)果中真陰性和真陽性之和所占的比值； 敏感度為真陽性在真陽性與假陰性之和中所占的比值； 特異度則是真陰性在真陰性與假陽性例數(shù)中所占的比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)， 符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 手術(shù)病理診斷結(jié)果

98 例患者在進(jìn)行手術(shù)病理診斷后，其中甲狀腺乳頭狀癌為90 例，剩余8 例患者為其他疾病。 而常規(guī)超聲診斷檢查結(jié)果為甲狀腺乳頭狀癌患者86 例，剩余12 例患者為其他疾??；LBC 聯(lián)合BRAF V600E基因檢測結(jié)果為甲狀腺乳頭狀癌患者88 例， 剩余10 例為其他疾病。

2.2 兩種診斷方法特異度與敏感性對比

經(jīng)常規(guī)超聲檢查后， 特異度為25.00%（2/8）、敏感度為88.89%（80/90）、 準(zhǔn)確度為83.67%（82/98）；經(jīng)LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測后， 特異度為87.50%（7/8）、 敏感度為96.67%（87/90）、 準(zhǔn)確度為95.92%（94/98）。 相較常規(guī)超聲檢查，LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測結(jié)果更為準(zhǔn)確， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.063、4.063、8.018，P=0.044、0.044、0.005）。見表1、表2。

表1 常規(guī)超聲檢查的特異度與敏感性

表2 LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測的特異度與敏感性

3 討論

近些年， 對甲狀腺結(jié)節(jié)患者進(jìn)行超聲引導(dǎo)下行細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查樣本實(shí)施BRAF V600E 檢測進(jìn)行了大量研究，但研究結(jié)果卻具有較為顯著的差異。臨床研究文獻(xiàn)可知， 采取BRAF V600E 基因突變檢測能夠有效提升對甲狀腺結(jié)節(jié)診斷的準(zhǔn)確度， 且能夠在術(shù)前對病危病例進(jìn)行相應(yīng)篩查[8]。在對甲狀腺乳頭狀癌患者檢測時(shí)，研究文獻(xiàn)結(jié)果顯示，癌灶形態(tài)以及數(shù)量存在差異時(shí)， 中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和BRAF V600E 基因并無明顯的相關(guān)性， 表示采取BRAF V600E 基因突變狀態(tài)對甲狀腺乳頭狀癌患者臨床病例特征影響并不明確[9]。

作為一種操作簡便的診斷方式， 常規(guī)超聲對于甲狀腺乳頭狀癌的診斷敏感性較低， 并且較易受到患者病灶邊界、操作者水平、血流信號(hào)以及鈣化直徑等因素的影響[10]。采取LBC 檢測，則是將穿刺標(biāo)本沖洗到細(xì)胞保存液之中，在進(jìn)行多次的振蕩離心后，將標(biāo)本中的膠質(zhì)、 血細(xì)胞以及細(xì)胞碎片等相關(guān)干擾成分取出， 利用液基自動(dòng)制片設(shè)備進(jìn)行制片， 在玻片13 mm 直徑范圍內(nèi)黏附濃縮細(xì)胞和診斷成分， 進(jìn)一步保障診斷的準(zhǔn)確性[11-13]。 但需要注意的是，LBC 在制片時(shí)，存在離心和振蕩過程，可能會(huì)導(dǎo)致患者細(xì)胞簇分散，產(chǎn)生大量的單個(gè)細(xì)胞。并且該過程對細(xì)胞質(zhì)也會(huì)產(chǎn)生影響，增大核質(zhì)比例，產(chǎn)生大量裸核，對準(zhǔn)確度造成影響[14-16]。 因此單獨(dú)使用LBC 存在一定的問題。 而在甲狀腺乳頭狀癌中BRAF V600E 基因檢測突變較為常見，BRAF V600E 基因可以將細(xì)胞外刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞中，從而引起一系列的細(xì)胞反應(yīng)，例如對細(xì)胞分化、死亡、增殖、轉(zhuǎn)移等功能的調(diào)控[17]。 所以臨床中，常會(huì)選擇聯(lián)合兩種方式實(shí)施檢測，提高檢測準(zhǔn)確度。

該研究結(jié)果可知，LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測后，特異度為87.50%（7/8）、敏感度為96.67%（87/90）、準(zhǔn)確度為95.92%（94/98），優(yōu)于單一檢測結(jié)果。黃建新等[14]學(xué)者在相關(guān)研究中得出，聯(lián)合檢測的敏感度為97.37%、特異度為100.00%明顯優(yōu)于單一檢測，與該文所得結(jié)果相近。 因此，聯(lián)合檢測可以顯著提高甲狀腺乳頭狀癌患者的診斷準(zhǔn)確性， 避免錯(cuò)過最佳時(shí)間，彌補(bǔ)單純常規(guī)超聲的診斷不足[18]。

綜上所述， 對于甲狀腺乳頭狀癌患者采取LBC聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測鑒別價(jià)值高， 能夠提高甲狀腺乳頭狀癌診斷的準(zhǔn)確率，值得推廣。