TRPV1在小兒支氣管哮喘中的表達以及與B7-H3和miR-29c相關性分析

張志英，靳秀紅，張小寧，張向峰，羅青林，張松林

(鄭州大學附屬兒童醫院·河南省兒童醫院·鄭州兒童醫院 呼吸科，河南 鄭州450000)

小兒支氣管哮喘是臨床常見慢性呼吸道疾病，兒童肺功能尚未完全發育成熟，是導致支氣管哮喘發病加重的主要原因，且易造成反復發作[1]。病情加重可并發呼吸衰竭，對患兒生命安全造成威脅[2]。據流行病學調查顯示，隨全球氣溫變暖、空氣環境惡化，小兒支氣管哮喘發病率呈逐年上升趨勢。相關研究顯示，支氣管哮喘的發生與變態反應有關，且支氣管哮喘沒有特定時間限制，可在不同年齡段發病，但多數始發于4歲前[3-4]。相關資料顯示，哮喘嚴重程度不同，其病理結果、治療及預后均存有一定差異[5]。本研究對支氣管哮喘患兒TRPV1、B7-H3、miR-29c水平進行檢測，報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2019年4月—2020年4月在鄭州大學附屬兒童醫院收治的支氣管哮喘患兒172例作為研究對象，男94例，女78例，患兒年齡4-11歲，平均年齡7.5±2.1周歲。另選取同時段接受常規檢查的健康兒童172例為健康志愿者，男90例，女82例，兒童年齡5-10歲，平均年齡7.5±2.9周歲。所有研究兒童性別、年齡、病歷資料比較，無統計學差異，具有可比性。納入標準：所有患兒均符合中華醫學會對支氣管哮喘的診斷標準[6]；伴有急性喘氣、呼吸困難、咳嗽等癥狀出現。排除標準：①病歷資料不全兒童；②合并先天性心臟病，肺、肝腎等重要臟器功能不全者；③合并其他哮喘癥狀樣疾病或慢性肺疾病者；④合并血液系統、內分泌系統疾病者；⑤合并過敏性疾病者。本文研究內容均已告知患兒家屬知情同意，并獲得醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1肺功能檢測 使用肺活量檢測儀對患者FVC(用力肺活量)、FEVI(第一秒用力呼吸容積)、PEF(最大呼吸流量)進行檢測。

1.2.2指標檢測 抽取所有研究兒童空腹靜脈血液5 ml，在室溫下離心5 min，離心半徑為5 cm、轉速為3 000 r/min，分離上清至無RNA酶的EP管中，于4℃環境下再次離心10 min，離心半徑為5 cm、轉速為1 200 r/min，分離上層血清并收集上清至無RNA酶的EP管中，-70℃保存，待用。(1)酶聯免疫吸附法檢測IgE、IFN-γ、EOS、TRPV1、H7-B3水平。按試劑盒說明書操作。(2)使用RT-PCR檢測miR-29c表達：首先提取TTK細胞總RNA，對提取總RNA的純度、含量進行檢測，隨后逆轉錄，獲得cDNA后使用Primer5.0軟件設計引物，內參為U6。設置反轉錄反應條件：25℃ 10 min,40℃ 60 min,85℃ 5 min；設置擴增條件:94℃ 20 s、72℃ 30 s、60℃ 30 s,35個循環，采用2-△△Ct方法計算出需要檢測的miR-29c表達量。

1.3 統計學處理

采用SPSS21.0軟件分析。計量資料比較進行重復測量數據方差分析，多組間比較進行F檢驗，組間兩兩比較采用獨立t檢驗，P值<0.05為具有統計學意義的標準。相關性采用Pearson相關性分析。

2 結果

2.1 健康兒童與支氣管哮喘兒童肺功能比較

如表1所示，與健康志愿者相比，支氣管哮喘兒童FVC、FEVI、PEF水平明顯較低，具有統計學差異(P<0.05)。

表1 健康兒童與支氣管哮喘兒童肺功能比較

2.2 健康兒童與支氣管哮喘兒童TRPV1、B7-H3、miR-29c表達比較

如表2所示，與健康志愿者相比，支氣管哮喘患兒TRPV1、B7-H3、miR-29c水平較高，具有統計學差異(P<0.05)。

表2 健康兒童與支氣管哮喘兒童TRPV1、B7-H3、miR-29c表達比較

2.3 兩組兒童哮喘相關細胞因子水平比較

如表3所示，與健康志愿者相比，支氣管哮喘兒童血清IgE、EOS水平較高，INF-γ水平較低，具有統計學差異(P<0.05)。

表3 兩組兒童哮喘相關細胞因子水平比較

2.4 不同病情嚴重程度支氣管哮喘患兒TRPV1、B7-H3、miR-29c表達比較

如表4所示，與急性期患兒相比，緩解期患兒TRPV1、B7-H3、miR-29c表達均較低，具有統計學差異(P<0.05)。

表4 不同病情嚴重程度支氣管哮喘TRPV1、B7-H3、miR-29c表達比較

2.5 TRPV1、B7-H3、miR-29c與小兒支氣管哮喘的相關性分析結果

如圖1所示，TRPV1、B7-H3呈正相關(r=0.254，P=0.001)；TRPV1、miR-29c呈正相關(r=0.286，P=0.001)；B7-H3、miR-29c呈正相關(r=0.214，P=0.004)。

圖1 TRPV1、B7-H3、miR-29c表達相關性圖

3 討論

支氣管哮喘作為常見兒科呼吸道疾病，由多種細胞及細胞因子參與[7]。哮喘已經成為全世界范圍內重要的公共衛生問題[8-9]。相關研究顯示，哮喘形成遺傳因素為主要致病原因，環境因素為重要外因，因此，對支氣管哮喘進行正確診斷及評估具有重要意義[10-11]。

哮喘由多種細胞和細胞因子共同參與[12]。香草醛亞型1受體又稱辣椒素受體，具有離子通道的特性，屬于瞬時感受電位離子通道超家族并廣泛存在于哺乳動物呼吸系統[13]。相關研究表明，TRPV1在支氣管哮喘兒童外周血中呈異常高表達。同時，TRPV1在支氣管狹窄、氣管黏膜水腫、咳嗽反射等方面發揮重要作用[14]。TRPV通道激活后可促進細胞鈣離子內流，TRPV1在小兒支氣管哮喘發病調控過程中發揮重要作用[15-16]。

支氣管哮喘的發生、發展與炎癥和免疫反應具有密切聯系[17]。B7-H3作為共刺激分子B7家族成員，具有雙向調節T細胞作用。在急性期、緩解期患兒B7-H3水平呈異常高表達，且急性期高于緩解期；同時研究顯示，與健康兒童相比，支氣管哮喘患兒肺功能較低，且急性期低于緩解期，并與肺功能指標呈負相關[18-19]。本文研究結果顯示，通過B7-H3水平檢測對支氣管哮喘患兒病情評估具有一定參考價值。

研究資料表明，miRNA通過對下游靶基因調控參與機體生長發育、疾病發生等多種生理病理過程[20]。miR-29是與感染疾病具有密切聯系的miRNA家族，miR-29c在肺細胞感染患者外周血中呈異常升高，提示miR-29c水平變化與小兒支氣管哮喘的發生及其嚴重程度具有相關聯系[20-21]。