超臨界萃取技術(shù)在提取蒲公英抗衰老成分中的應(yīng)用

王 雪

(揚(yáng)州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 化學(xué)工程學(xué)院， 江蘇 揚(yáng)州 225127)

1 研究背景

蒲公英全草含蒲公英甾醇、膽堿、菊糖、果膠等。味苦、甘，性寒，具清熱解毒，消腫散結(jié)，利尿通淋之功效清熱解毒，利尿散結(jié)。可治急性乳腺炎，淋巴腺炎，瘰疬，疔毒瘡腫，急性結(jié)膜炎，感冒發(fā)熱，急性扁桃體炎，急性支氣管炎，胃炎，肝炎，膽囊炎，尿路感染。

苦苣根為菊科植物苦苣的根，具有降糖、降脂、清熱退蒸之功效。治骨蒸、痢疾澀、平入肺、大腸二經(jīng)。

紫蘇葉中含揮發(fā)油類(lèi)、黃酮和花色苷類(lèi)、花青素、酚酸類(lèi)、苷類(lèi)、三萜類(lèi)和甾體等多種化學(xué)成分，紫蘇葉提取物表現(xiàn)出一定的抗炎活性。具有散寒解表，宣肺止咳，理氣和中，安胎，解毒[1-3]。

隋洪玉等人[4]用乙醇作溶劑，將蒲公英加熱煮沸一定的時(shí)間，以提取其所含的黃酮成分，這種方法，適用于有效成分能溶于乙醇，且對(duì)濕熱穩(wěn)定的藥材，而對(duì)藥材中一些熱敏性的組份損失較多。

齊白羽等人[5]以蒲公英為原料，利用超聲波提取法來(lái)提取蒲公英的水提物。這種方法是主要利用超聲增大物質(zhì)分子運(yùn)功頻率和速度，增加溶劑穿透力，提高藥物溶出速度和溶出次數(shù)，縮短提取時(shí)間的浸提方法。

超臨界流體萃取技術(shù)是目前國(guó)際上用于提取分離的先進(jìn)技術(shù)之一。原理是利用超臨界流體具有接近于液體的密度和類(lèi)似于液體的溶解能力，同時(shí)還具有類(lèi)似于氣體的高擴(kuò)散性、低黏度、低表面張力等特性進(jìn)行提取分離。現(xiàn)廣泛應(yīng)用于中藥天然產(chǎn)物的提取領(lǐng)域[6]。本文采用超臨界萃取法從蒲公英、苦苣根和紫蘇葉中提取有效成分。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 原料與試劑

蒲公英、苦苣根、紫蘇葉(藥用級(jí)，江蘇宜草生物科技有限公司)；硼砂、無(wú)水乙醇(分析純，江蘇宜興化學(xué)試劑有限公司)；食品級(jí)二氧化碳(天津市興盛氣體有限公司)。

2.2 設(shè)備

H8422超細(xì)中藥磨粉機(jī)(河北德科機(jī)械科技有限公司)；SFE120-50-02超臨界萃取儀(南通儀創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；UV-754紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津有限公司)。

2.3 實(shí)驗(yàn)步驟

(1) 粗提

將一定比例的蒲公英、苦苣根、紫蘇葉粉碎后，選20～40目的粉末，加入適量的2%硼砂水溶液，硼砂水溶液的用量為蒲公英、苦苣根、紫蘇葉質(zhì)量之和的2.0～2.5倍，浸泡1～2 h后，加入適量體積分?jǐn)?shù)為20～30%的乙醇溶液回流提取5～6 h后，過(guò)濾，濾液調(diào)pH至5.0～6.0后，濃縮得粗提物。

(2) 萃取

將上述粗提物加入萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，萃取壓力為26～28 MPa，萃取溫度為45～48 ℃，CO2流量為50～55 L·h-1，萃取時(shí)間為2～3 h，分離釜I溫度為40～42 ℃，壓力為8～10 MPa，分離釜II溫度為35～38 ℃，壓力為5～6 MPa。得蒲公英復(fù)方提取物，見(jiàn)表1。

2.4 黃酮含量的測(cè)定

以蘆丁溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，用紫外可見(jiàn)光光譜掃描[7，8]，確定確定萃取物中黃酮類(lèi)物質(zhì)的濃度。

2.4.1 吸收波長(zhǎng)的選擇和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用加蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.00 mL的溶液為空白參比，標(biāo)準(zhǔn)溶液在300～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外可見(jiàn)光光譜掃描，得到最大吸收波長(zhǎng)，最終確定黃酮的測(cè)定波長(zhǎng)為510 nm。

表1 不同配方下的萃取物Tab. 1 The extracts under different formulations

在最大吸收波長(zhǎng)510 nm處測(cè)得吸光度值，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

2.4.2 蒲公英提取物中黃酮含量的測(cè)定

分別配制萃取物A-F的60%乙醇-水溶液，搖勻，放置20 min后用紫外可見(jiàn)光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量，測(cè)得的吸光度對(duì)照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，確定其濃度。

2.5 抗衰老效果檢測(cè)

本文產(chǎn)品A-F的抗衰老效果，采用D-半乳糖致衰老小鼠模型進(jìn)行藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)。

D-半乳糖溶液配置：D-半乳糖溶于生理鹽水中，配成濃度為20 mg·mL-1。(腹腔注射)

維生素E(VE)溶液配置：用植物油配置成20 mg·mL-1。(灌胃給藥)

模型組：腹腔注射D-半乳糖溶液，給藥量100 mg·kg-1·d-1。

正常組：腹腔注射等量的生理鹽水。

VE組：腹腔注射D-半乳糖溶液，給藥量100 mg·kg-1·d-1，同時(shí)灌胃給藥VE溶液，給藥量100 mg·kg-1·d-1。

產(chǎn)品A-F組：腹腔注射D-半乳糖溶液，給藥量100 mg·kg-1·d-1，同時(shí)分別灌胃給藥相應(yīng)的產(chǎn)品A-F溶液，給藥量200 mg·kg-1·d-1。

3 結(jié)果與討論

3.1 黃酮總量的測(cè)定

3.1.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1，從圖1可知，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與吸光度A成線性關(guān)系[7]，方程為y=157.33A+3.923 7，相關(guān)系數(shù)為0.994 6。

圖1 蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.1.2 黃酮總量的測(cè)定

在2.4.2配制的溶液中取6個(gè)樣品，每個(gè)樣品5 mL，用紫外分光光度計(jì)測(cè)出吸光度，根據(jù)圖1標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出黃酮含量。

表2 提取物中黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量Tab. 2 The content of flavonoids in the extracts

從表2可知，蒲公英5份，苦苣根1份，紫蘇葉0.1份時(shí)提取物中黃酮類(lèi)物質(zhì)含量最高。

3.2 抗衰老性能檢測(cè)

本文測(cè)試小鼠血清、腦中SOD、CAT、GSH-Px、T-Aoc酶活力與MDA含量，具體實(shí)驗(yàn)方法本文采用中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)枺篊N201710674001.8中實(shí)施例2記載的方法進(jìn)行[8]。

結(jié)果見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與正常組比較，模型組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，與模型組比較，VE組與產(chǎn)品A-F組也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab. 3 The results of pharmacological experiments

4 結(jié)論

本文主要以蒲公英、苦苣根、紫蘇葉為主要原料，利用超臨界萃取法分離提取混合物中的有效成分，科學(xué)實(shí)驗(yàn)證明：蒲公英、紫蘇葉、苦苣根以一定的比例混合，有希望研究出蒲公英保健品。本文研究了各種配比，蒲公英苦苣根紫蘇葉比例不一樣，都可以研制成功，其中蒲公英5份，苦苣根1份，紫蘇葉0.1份的萃取物測(cè)試性能最好。蒲公英、紫蘇葉、苦苣根中的有效成分，均有非常顯著的抗氧化、抗衰老、抗病毒等作用，在各個(gè)領(lǐng)域應(yīng)用非常廣泛，因此蒲公英有希望被發(fā)展為保健品。