不同種質金銀花發育過程中黃酮類成分含量變化規律研究

黃文靜，熊樂文，張龍霏, 2，張 芳, 2，韓翔宇，張永清, 2，張 利，楊寒冰

不同種質金銀花發育過程中黃酮類成分含量變化規律研究

黃文靜1，熊樂文1，張龍霏1, 2，張 芳1, 2，韓翔宇1，張永清1, 2*，張 利3，楊寒冰3

1.山東中醫藥大學，山東 濟南 250355 2.山東省高等學校中藥資源學重點實驗室，山東 濟南 250355 3.山東中平藥業有限公司，山東 平邑 273300

建立一種同時測定金銀花Flos 20種黃酮類成分含量的方法，并對含量結果進行多元統計分析，探討不同種質金銀花發育過程中黃酮類成分的含量變化規律，為優良品種選育與金銀花藥材質量控制提供技術支撐。建立基于HPLC-ESI-MS/MS同時測定金銀花20種黃酮類成分含量的方法，測定5種種質金銀花不同發育時期黃酮類成分含量，利用主成分分析（principal components analysis，PCA）和正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least-squares discrimination analysis，OPLS-DA）研究其變化規律，并篩選差異性活性成分。建立的HPLC-ESI-MS/MS方法重復性好、穩定性好，5種種質金銀花總黃酮含量：華金6號＞九豐一號＞四季花＞紅白忍冬＞華金3號，木犀草苷含量：華金6號＞紅白忍冬＞九豐一號＞四季花＞華金3號；在各種質金銀花發育過程中，木犀草苷和總黃酮含量在二白期或大白期最高；通過多元統計分析確定了不同種質間存在9個潛在差異性黃酮標志物（野漆樹苷、似梨木雙黃酮、忍冬苷、水仙苷、蘆丁、異鼠李素-3--葡萄糖苷、圣草酚-7--葡萄糖苷、芹菜素和山柰酚-3--蕓香糖苷），不同發育時期有7個差異性黃酮標志物（苜蓿素、野漆樹苷、香葉木素、芹菜素-7--葡萄糖苷、金圣草黃素、紫云英苷和圣草酚-7--葡萄糖苷）。金銀花黃酮類成分組成與含量既決定于種質又受發育程度的影響，選育優良品種、確定合理采收時期是提高金銀花藥材黃酮類成分含量的有效途徑。

金銀花；黃酮；HPLC-ESI-MS/MS；木犀草苷；紅白忍冬；野漆樹苷；似梨木雙黃酮；忍冬苷；水仙苷；蘆丁；異鼠李素-3--葡萄糖苷；圣草酚-7--葡萄糖苷；芹菜素；山柰酚-3--蕓香糖苷；苜蓿素；香葉木素；芹菜素-7--葡萄糖苷；金圣草黃素；紫云英苷

金銀花為忍冬科植物忍冬Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花，屬大宗常用中藥材。可清熱解毒、疏散風熱，用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病發熱等病癥[1]。現代研究證明，金銀花含有揮發油、黃酮、三萜、有機酸及無機元素等成分[2]，具有抗炎、抗腫瘤、保肝、抗病毒等藥理活性，防治常見病、多發病、傳染性疾病等功效卓著[3-5]。

由于金銀花用途廣泛，目前主要依靠人工栽培滿足需求，山東、河南、河北等地均有大面積種植。經長期栽培后，金銀花植株的遺傳特性發生明顯變異，形成了不同的變種變型、生態型、農家品種、林木良種、農作物品種及植物新品種等種質[6-9]。種質作為影響中藥材質量和產量的最重要因素，歷來備受關注，選育優良品種也是目前提高金銀花藥材產量與質量的有效途徑，選育出的一些品種已經在生產中進行了推廣種植[10]。藥用器官發育程度對藥材質量也有顯著影響，確定合理采收期是藥用植物栽培重要任務之一，在不同發育時期采收的金銀花藥材無論性狀還是活性成分含量均有明顯差異[11]。

黃酮類是金銀花主要活性成分之一，其中木犀草苷含量被《中國藥典》作為金銀花藥材質量控制指標[1]。但在實際生產中，金銀花木犀草苷含量常有達不到藥典標準要求的情況發生[12]。探討不同種質金銀花各發育期黃酮類成分含量變化規律及其差異標志物，對于選擇優良種質、確定合理采收期、提高金銀花藥材質量具有重要的參考價值。為此，本實驗在山東省平邑縣金銀花道地產區，比較分析了華金3號、華金6號、九豐一號、四季花和紅白忍冬5個種質金銀花各發育期中20種黃酮類成分的含量，并分析了其差異標志物。

1 材料與儀器

1.1 儀器

Agilent 1260 HPLC/6420型串聯四極桿質譜儀（美國Agilent公司）；LE204E型、XS105DU型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；5810R型高速冷凍離心機（德國Eppendorf公司）；KQ-500DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；GLF-04密封型手提式粉碎機（江陰市康和機械制造有限公司）；BAG-9246A型電熱鼓風干燥箱（上海市齊欣科學儀器有限公司）。

1.2 試劑

蘆丁（批號Y16M9S61523，質量分數≥98%）、圣草酚-7--葡萄糖苷（批號Z25J10H88478，質量分數≥95%）、金絲桃苷（批號Y05J8X39277，質量分數≥98%）、異槲皮苷（批號P25J9F65872，質量分數≥98%）、木犀草苷（批號Y13J10H93050，質量分數≥98%）、忍冬苷（批號P05J8F39278，質量分數≥98%）、山柰酚-3--蕓香糖苷（批號Y22J11H119335，質量分數≥98%）、紫云英苷（批號Y15S9H70466，質量分數≥98%）、水仙苷（批號S08A8D33447，質量分數≥98%）、野漆樹苷（批號Z13M10X82680，質量分數≥98%）、芹菜素-7--葡萄糖苷（批號Y29M10H84489，質量分數≥98%）、苜蓿苷（批號X27A11L122499，質量分數≥92%）、木犀草素（批號C29N10Q104574，質量分數≥98%）、槲皮素（批號C09S8Y43412，質量分數≥98%）、金圣草黃素（批號Y10J11W118163，質量分數≥98%）、香葉木素（批號T22F7X9844，質量分數≥98%）、芹菜素（批號Y27A6C1，質量分數≥98%）、苜蓿素（批號P26O9S73550，質量分數≥96%）、似梨木雙黃酮（批號X27A11L122500，質量分數≥98%）均購自上海源葉生物科技有限公司；異鼠李素- 3--葡萄糖苷（批號CFN99757，質量分數≥98%）購自Chemfaces公司；乙腈、甲醇、甲酸，均為色譜純，購自美國Fisher Scientific公司。

1.3 材料

不同種質各發育時期金銀花于2020年5月21日，采集平邑方圓藥業有限公司忍冬種植基地（平邑縣鄭城鎮）種植的不同種質金銀花各發育時期花蕾或花。種質有忍冬華金3號（山東省中草藥新品種）、華金6號（國家植物新品種）、九豐一號（國家林木良種）、四季花（農家品種）、紅白忍冬（忍冬變種等5種；發育時期分為米蕾期、三青期、二白期、大白期、銀花期和金花期。采摘后的花蕾或花，曬干，各樣品以粉碎機粉碎，過60目篩，置干燥器中備用。

不同種質金銀花原植物均經山東中醫藥大學張永清教授鑒定，為忍冬科植物忍冬Thunb.及紅白忍冬var.(P.Watson) Baker。忍冬（華金3號）和紅白忍冬各發育時期花的形態變化如圖1所示。

圖1 忍冬(華金3號，a) 和紅白忍冬(b)各發育時期花部形態

2 方法

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取20種黃酮類成分對照品適量，用甲醇溶解配制成對照品溶液。分別取對照品溶液適量，配制成混合對照品溶液，各成分質量濃度分別為蘆丁49.0 μg/mL，圣草酚-7--葡萄糖苷5.2 μg/mL，金絲桃苷6.9 μg/mL，異槲皮苷24.6 μg/mL，木犀草苷23.7 μg/mL，忍冬苷42.7 μg/mL，山柰酚-3--蕓香糖苷10.7 μg/mL，紫云英苷2.0 μg/mL，水仙苷24.4 μg/mL，野漆樹苷21.0 μg/mL，異鼠李素-3--葡萄糖苷1.9 μg/mL，芹菜素-7--葡萄糖苷7.2 μg/mL，苜蓿苷2.7 μg/mL，木犀草素19.9 μg/mL，槲皮素0.9 μg/mL，金圣草黃素1.3 μg/mL，香葉木素0.3 μg/mL，芹菜素1.3 μg/mL，苜蓿素0.9 μg/mL，似梨木雙黃酮13.6 μg/mL。以上溶液儲存于4 ℃條件下，備用。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱定金銀花藥材粉末0.2 g，精密加入80%甲醇溶液6 mL，密塞，稱定質量，超聲（溫度50 ℃、功率250 W、40 kHz）處理80 min，然后放置于工作臺上冷卻至室溫，補足損失質量，14 000 r/min離心10 min，取上清液，過0.22 μm有機濾膜即得。

2.3 色譜和質譜條件

2.3.1 色譜條件 Hola C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）；進樣量2 μL；流動相A相為0.08%甲酸水，B相為0.08%甲酸乙腈；洗脫梯度為0～5 min，10%～23% B；5～25 min，23%～31% B；25～35 min，31%～80% B；35～40 min，80% B；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃。

2.3.2 質譜條件 電噴霧離子源（ESI源），采用MRM正、負離子模式切換檢測；毛細管電壓：正負離子模式均為4000 V；干燥氣溫度為300 ℃；干燥氣體積流量為11.0 L/min；霧化氣壓力為15.0 psi（103.4 kPa）；掃描范圍100～1200。在此質譜條件下，20種黃酮類成分的保留時間和質譜參數等特征詳見表1。

在上述質譜條件下，各黃酮類成分對照品的MRM色譜如圖2所示。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性方程的繪制 精密吸取“2.1”項下混合對照品溶液，用甲醇連續稀釋，以確定建立標準曲線所需的濃度。按“2.3.1”項下條件進行測定，以對照品峰面積（）和相對應濃度（）為縱、橫坐標，繪制標準曲線。分別以信噪比（）為3和10倍計算對照品檢測限（LOD）和定量限（LOQ），結果見表2。

2.4.2 精密度試驗 取已知濃度混合對照品溶液，在1 d內連續進樣6次計算日內精密度，連續3 d進樣計算日間精密度，以RSD值評估精密度。20種黃酮類成分的精密度RSD≤3.26%。

2.4.3 重復性試驗 配制同一樣品的6個重復樣本進行分析，以質量分數RSD評估重復性。20種黃酮類成分的重復性RSD≤3.71%。

2.4.4 穩定性試驗 取同一樣品溶液，分別在室溫下放置0、2、4、8、12、24、48 h后進行分析，以RSD值評估樣品溶液的穩定性。待測成分穩定性RSD≤3.47%，表明樣品溶液在48 h內基本穩定。

表1 金銀花20種黃酮類成分特征

2.4.5 加樣回收率試驗 稱取已測定各黃酮類成分含量的金銀花樣品粉末6份，分別加入已知濃度的對照品溶液進行分析，計算各成分的平均回收率及RSD值。結果見表2。20種黃酮類成分的加樣回收率在92.8%～107.4%，回收率RSD在0.46%～3.05%。

2.4.6 樣品含量測定 取不同種質各發育期金銀花粉末，按“2.2”項下方法制備成供試品溶液，按“2.3”項下條件對供試品溶液進行成分含量測定，每組樣品平行測定3次。

3 結果與分析

3.1 不同種質金銀花各發育期黃酮成分含量狀況

華金3號、華金6號、九豐一號、四季花、紅白忍冬等不同種質金銀花各發育時期中的黃酮類成分含量如圖3所示。不同種質金銀花所含黃酮類成分差異較大，不同生長發育時期也有明顯差異。對5個種質而言，黃酮類成分均以蘆丁含量最高，香葉木素含量最低，華金3號、華金6號、九豐一號和四季花含量最高的5種黃酮類成分種類與順序完全相同，從高到低依次為蘆丁、木犀草苷、異槲皮苷、忍冬苷和水仙苷；紅白忍冬與之相比具有較大差異，其中蘆丁、木犀草苷、異槲皮苷、山柰酚-3--蕓香糖苷和木犀草素含量排在前5位。總黃酮含量量結果顯示：華金6號＞九豐一號＞四季花＞紅白忍冬＞華金3號，木犀草苷含量顯示：華金6號＞紅白忍冬＞九豐一號＞四季花＞華金3號。

1-蘆丁 2-圣草酚-7-O-葡萄糖苷 3-金絲桃苷 4-異槲皮苷 5-木犀草苷 6-忍冬苷 7-山柰酚-3-O-蕓香糖苷 8-紫云英苷 9-水仙苷 10-野漆樹苷 11-異鼠李素-3-O-葡萄糖苷 12-芹菜素-7-O-葡萄糖苷 13-苜蓿苷 14-木犀草素 15-槲皮素 16-金圣草黃素 17-香葉木素 18-芹菜素 19-苜蓿素 20-似梨木雙黃酮

表2 金銀花20種黃酮類成分方法學考察結果

金銀花不同生長發育時期木犀草苷含量變化范圍：華金3號385.86～843.12 μg/g，華金6號490.66～967.96 μg/g，九豐一號466.78～932.46 μg/g，四季花420.65～885.42 μg/g，紅白忍冬476.43～942.21 μg/g，含量變化趨勢均是先升高后降低，米蕾期含量最低，大白期含量最高（圖4-a）。總黃酮含量變化范圍：華金3號1976.24～3267.38 μg/g，華金6號3063.03～4483.34 μg/g，九豐一號3164.62～4534.84 μg/g，四季花2277.26～4196.21 μg/g，紅白忍冬2563.56～3461.03 μg/g，也呈現先升高后降低的變化規律，華金3號和九豐一號于大白期達到最大值，四季花和紅白忍冬于二白期達到峰值，其次為大白期，華金6號總黃酮含量在二白期至銀花期之間變化趨勢相對平緩（圖4-b）。

同時，經研究發現，所測苷元類成分（P14～P20）隨著花器官發育，含量均不斷降低，且金銀花中所含苷類成分明顯高于苷元類，推測在花的發育過程中，苷元不斷結合糖苷基形成苷類成分。此外，木犀草苷和紫云英苷、忍冬苷和山柰酚-3--蕓香糖苷、金絲桃苷和異槲皮苷以及金圣草黃素和香葉木素等同分異構體在發育期間含量變化規律大致相同，說明異構體之間在代謝過程中存在一定的相互依存、相互促進或抑制的關系。

3.2 多變量統計分析

3.2.1 主成分分析（principal component analysis，PCA）分析 將不同種質金銀花各發育期黃酮類成分含量進行PCA分析，結果見圖5。

圖5中點代表樣品，顏色表示分組，箭頭代表20種黃酮類成分，其方向代表黃酮與主成分的相關性，長度代表原始數據對主成分的貢獻度。由圖5-a可知，紅白忍冬與其他種質明顯分離，說明紅白忍冬所含黃酮類成分與其他種質有明顯差異。蘆丁、異槲皮苷、山柰酚-3--蕓香糖苷、苜蓿苷、木犀草素、槲皮素、金圣草黃素、香葉木素和芹菜素對主成分1有較高貢獻度，且均呈正相關；圣草酚-7--葡萄糖苷、金絲桃苷、忍冬苷、野漆樹苷和芹菜素- 7--葡萄糖苷對主成分2貢獻較高。圖5-b顯示，各發育期中大白期、銀花期和金花期之間有重疊，而米蕾期、三青期和二白期則明顯分離，說明大白期至金花期的黃酮類成分相似性大，而米蕾期至二白期則有明顯差異。圣草酚- 7--葡萄糖苷、芹菜素-7--葡萄糖苷、木犀草素、金圣草黃素、香葉木素和苜蓿素對主成分1貢獻度較高，蘆丁、異槲皮苷、忍冬苷、水仙苷、異鼠李素-3--葡萄糖苷和芹菜素對主成分2貢獻度較高。

H3-華金3號 H6-華金6號 JF-九豐一號 SJ-四季花 HB-紅白忍冬 P1-蘆丁 P2-圣草酚-7-O-葡萄糖苷 P3-金絲桃苷 P4-異槲皮苷 P5-木犀草苷 P6-忍冬苷 P7-山柰酚-3-O-蕓香糖苷 P8-紫云英苷 P9-水仙苷 P10-野漆樹苷 P11-異鼠李素-3-O-葡萄糖苷 P12-芹菜素-7-O-葡萄糖苷 P13-苜蓿苷 P14-木犀草素 P15-槲皮素 P16-金圣草黃素 P17-香葉木素 P18-芹菜素 P19-苜蓿素 P20-似梨木雙黃酮

a-木犀草苷 b-總黃酮

3.2.2 正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）分析 將不同種質金銀花各發育期黃酮類成分含量數據歸一化、標準化處理后，進行OPLS-DA分析，以確定導致組間差異的黃酮類成分。OPLS-DA得分圖如圖6所示。

圖6顯示，模型（圖6-a）的2、2和Q2分別為0.989、0.853和0.816，模型（圖6-b）的2X、2和2分別為0.981、0.597和0.545，表明模型穩定性和可靠性較好。同時，由圖6-a可知，各個種質均可劃分為不同組別，說明不同種質金銀花所含黃酮類成分存在較大差異，且紅白忍冬與其他種質分布在不同側，進一步說明了紅白忍冬作為忍冬變種與其他種質差異顯著。不同發育期得分圖顯示，各時期均能被明顯分開，說明金銀花在生長發育過程中黃酮類成分的代謝情況發生了明顯變化，存在差異性成分。利用所建OPLS-DA模型進行了200次隨機排列測試，以評估其有效性，結果如圖7所示。

圖7顯示，原始模型的2和2值（右端）均高于置換模型中的2和2值（左端），并且置換的2點的回歸直線與垂直軸相交，低于零，表明所建立的OPLS-DA模型具有較高的擬合優度和可預測性。根據變量重要性投影，得到變量權重重要性排序（variable importance in projection，VIP）預測值，篩選出VIP＞1.0的成分并進行檢驗（＞0.05），獲得不同種質金銀花黃酮類成分差異標志物共9個（圖8-a），分別是野漆樹苷、似梨木雙黃酮、忍冬苷、水仙苷、蘆丁、異鼠李素-3--葡萄糖苷、圣草酚-7--葡萄糖苷、芹菜素和山柰酚-3--蕓香糖苷。此外還獲得7個差異性成分，分別為苜蓿素、野漆樹苷、香葉木素、芹菜素-7--葡萄糖苷、金圣草黃素、紫云英苷和圣草酚-7--葡萄糖苷，可用來識別金銀花不同生長發育期（圖8-b）。

a-不同種質 b-不同發育期

a-不同種質 b-不同發育期

a-不同種質 b-不同發育期

a-不同種質 b-不同發育期

4 討論

前期實驗優化了金銀花黃酮類成分的提取條件，確定最佳提取工藝為80%甲醇與液料比30∶1 （mL/g）、溫度50 ℃、時間80 min。在此工藝的基礎上采用HPLC-ESI-MS/MS分析方法，系統研究了5個金銀花種質在不同生長發育階段所含黃酮類成分含量變化規律。發現金銀花黃酮類成分含量既決定于種質，也受發育時期的影響。含量測定結果表明，不同種質金銀花黃酮類成分存在較大差異，總黃酮含量顯示：華金6號＞九豐一號＞四季花＞紅白忍冬＞華金3號，木犀草苷含量顯示：華金6號＞紅白忍冬＞九豐一號＞四季花＞華金3號。上述結果提示，華金6號金銀花黃酮類成分含量高，尤其是在木犀草苷含量方面具有顯著優勢，未來開發利用前景廣闊。此外，隨著藥用器官的生長發育，其內在次生代謝產物也處于動態變化中。金銀花植株花期短，不同生長發育階段花中所含黃酮類成分含量差異較大。總黃酮和木犀草苷含量的變化規律基本相同，均是先升高后降低，于二白期或大白期達到峰值，此時采收的金銀花木犀草苷含量均可達到國家藥典0.05%的要求，這與“摘將開花蕾”的傳統經驗基本相符。

木犀草苷是金銀花中主要的黃酮類成分，因其具有鄰二酚羥基特殊結構而被賦予了明顯的藥理活性，已被證明的有抗菌、抗病毒、抗氧化、解熱抗炎、抗腫瘤[13-16]等，這些活性與金銀花清熱解毒的傳統功效鍥合度很高，因此從《中國藥典》2005年版開始，就將其作為評價金銀花質量的指標之一，但在《中國藥典》2020年版修訂過程中，有人曾建議將該指標取消[17]，主要原因是其含量較低且不達標的金銀花藥材數量較多。但木犀草苷含量與金銀花傳統功效密切相關，并且是區分金銀花與山銀花的有效指標，因此國家藥典最終沒有將該指標取消。國家藥典是藥材質量的指揮棒，設立的質量控制指標具有很強的導向作用。藥典要求金銀花綠原酸含量不得低于1.5%、總酸含量不得低于3.8%，容易被誤解為綠原酸含量越高越好，而金銀花花蕾越幼嫩綠原酸、總酸含量越高，結果實際生產中金銀花采收時間越來越早，致使木犀草苷含量越來越低。本研究結果提示，為有效控制金銀花藥材質量，采收期不能盲目提前。另一方面，許多藥用植物同一器官因發育程度不同，所含藥效物質不同，而被分列為不同的藥材，如槐米與槐花、枳實與枳殼等。研究發現，開放后的金銀花中野漆樹苷、圣草酚-7--葡萄糖苷、紫云英苷、芹菜素-7--葡萄糖苷等成分含量較高，但木犀草苷含量降低，后續應考慮開放金銀花的開發利用問題。

本實驗首次建立了HPLC-ESI-MS/MS同時測定金銀花中20種黃酮類成分含量的方法，遠超前人同時測定金銀花黃酮類成分的種類[18-19]，為全面表征金銀花黃酮類成分變化規律、評價金銀花藥材質量建立了實用、可行的技術平臺。金銀花黃酮類成分種類眾多，在其生物合成過程中存在著千絲萬縷的聯系，通過含量測定可以幫助了解其合成積累規律，為金銀花種質資源評價、良種選育及確定適宜采收期提供參考，對于控制金銀花藥材質量具有重大意義。后續本課題組還要結合基因組學、轉錄組學和代謝組學等技術與方法，研究金銀花黃酮類成分合成與代謝機制，為金銀花道地基因保護、次生代謝調控提供技術支撐。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on content variation of flavonoids in different germplasm during development of

HUANG Wen-jing1, XIONG Le-wen1, ZHANG Long-fei1, 2, ZHANG Fang1, 2, HAN Xiang-yu1, ZHANG Yong-qing1,2, ZHANG Li3, YANG Han-bing3

1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China 2.Shandong Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Resources, Jinan 250355, China 3.Shandong Zhongping Pharmaceutical Co.Ltd., Pingyi 273300, China

To establish a method for simultaneous determination of 20 flavonoids inFlos (LJF), and multivariate statistical analysis of the content results was carried out to explore the content changes of flavonoids in different germplasm during the development of LJF, providing technical support for the breeding of superior varieties and quality control of LJF.To establish a method for simultaneous determination of 20 flavonoids in LJF based on HPLC-ESI-MS/MS, and to determine the content of flavonoids in five germplasm LJF at different development stages.Principal components analysis (PCA) and orthogonal partial least-squares discrimination analysis (OPLS-DA) were used to analyze the change rule, and the different active components were screened.The established HPLC-ESI-MS/MS method has good repeatability and stability.The contents of total flavonoids in LJF of five germplasms were as follows: “Huajin No.6” > “Jiufeng No.1” > “Sijihua” > “Hongbairendong” > “Huajin No.3”, and luteoloside content was as follows: “Huajin No.6” > “Hongbairendong” > “Jiufeng No.1” > “Sijihua” > “Huajin No.3”; The contents of luteoloside and total flavonoids were the highest in the second white stage or big white stage.Through multivariate statistical analysis, it was determined that there were nine potential differential flavonoid markers (rhoifolin, ochnaflavone, lonicerin, narcissoside, rutin, isorhamnetin-3--glucoside, eriodictyol-7--glucoside, apigenin, and kaempferol-3--rutinoside) among different germplasm and seven differential flavonoid markers (tricin, rhoifolin, diosmetin, apigenin-7--glucoside, chrysoeriol, astragaloside, and eriodictyol-7--glucoside) at different development stages.The composition and content of flavonoids in LJF are determined by germplasm and development period.Breeding excellent varieties and determining reasonable harvest time are effective ways to improve the content of flavonoids in LJF.

; flavonoids; HPLC-ESI-MS/MS; luteolin;var.(P.Watson) Baker; rhoifolin; arachinoside; ochnaflavone; lonicerin; narcissoside; rutin; isorhamnetin-3--glucoside; eriodictyol-7--glucoside; apigenin; aempferol-3--rutinoside; tricin; diosmetin; apigenin-7--glucoside; chrysoeriol; astragaloside

R286.2

A

0253 - 2670(2022)10 - 3156 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.10.026

2021-11-09

山東省重大科技創新工程項目（2019JZZY011020）；山東省高校中藥質量控制與全產業鏈建設協同創新中心（CYLXTCX2020）；國家重點研發計劃項目（2017YFC1701503）；山東省重點研發計劃“中醫經方精準化關鍵技術示范研究”課題（2016CYJS08A01）；國家自然科學基金資助項目（81903750）

黃文靜，在讀碩士，從事中藥資源與質量控制研究。E-mail: hwj19862146665@163.com

通信作者：張永清，博士，教授，博士生導師，從事中藥資源與質量控制研究。E-mail: zyq622003@126.com

[責任編輯 時圣明]