陜西某羊場莎能奶山羊球蟲分離鑒定及感染情況

高嘉淇，王逸群，王玥婷，袁晨陽，梁高星，李 媛，王 一，宋軍科

(西北農林科技大學 動物醫學院，陜西楊凌 712100)

山羊球蟲病是由寄生于山羊腸道的艾美耳科(Eimeiridae)艾美耳屬(Eimeria)的多種球蟲引起的一種寄生性原蟲病。可寄生于山羊腸道的球蟲種類繁多，目前國內外公認的山羊球蟲主要有9種，分別是雅氏艾美耳球蟲(E.ninakohlyakimovae)、阿氏艾美耳球蟲(E.arloingi)、柯氏艾美耳球蟲(E.christenseni)、艾氏艾美耳球蟲(E.alijevi)、家山羊艾美耳球蟲(E.hirci)、約氏艾美耳球蟲(E.jolchijevi)、阿普艾美耳球蟲(E.apsheronica)、山羊艾美耳球蟲(E.caprina)和羊艾美耳球蟲(E.caprovina)[1]。山羊球蟲病是山羊最常見、危害最為嚴重的寄生蟲病之一，呈世界性分布，各年齡段的山羊對球蟲均有易感性。青年羊和成年羊感染后可出現下痢、消瘦、貧血、發育不良等臨床癥狀，使羊生長緩慢及生產性能下降[2]。球蟲感染羔羊后危害極大，除導致嚴重腹瀉外，還可使羔羊大批死亡，病死率可達80%以上，對羊的健康和養羊業造成很大威脅[3-4]。在生產實踐中，球蟲體積微小、形態相近，應用常規方法很難快速準確地進行種類鑒定，因此給山羊球蟲病的有效防控帶來極大的挑戰。目前國內外對山羊球蟲病已經有了一些研究，但陜西地區山羊球蟲病的調查研究鮮見報道。加之，奶山羊產業是中國畜牧業和乳品行業的重要組成部分，也是陜西省畜牧業的傳統優勢特色產業，陜西省奶山羊存欄量、羊奶產量等均穩居全國首位[5-6]。因此，本研究對陜西省某羊場莎能奶山羊的球蟲感染情況進行調查研究，進一步對分離到的球蟲卵囊進行分離和種類鑒定，以期為該地區山羊球蟲病的防控提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 糞便樣品

從陜西省某羊場采集莎能奶山羊糞便樣品共49份，其中，6～12月齡山羊14份，3～5月齡羔羊13份，2月齡羔羊22份(表1)。

表1 不同年齡段山羊糞便樣品采集情況

1.2 儀器與設備

60目銅篩，購自浙江省上虞市大亨橋化驗儀器廠；4 ℃冰箱、鐵絲圈、50 mL離心管、麥克馬斯特計數板、顯微成像系統，購自尼康儀器(上海)有限公司；L-550臺式低速離心機，購自長沙湘儀離心機儀器有限公司；隔水式恒溫培養箱，購自上海精宏實驗設備有限公司。

1.3 主要試劑

NaCl、重鉻酸鉀、去離子水等。

1.4 樣品采集與保存

將采集到的新鮮糞便樣品分別裝入干凈塑料袋內，標記年齡信息、糞便狀態和山羊整體狀態， 4 ℃冰箱保存。

1.5 糞便檢查與OPG統計

根據龔振興等[7]的研究結果，采用飽和食鹽水漂浮法對糞便樣品進行光學顯微鏡下檢查，并采用麥克馬斯特計數法[8]測定每克糞便樣品中的球蟲卵囊數(OPG值)。

1.6 球蟲卵囊的分離與培養

將不同年齡段山羊糞便以腹瀉與否為標準，將定量檢測后剩余的糞樣加入適量水研磨并充分混合后經60目銅篩過濾，濾液3 500 r/min 離心5 min 2次，沉淀加入飽和食鹽水后混勻，1 700 r/min離心5 min，用吊環吊取最上層液面至清水中，重復2～3次至鏡檢后發現卵囊數較多即可。加入上清1.5倍體積的清水混合后，4 000 r/min離心8 min 2次，棄上清，沉淀即為收集的卵囊。取適量分離所得卵囊于20 mL含量為5%的重鉻酸鉀溶液中孵化(溫度為28.5 ℃)，待球蟲卵囊孢子化率達80%后，存至4 ℃冰箱。

1.7 卵囊的純化與富集

經培養孢子化的卵囊于5 000 r/min 離心8 min 2次，所得沉淀即富集的卵囊。

1.8 卵囊的形態學鑒定

通過光學顯微鏡觀察富集的孢子化卵囊，根據孢子化卵囊的形態學結構特征(卵囊大小、卵形指數、極帽、卵膜孔、子孢子大小、折光體、斯氏體、內殘體、外殘體、極粒等)，并結合文獻資料進行球蟲形態學鑒定[9-10]。

2 結果與分析

2.1 不同年齡段山羊球蟲感染率

研究結果顯示(表2)，該羊場山羊各年齡段普遍存在球蟲感染，總感染率為98.0%(48/49)，其中 3～5月齡山羊和6～12月齡山羊感染率最高，達100%(27/27)。

表2 山羊的球蟲感染率

2.2 不同年齡段山羊糞便OPG值

由表3可知，該羊場3～5月齡羔羊球蟲平均OPG最高，為2 442個/g，6～12月齡山羊球蟲平均OPG最低，為369個/g。但2月齡羔羊中檢出最高OPG，為15 083個/g。說明羔羊對球蟲易感性更高，這與前人研究結果相一致[11-13]。

表3 不同年齡段山羊球蟲感染的OPG統計結果

2.3 球蟲的種類鑒定

2.3.1 山羊艾美耳球蟲種類 對不同年齡的山羊糞便分別用飽和食鹽水漂浮法分離純化卵囊，然后進行孢子化培養60 h。通過形態學鑒定(表4)共檢測出7種球蟲，分別為柯氏艾美耳球蟲(E.christenseni)、阿氏艾美耳球蟲(E.arloingi)、雅氏艾美耳球蟲(E.ninakohlyakimovae)、艾麗艾美耳球蟲(E.alijeri)、小型艾美耳球蟲(E.parva)、家山羊艾美耳球蟲(E.hirci)、山羊艾美耳球蟲(E.caprina)(圖1)。

表4 莎能奶山羊感染球蟲的種類及形態學特征

a. 極帽；b. 卵膜孔；c. 極粒； d. 孢子囊；e. 斯氏體；A. 柯氏艾美耳球蟲；B. 阿氏艾美耳球蟲；C. 雅氏艾美耳球蟲；D. 艾麗艾美耳球蟲；E. 小型艾美耳球蟲；F. 家山羊艾美耳球蟲; G. 山羊艾美耳球蟲

2.3.2 優勢蟲種統計分析 對隨機提取的277個孢子化球蟲卵囊進行優勢蟲種統計分析，其中，雅氏艾美耳球蟲(E.ninakohlyakimovae)、阿氏艾美耳球蟲(E.arloingi)和柯氏艾美耳球蟲(E.christenseni)占比最高，依次為17.3%(48/277)，15.9%(44/277)和15.2%(42/277)，是該羊場的優勢蟲種。

3 討 論

目前國內外公認的山羊球蟲主要有9種[1]，在臨床上常為混合感染。在9種球蟲中，阿氏艾美耳球蟲(E.arloingi)、柯氏艾美耳球蟲(E.christenseni)、艾麗艾美耳球蟲(E.alijeri)和雅氏艾美耳球蟲(E.ninakohlyakimovae)已被公認為是致病性最強的4種山羊球蟲[14-15]。目前，雅氏艾美耳球蟲(E.ninakohlyakimovae)和阿氏艾美耳球蟲(E.arloingi)是許多國家/地區山羊球蟲的優勢蟲種，包括荷蘭、捷克、馬來西亞、波蘭、南非、斯里蘭卡、伊拉克、約旦、土耳其、伊朗、肯尼亞、津巴布韋和坦桑尼亞[14,16]。本試驗通過飽和食鹽水漂浮法對球蟲卵囊進行分離[9,17]、形態學鑒定[10-11]，發現該羊場混合感染柯氏艾美耳球蟲(E.christenseni)、阿氏艾美耳球蟲(E.arloingi)、雅氏艾美耳球蟲(E.ninakohlyakimovae)、艾麗艾美耳球蟲(E.alijeri)、小型艾美耳球蟲(E.parva)、家山羊艾美耳球蟲(E.hirci)、山羊艾美耳球蟲(E.caprina)。且該羊場雅氏艾美耳球蟲(17.3%, 48/277)、阿氏艾美耳球蟲 (15.9%, 44/277)和柯氏艾美耳球蟲(15.2%, 42/277)為優勢蟲種。卵形指數分別為1.20、 1.50、1.47，與文獻報道一致[14-15,18-19]。

研究結果表明，該羊場各年齡段的山羊普遍存在球蟲感染。其中3～5月齡山羊和6～12月齡山羊感染率最高，達100%(27/27)。2月齡山羊感染率為95.5%(21/22)。該山羊場球蟲平均感染率達98%。比賀圣杰等[18]在楊凌的統計結果(95.2%)高，可能與該羊場的防控力度較弱有關。也比常艷凱等[20]在西藏的調查統計結果(81.2%)高，可能因為陜西關中屬盆地平原型地形，溫度高于西藏高原山地，氣候更適于卵囊快速發育[21-22]。

本研究中3～5月齡羔羊球蟲平均OPG最高，為2 442個/g，6～12月齡山羊球蟲平均OPG最低，為369個/g。但2月羔羊中檢出最高的OPG，為15 083個/g。此次調查結果表明山羊月齡越小，球蟲感染率相對越高，這與陶立等[23]、林琳等[24]的報道一致。

綜上所述，雖然該羊場球蟲感染較為普遍，但臨床表現多為隱形感染，僅有少數羊只出現腹瀉癥狀，導致該場在養殖中常忽視球蟲防控。本次對球蟲種類的分離與鑒定，闡明該羊場球蟲種類分布和優勢種，也明確了流行于該場羊只中致病性較高的球蟲種類，從而有針對性地對病羊進行診治。因此應加強對羊群的飼養管理、改善飼養條件，采用抗球蟲藥物對圈舍羊群進行預防性驅蟲，定期對圈舍進行清潔消毒，保持圈舍干燥。保證飼草飼料、飲水的衛生，避免污染。對于已發病的羊只應及時隔離消毒，及時清理其排泄物、分泌物，防止交叉感染[21-22, 25-26]。