不同劑型蒙藥暖宮七味的鎮(zhèn)痛藥效學(xué)研究*

韓運(yùn)祺，肖云峰，王娜，田志杰

1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010107； 2.內(nèi)蒙古大唐藥業(yè)，內(nèi)蒙古 阿拉善盟 750306

痛經(jīng)(primary dysmenorrhea)是女性經(jīng)期或行經(jīng)前后出現(xiàn)的周期性下腹疼痛，或痛引腰骶，可伴有惡心、嘔吐、冷汗淋漓、手足厥冷等癥狀，甚至劇痛暈厥[1]。臨床上，將痛經(jīng)分為原發(fā)性(primary dysmenorrhea，PD)痛經(jīng)和繼發(fā)性(secondary dysmenorrhea，SD)痛經(jīng)兩種[2]，影響世界上50%的女性，其中，10%的患者癥狀嚴(yán)重，是影響婦女正常工作和生活質(zhì)量的常見原因[3-4]。暖宮七味散現(xiàn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊，用于心、腎臟“赫依”病，氣滯腰痛，小腹冷痛，月經(jīng)不調(diào)，白帶過多等，具有調(diào)經(jīng)養(yǎng)血，暖宮止帶的功效。本實(shí)驗(yàn)旨在研究比較暖宮七味散和暖宮七味膠囊對實(shí)驗(yàn)性痛經(jīng)模型的鎮(zhèn)痛作用，并初步探討其機(jī)制。

蒙藥暖宮七味又名“蘇格木勒-7”由白豆蔻、天冬、手掌參、沉香、肉豆蔻、黃精、丁香七味蒙藥材組成[5]，常用于治療主因“赫依”引起的血功能失調(diào)，氣血功能受阻所致疾病“巴達(dá)干”“希拉烏蘇”凝滯型痛經(jīng)，蒙醫(yī)臨床多用于經(jīng)前、經(jīng)期小腹冷痛，月經(jīng)量少，色暗有塊，畏寒便溏，舌苔白膩，脈沉緊[6]。其中，黃精補(bǔ)氣，天冬養(yǎng)陰，肉豆蔻、白豆蔻固澀、溫中，丁香、沉香祛寒鎮(zhèn)痛，手掌參益腎健脾，理氣和血，諸藥合用，主治失血、帶下等癥[7]，暖宮七味的臨床使用效果良好，但缺少實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)，鑒于此，本實(shí)驗(yàn)旨在研究比較不同劑型的暖宮七味與0.2%鹽酸哌替啶為陽性藥的醋酸所致疼痛模型的鎮(zhèn)痛作用，為暖宮七味的臨床使用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物SPF級雌性，昆明小鼠(以下簡稱KM小鼠)，6～8周齡，80只，體質(zhì)量18～22 g，由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK(蒙)2020-0001，每5只飼養(yǎng)于1個(gè)飼養(yǎng)盒中，以北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供的SPF級大小鼠維持飼料喂食，飼養(yǎng)期間自由攝水，并控制飼養(yǎng)環(huán)境室溫為19～25 ℃、濕度為40%～60%。本實(shí)驗(yàn)通過內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會批準(zhǔn)，批號YKD202102086。

清潔級，雌性日本大耳白兔6只，體質(zhì)量 1.5～2 kg，由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK(蒙)2020-0001，獨(dú)立飼養(yǎng)，自由攝食攝水，飼養(yǎng)環(huán)境室溫為(23±2) ℃，相對濕度50%～60%。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑暖宮七味散(內(nèi)蒙古大唐藥業(yè)股份有限公司，批號：19664004)；暖宮七味膠囊(內(nèi)蒙古大唐藥業(yè)股份有限公司，批號：20191105)；鹽酸哌替啶注射液(湖北宜藥集團(tuán)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號：171109)；冰醋酸(天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠，批號：20181124)；羧甲基纖維素鈉(以下簡稱CMC-Na，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：20150026)；氯化鈉(天津市鼎盛鑫化工有限公司，批號：20190901)；氯化鉀(以下簡稱KCl，天津市鼎盛鑫化工有限公司，批號：20190311)；硫酸鎂(以下簡稱MgSO4·7H2O，上海埃彼化學(xué)試劑有限公司，批號：F20161013)；磷酸二氫鈉(以下簡稱NaH2PO4·2H2O，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：20200529)；碳酸氫鈉(以下簡稱NaHCO3，天津市鼎盛鑫化工有限公司，批號：20190609)；氯化鈣(以下簡稱CaCl2，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號：20200612)；葡萄糖(無錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司，批號：20180901)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器智能熱板儀(濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司，型號：YLS-6B)；生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司，型號：BL-420F)；電子天平(奧豪斯儀器上海有限公司，型號：AR224CN)；數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，型號：KQ-250DE)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)分組取雌性KM小鼠80只，隨機(jī)分為空白組、陽性藥組、暖宮七味散低劑量組、暖宮七味散中劑量組、暖宮七味散高劑量組、暖宮七味膠囊低劑量組、暖宮七味膠囊中劑量組、暖宮七味膠囊高劑量組，每組10只。

日本大耳白兔6只，標(biāo)示為暖宮七味散低劑量組、暖宮七味散中劑量組、暖宮七味散高劑量組、暖宮七味膠囊低劑量組、暖宮七味膠囊中劑量組、暖宮七味膠囊高劑量組。

1.4.2 臺式液制備取NaCl 8 g、KCl 0.2 g、MgSO4·7H2O 0.26 g、NaH2PO4·2H2O 0.065 g、NaHCO31 g、CaCl20.2 g、葡萄糖 1 g，先將CaCl2用蒸餾水溶解完全，再加入其余6種物質(zhì)溶解，轉(zhuǎn)移至1 000 mL量瓶中，蒸餾水定容。

1.4.3 離體兔腸實(shí)驗(yàn)方法

1.4.3.1 離體兔腸藥物處理方法稱取0.42 g暖宮七味散及暖宮七味膠囊于10 mL蒸餾水中作為低劑量備用，稱取1.68 g暖宮七味散及暖宮七味膠囊于10 mL蒸餾水中作為高劑量備用，將準(zhǔn)備好的溶液于37 ℃、40 kHz超聲儀器中，超聲30 min，上層清液過濾紙，提取各組藥物有效成分。

灰色模型預(yù)測的優(yōu)點(diǎn)是利用較少的數(shù)據(jù)，就可以得到較為理想的預(yù)測結(jié)果，在信息貧乏、數(shù)據(jù)少時(shí)，相對于其他預(yù)測方法有其獨(dú)到之處。灰色預(yù)測模型有很多，可以統(tǒng)一表達(dá)為GM(h，n)。通常情況下，在建立灰色模型進(jìn)行預(yù)測時(shí)，較適合的模型應(yīng)為單個(gè)變量模型，即GM(1，1)模型。該模型是一個(gè)變量、一階微分的數(shù)列預(yù)測模型，預(yù)測起來較簡單有效，應(yīng)用領(lǐng)域比較廣泛［2］。

1.4.3.2 離體兔腸動物處理方法參照兔離體腸平滑肌的實(shí)驗(yàn)方法[8-10]，采用木棍敲擊日本大耳白兔后腦部位導(dǎo)致其死亡，立即剖開腹腔，找到胃后，剪取離胃幽門較近的一段十二指腸，放入預(yù)先處理的冷凍的臺氏液培養(yǎng)皿中，輕輕剝離腸系膜，用臺氏液將腸管的內(nèi)容物沖洗干凈，將腸管剪成約 2.0 cm 小段，放回冷凍臺氏液中作為標(biāo)本備用。取一小段標(biāo)本一端穿線固定于L型通氣鉤上，另一端連接到肌張力傳感器上，與BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連接，然后將標(biāo)本懸吊于盛有臺氏液 (37 ℃±0.5 ℃，通氧)的離體器官浴槽中，通過肌張力傳感器、生物信號處理系統(tǒng)進(jìn)行平滑肌張力檢測，調(diào)整腸肌力，觀察正常腸肌活動，待腸段自發(fā)性舒縮穩(wěn)定后，描記腸管正常運(yùn)動曲線作為給藥前平均張力。

實(shí)驗(yàn)時(shí)，用1 mL注射器吸取已經(jīng)配置好的提取物，每次給藥0.2 mL，臺式液對照組加入等體積的臺氏液，記錄曲線后，立即用新鮮臺氏液沖洗2～3次，待腸段舒縮恢復(fù)正常后才進(jìn)行下一次給藥，無法恢復(fù)正常舒縮的腸段棄去，觀察并記錄給藥前后的曲線變化值。

1.5 熱板實(shí)驗(yàn)方法將小鼠隨機(jī)分為空白組、陽性藥組、暖宮七味散劑低劑量組(0.78 g·kg-1)、暖宮七味散劑中劑量組(1.56 g·kg-1)、暖宮七味散劑高劑量組(2.18 g·kg-1)及暖宮七味膠囊劑低劑量組(0.78 g·kg-1)、暖宮七味膠囊劑中劑量組(1.56 g·kg-1)、暖宮七味膠囊劑高劑量組(2.18 g·kg-1)，空白組和陽性藥組給予同體積羧甲基纖維素鈉，其余各組給予相應(yīng)藥物灌胃15 d，末次給藥30 min后，空白組腹腔注射生理鹽水 0.1 mL·g-1，陽性藥組腹腔注射質(zhì)量濃度0.2%的鹽酸哌替啶溶液0.01 mL·g-1，30 min后分別將小鼠置于熱板儀(以小鼠第5次舔爪時(shí)間為標(biāo)準(zhǔn))，記錄小鼠疼痛閾值時(shí)間[11]。

1.6 醋酸扭體法將小鼠隨機(jī)分為空白組、陽性藥組、暖宮七味散低劑量組(0.78 g·kg-1)、暖宮七味散中劑量組(1.56 g·kg-1)、暖宮七味散高劑量組(2.18 g·kg-1)及暖宮七味膠囊低劑量組(0.78 g·kg-1)、暖宮七味膠囊中劑量組(1.56 g·kg-1)、暖宮七味膠囊高劑量組(2.18 g·kg-1)，空白組和陽性藥組給予同體積羧甲基纖維素鈉，其余各組給予相應(yīng)藥物灌胃15 d，末次給藥30 min后，空白組腹腔注射質(zhì)量濃度0.6%醋酸溶液0.2 mL復(fù)制小鼠疼痛模型，記錄從給藥后至小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間。陽性藥組腹腔注射質(zhì)量濃度0.2%的鹽酸哌替啶溶液0.2 mL，給藥10 min后，腹腔注射0.2 mL質(zhì)量濃度0.6%醋酸溶液制造疼痛模型，記錄從給藥后至小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間。暖宮七味散及暖宮七味膠囊組給藥后，腹腔注射質(zhì)量濃度0.6%醋酸溶液0.2 mL復(fù)制疼痛模型，記錄從給藥后至小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間[12]。

2 結(jié)果

2.1 暖宮七味散各劑量對離體兔腸平滑肌的影響與給藥前比較，低劑量的暖宮七味散提取物后，平滑肌收縮明顯變化，其峰型穩(wěn)定平緩；與給藥前峰值比較，給予高劑量暖宮七味散提取物后，峰形不穩(wěn)，波動較大，對平滑肌收縮有作用，但作用不明顯，見圖1、圖2。

圖1 暖宮七味散低劑量對離體兔腸平滑肌的影響

圖2 暖宮七味散高劑量對離體兔腸平滑肌的影響

圖3 暖宮七味膠囊低劑量對離體兔腸平滑肌的影響

圖4 暖宮七味膠囊高劑量對離體兔腸平滑肌的影響

2.3 暖宮七味散各劑量疼痛閾值結(jié)果比較具體結(jié)果見表1。

表1 暖宮七味散各劑量疼痛閾值結(jié)果比較

2.4 暖宮七味膠囊各劑量疼痛閾值結(jié)果比較具體結(jié)果見表2。

表2 暖宮七味膠囊各劑量疼痛閾值結(jié)果比較

2.5 暖宮七味散各劑量醋酸扭體時(shí)間比較具體結(jié)果見表3。

表3 暖宮七味散各劑量醋酸扭體時(shí)間比較

2.6 暖宮七味膠囊各劑量醋酸扭體時(shí)間比較具體結(jié)果見表4。

表4 暖宮七味膠囊各劑量醋酸扭體時(shí)間比較

3 討論

目前，西醫(yī)治療原發(fā)性痛經(jīng)尚缺乏特效藥物，多采用雌孕激素，如安宮黃體酮片等[13]。以往的研究表明，該類藥物可有效抑制前列腺素釋放，避免前列腺素刺激子宮平滑肌收縮而引起血管痙攣，從而達(dá)到緩解疼痛的目的[14]。目前，化學(xué)藥物治療原發(fā)性痛經(jīng)的治療效率不夠理想，不良反應(yīng)較大，部分患者易復(fù)發(fā)[15]。

近年來，蒙醫(yī)蒙藥學(xué)在原發(fā)性痛經(jīng)治療中取得了顯著的進(jìn)展，在蒙醫(yī)蒙藥學(xué)中，原發(fā)性痛經(jīng)的病機(jī)主要為外邪入侵，月經(jīng)不調(diào)，蒙古語名sa rin hir tegxgui，是指月經(jīng)周期、經(jīng)量、經(jīng)色、經(jīng)質(zhì)等方面有所改變的一類病癥[16]。蒙醫(yī)理論認(rèn)為，月經(jīng)不調(diào)主要是由于巴達(dá)干、下清赫依功能失調(diào)，致使氣血運(yùn)行受阻，引起腎及三舍二器的疾病[17-18]。治療原則以抑制赫依、活氣血、散寒止痛、暖宮調(diào)經(jīng)為原則[19-20]。蒙藥暖宮七味是一味蒙醫(yī)常用的治療原發(fā)性痛經(jīng)藥，方中肉豆蔻可理氣和中、補(bǔ)益腎陽；黃精、手掌參可補(bǔ)腎益氣、調(diào)經(jīng)止痛；丁香可溫中降逆、補(bǔ)腎助陽；沉香可行氣止痛；麥門冬可清心除煩、滋陰潤肺。諸藥合用，可調(diào)和氣血、散寒止痛、暖宮調(diào)經(jīng)[21]。有研究表明，蒙藥暖宮七味丸具有抑制心、腎“赫依”病的作用，能達(dá)到治療痛經(jīng)的目的[22]。研究表明，暖宮七味散可通過提高患者血清中的前列腺素來促進(jìn)血管擴(kuò)張和平滑肌的舒展[23]，不利于酸性代謝物的產(chǎn)生及其引起的神經(jīng)刺激產(chǎn)生，從而達(dá)到調(diào)節(jié)子宮微循環(huán)的目的。蒙醫(yī)研究治療痛經(jīng)藥物的藥效學(xué)研究時(shí)，常采用一些篩選試驗(yàn)，常用的致痛方法有物理(熱、電、機(jī)械)和化學(xué)(冰醋酸、緩激肽、甲醛溶液)刺激法[24]。

本實(shí)驗(yàn)中采用醋酸扭體法建立疼痛模型是將一定量的冰醋酸注入小鼠腹腔，刺激臟層和壁層腹膜，引起深部較大面積、較長時(shí)間的炎性疼痛，致使小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)[25]。雙側(cè)腹內(nèi)凹陷、伸展后肢、扭動爬行、蠕行等說明疼痛模型建立成功。該實(shí)驗(yàn)方法是篩選鎮(zhèn)痛藥的一種較敏感、簡單、重復(fù)性好的化學(xué)刺激致痛方法。因此，凡是能解決以上病理因素導(dǎo)致疼痛的藥物均可起到一定的鎮(zhèn)痛效果。有研究顯示，醋酸介導(dǎo)的傷害性反應(yīng)是注射醋酸后腹腔pH值降低而直接刺激傷害傳入神經(jīng)纖維和炎性遞質(zhì)合成共同作用所致，因此，可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c中醫(yī)理論之外邪入侵留滯體內(nèi)導(dǎo)致氣血瘀滯不通而引起疼痛有相似之處[26]。蒙藥暖宮七味散及暖宮七味膠囊均可影響離體兔腸平滑肌的收縮，提高小鼠疼痛閾值，且暖宮七味散松弛平滑肌作用優(yōu)于暖宮七味膠囊；暖宮七味膠囊和暖宮七味散均能提高昆明種小鼠痛閾，延長小鼠的抗醋酸疼痛模型的時(shí)間，且暖宮七味散松弛鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于暖宮七味膠囊。

綜上所述，暖宮七味散及暖宮七味膠囊均能提高小鼠的疼痛閾值時(shí)間，影響離體兔腸平滑肌收縮情況，具有明顯鎮(zhèn)痛作用，且暖宮七味散鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于暖宮七味膠囊。