山東省市售龍膽瀉肝丸（水丸）質量分析

李俊卿，王金鳳，李占芳，宋建建，崔洋洋，路公靜

（1. 山東省東營市食品藥品檢驗研究院，山東 東營 257091； 2. 北京中醫藥大學，北京 100029）

龍膽瀉肝丸處方源自《醫方集解》，由龍膽、炙甘草、梔子（炒）、黃芩、澤瀉、木通、鹽車前子、柴胡、酒當歸、地黃10 味中藥材組方，具有清肝膽、利濕熱功效［1］，廣泛用于慢性膽囊炎、急性帶狀皰疹、慢性前列腺炎等疾病的治療［2-3］。為加強藥品質量監督管理，客觀評價和提高山東省龍膽瀉肝丸的質量，保障廣大人民群眾的用藥安全［4-8］，根據《山東省藥品監督管理局關于印發2020年山東省藥品質量風險監測工作方案的通知》（局函〔2020〕76 號）及《2020年山東省藥品質量風險監測工作方案》（魯食藥檢業〔2020〕36 號）要求，開展龍膽瀉肝丸（水丸）質量風險研究。本研究中采用2015年版《中國藥典（一部）》標準檢驗與探索性研究相結合的方法，對從山東省12 個地市抽取的30 批龍膽瀉肝丸（水丸）進行質量評價，并提出合理化建議，以進一步加強龍膽瀉肝丸（水丸）的監督管理?，F報道如下。

1 樣品信息及檢驗依據

龍膽瀉肝丸（水丸）來源于山東省的12 個地市，涉及藥品生產企業14 家，共30 批樣品，樣品信息見表1。所有樣品生產日期均為2020年12月31日前，故按照2015年版《中國藥典（一部）》進行檢驗，檢驗項目包括性狀、鑒別、水分、裝量差異、溶散時限、微生物限度和含量測定。

表1 龍膽瀉肝丸（水丸）樣品信息Tab.1 Information of Longdan Xiegan Pills（Water-Bindered Pills）samples

2 方法與結果

2.1 法定標準檢驗

性狀：依據法定檢驗標準，應為暗黃色水丸，味苦。結果30 批樣品均為暗黃色，味苦，顏色略有差異，但均符合標準規定。

鑒別：依據法定檢驗標準，包括顯微鑒別1 項和薄層色譜鑒別3 項。結果30 批樣品均顯示其顯微特征，薄層色譜圖中均有相應特征斑點出現，均符合規定。

水分：依據法法定檢驗標準，水分應不得過9.0%。結果30批樣品的水分為2.7%～7.6%，均符合規定。

裝量差異：依據法定檢驗標準，超出裝量差異限度的不得多于2袋（瓶），并不得有1袋（瓶）超出限度1倍。結果30批樣品均符合規定。

溶散時限：依據法定檢驗標準，應在1 h 內完全溶散。結果30 批樣品的溶散時限為31～59 min，均符合規定。

微生物限度：依據法定檢驗標準，結果30批樣品均符合規定。

含量測定：依據法定檢驗標準，本品每1 g 含龍膽以龍膽苦苷（C16H20O9）計，不得少于0.80 mg；含梔子以梔子苷（C17H24O10）計，不得少于1.30 mg；含黃芩以黃芩苷（C21H18O11）計，不得少于3.80 mg。結果龍膽苦苷、梔子苷、黃芩苷的含量分別為1.36～6.31 mg/ g、2.24～3.77 mg/g、4.53～9.49 mg/g，均符合規定。可見，30批樣品含量有一定差異，可能與生產工藝、投料量和飲片質量有關。

2.2 探索性研究

2.2.1 儀器與試藥

儀器：島津LC - 20AT 型高效液相色譜儀（日本島津公司）；7900 型電感耦合等離子體質譜儀（安捷倫科技有限公司）；MARS6240/50 型微波消解儀（美國CEM公司）；BT224S 型分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司，精度為萬分之一）。

試藥：龍膽瀉肝丸（樣品信息見表1）；硝酸（分析純，太倉滬試試劑有限公司，批號為20191219）；乙腈（色譜純，國藥集團化學試劑有限公司，批號為20201203）；水為超純水；23-乙酰澤瀉醇B 對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111846-201504，純度為100%）；砷（As）、鎘（Cd）、鉻、鉛（Pb）多元素標準溶液［GNM-M041940-2013，批號為20D3577，質量濃度為1000 μg/mL］，金單元素標準溶液［GNM-SAU-003-2013，批號為19D6574，質量濃度為1.0 μg/ mL］，鍺、銦、鉍多元素標準溶液（GNM - M033030 - 2013，批號為2D3605，質量濃度為10.0 μg/mL），均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心；汞（Hg）單元素標準溶液［GBW（E）080124，批號為19052］，銅（Cu）單元素標準溶液［GBW（E）080122，批號為19101］，質量濃度均為100 μg/mL，均購自中國計量科學研究院。

2.2.2 高效液相色譜法測定23 - 乙酰澤瀉醇B 含量

1）色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（75∶25，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：208 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2）溶液制備

取23 - 乙酰澤瀉醇B 對照品10 mg，精密稱定，加乙腈制成質量濃度為100 μg/ mL 的對照品貯備液。取樣品適量，研細，取2 g，精密稱定，置具塞平底燒瓶中，加入乙腈20 mL，密塞，稱定質量，超聲（功率為300 W，頻率為50 kHz）45 min，放冷，再稱定質量，用乙腈補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

3）方法學考察

線性關系考察：吸取溶液制備項下對照品貯備液0.2，0.4，0.8，1.0，2.0，3.0，5.0 mL，置10 mL 容量瓶中，加乙腈稀釋并定容，制成質量濃度分別為2.086，4.172，8.344，10.430，20.860，31.290，52.150 μg/ mL的系列對照品溶液。按擬訂色譜條件進樣測定，以對照品溶液質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積積分值（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y= 8118.5X-3873.3（R2=1.0000，n=7）。結果表明，23-乙酰澤瀉醇B 質量濃度在2.086～52.150 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：吸取溶液制備項下對照品貯備液適量，按擬訂色譜條件連續重復進樣測定6 次，記錄峰面積。結果23-乙酰澤瀉醇B峰面積的平均值為179743，RSD為0.72%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：吸取溶液制備項下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，8，12，16，24 h 時進樣測定，記錄峰面積。結果23 - 乙酰澤瀉醇B 峰面積的平均值為181911，RSD為0.56%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內穩定性良好。

重復性試驗：取同一批（批號為2005015）樣品，依法制備供試品溶液6 份，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果23-乙酰澤瀉醇B 的平均含量為0.23 mg/g，RSD為0.63%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取樣品（批號為2005015）適量，共9 份，精密稱定，置100 mL 錐形瓶中，分別加入23 - 乙酰澤瀉醇B對照品0.1669，0.2086，0.2503 mg，各3份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果平均回收率為99.41%，RSD為0.86%（n=9）。

4）樣品含量測定

取30批樣品各適量，精密稱定，依法制備供試品溶液，各平行2份，按擬訂色譜條件進樣測定，按外標法計算樣品中23-乙酰澤瀉醇B 的含量。結果見表2?？梢姡瑯悠分?3-乙酰澤瀉醇B的含量為0.028～0.388 mg/g；H 生產企業的樣品含量為0.127～0.388 mg / g，批間含量差異較大；G 生產企業的樣品含量為0.143～0.162 mg/g，批間含量差異較小，均勻性較好；K生產企業的2 批樣品中的23-乙酰澤瀉醇B 的含量遠低于其他生產企業的樣品，可能存在投料不足或原料藥質量不佳的情況。本研究中僅有2批樣品，代表性不強，還需收集更多樣品進行研究。

表2 樣品中23-乙酰澤瀉醇B含量測定結果（mg/g，n=2）Tab.2 Results of content determination of 23 - acetyl alisol B in samples（mg/g，n=2）

2.2.3 電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）法測定樣品中重金屬及有害元素含量

《中國藥典（四部）》［9］中方法，采用電感耦合等離子體質譜儀檢測樣品中重金屬及有害元素Pb，As，Cd，Hg，Cu的含量。結果見表3。

表3 樣品中重金屬及有害元素含量測定結果（μg/g）Tab.3 Results of content determination of heavy metals and harmful elements in samples（μg/g）

參考2020年版《中國藥典（四部）》中植物類中藥材重金屬及有害元素限度規定，即Cu ≤20 mg/ kg，As ≤2 mg/kg，Cd ≤1 mg/kg，Pb ≤5 mg/kg，Hg ≤0.2 mg/kg。30 批樣品中，有2 個生產企業Cu 超標，有1 個生產企業Hg 超標。相較于中藥材，中成藥服用量及療程確切，故通過計算每周的重金屬攝入量，并與每周耐受攝入量（Pb=0.025 mg/kg，Cd=0.007 mg/kg，As=0.015 mg/kg，Hg=1.6 μg/kg，Cu=0.5 mg/kg）［10］進行比較，以評價樣品的安全風險。公式為Xi'=Xi×I/W［10-11］，式中，Xi'為樣品中某種重金屬每千克體質量的每周攝入量；Xi為樣品中某種重金屬含量；I為樣品的每周最大服用量；W為正常成年人的平均體質量，取60 kg。樣品每日服用量取12 g，按上述公式計算，結果各重金屬及有害元素每周攝入量均低于每周耐受攝入量，表明風險較低，但長期服用是否存在安全隱患尚需進一步評估。

3 討論

3.1 含量測定指標性成分選擇

澤瀉為方中臣藥，其藥理活性成分主要為澤瀉醇類［12-13］。其中，23-乙酰澤瀉醇B 為主要成分，故以澤瀉中的23 - 乙酰澤瀉醇B 為特征指標，建立了考察龍膽瀉肝丸中澤瀉質量的高效液相色譜法。

3.2 現行法定標準存在的問題

龍膽為方中君藥，清肝膽實火，清下焦濕熱；黃芩、梔子為臣藥，助龍膽清瀉肝火之功；澤瀉、木通、車前子清下焦濕熱；地黃、當歸為佐藥，補陰血；柴胡有疏肝之功效。本次抽檢樣品的執行標準為2015年版《中國藥典（一部）》，其中僅對龍膽、梔子和黃芩進行質量控制，未控制其余藥味。故本研究中進一步對澤瀉進行探索性研究，建立了龍膽瀉肝丸（水丸）中澤瀉的含量測定方法。結合法定檢驗標準及探索性研究發現，不同生產企業及相同生產企業不同批次間藥品的質量存在一定差異，原因可能與生產工藝、投料量和原料藥質量有關。建議生產企業落實主體責任，加強原料藥的質量控制，保證產品質量。

3.3 樣品中重金屬含量偏高

龍膽瀉肝丸（水丸）方中大部分藥材的藥用部位為根莖，故原料藥材的重金屬含量可能導致成藥中重金屬及有害元素含量偏高。通過探索性研究發現，30 批樣品中均不同程度檢出了Pb，As，Cu，Cd，Hg 元素，參考2020年版《中國藥典（四部）》中植物類中藥材重金屬及有害元素限度規定，樣品存在重金屬Hg和Cu含量超標問題。進一步以各元素每周攝入量評價其風險，結果各元素每周攝入量均低于每周耐受攝入量，表明風險較低，但長期服用是否存在安全隱患尚需進一步評估。

3.4 建議

中藥材的質量問題與中成藥的重金屬污染情況密切相關，中藥材的重金屬污染是一個長期且復雜的問題，與中藥材產地、品種、入藥部位、生長環境等諸多因素密切相關。建議藥品監督管理部門增強對部分生產企業的監管力度，持續強化日常監督檢查與專項檢查工作，警示藥品生產企業加強對原料藥的質量控制，消除安全隱患，從源頭控制藥品質量，保障臨床用藥安全、有效。