子宮內(nèi)膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)與患者臨床病理分期相關(guān)性研究

徐 珊，程 珂，劉鵬宇

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院婦科，河南 新鄉(xiāng) 453003；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)院管理處,河南 新鄉(xiāng) 453003)

子宮內(nèi)膜癌為絕經(jīng)后以及圍絕經(jīng)期女性多發(fā)的，部位在子宮內(nèi)膜的惡性、上皮性腫瘤，是僅次于宮頸癌的婦科常見的惡性腫瘤，約占婦科總體惡性腫瘤的20%～30%[1]。臨床子宮內(nèi)膜癌早期診斷多采取相關(guān)血清標(biāo)志物檢測(cè)進(jìn)行，但缺乏敏感度和特異性，對(duì)患者預(yù)后和治療價(jià)值有限，故尋求更為有效、具有參考價(jià)值的標(biāo)志物對(duì)預(yù)后及診療進(jìn)行參考具有重要價(jià)值[2-3]，惡性腫瘤與抑癌和原癌基因活性關(guān)系密切，微小RNA(miRNA,miR)為一類非編碼RNA單鏈，能夠結(jié)合相應(yīng)基因序列對(duì)靶基因的表達(dá)產(chǎn)生抑制調(diào)節(jié)效果[4]，有研究[5]顯示：miR-106b對(duì)胃癌組織中癌細(xì)胞的遷移和增殖有促進(jìn)作用，其在子宮內(nèi)膜癌中可能也有類似作用。另有學(xué)者[6]指出：腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensin system,RAS)是人體體液、水鈉平衡以及生理功能調(diào)節(jié)的重要系統(tǒng),血管緊張素(1-7)為該系統(tǒng)中的一種活性肽,存在于循環(huán)系統(tǒng)中的同時(shí)，在子宮中也發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，與子宮內(nèi)膜癌可能存在緊密聯(lián)系，故本研究探究子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜組織中血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)情況及其與患者病理分期間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 擇本院2019年11月至2021年11月間107例子宮內(nèi)膜癌患者將其子宮內(nèi)膜癌組織切除后作為患病組，病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①均接受穿刺活檢后確診為子宮內(nèi)膜癌[7]；②未進(jìn)行過(guò)放療以及化療等治療；③我院倫理委員會(huì)許可，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他嚴(yán)重疾病或原發(fā)性腫瘤者；②合并急性炎癥、血液系統(tǒng)疾病者；③自身免疫缺陷及肝、腎嚴(yán)重病變者等。年齡49～70歲，平均(53.12±5.71)歲；孕次1～3次，平均(2.01±0.97)次；宮腔深度5～11 cm,平均(7.19±1.81)mm。據(jù)其TNM病理分期分組，Ⅰ-Ⅱ期組69例，年齡49～68歲，平均(52.98±5.25)歲；孕次1～3次，平均(1.99±0.94)次；宮腔深度5～10 cm,平均(7.16±1.63)mm。Ⅲ-Ⅳ期組38例，年齡52～70歲，平均(53.37±5.34)歲；孕次1～3次，平均(2.05±0.94)次；宮腔深度5～11 cm,平均(7.24±1.70)mm。TNM病理分期各分組患者間宮腔深度、孕次和年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。另?yè)裢?0例健康子宮內(nèi)膜組織為健康組，年齡48～70歲，平均(53.27±5.93)歲；孕次1～3次，平均(2.00±0.98)次；宮腔深度5～12 cm，平均(7.24±1.94)mm?；疾〗M與健康組間宮腔深度、孕次和年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 血管緊張素(1-7)檢測(cè)：采用預(yù)冷處理過(guò)的0.9%氯化鈉溶液多次對(duì)新鮮冷凍的子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行洗滌后取0.2 g，按照組織凈重(g)、0.9%氯化鈉溶液、甲基磺酰氟(Pheny1methylsulfonyl fluoride，PMSF)比例1∶10∶100將0.9%氯化鈉溶液和PMSF依次加入，后進(jìn)行超聲勻漿到無(wú)顆粒、透明狀，取12 000 g于4 ℃下進(jìn)行3000 r/min，5 min離心后取上清，以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血管緊張素(1-7)含量，試劑盒來(lái)自上海江萊生物科技有限公司，操作均嚴(yán)格參照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.2.2 miR-106b檢測(cè)：將子宮內(nèi)膜組織樣本中的總RNA提取后，采用DEPC水將其溶解后對(duì)RNA純度和濃度進(jìn)行測(cè)定后，以反轉(zhuǎn)錄試劑盒(上海夢(mèng)澤生物科技有限公司，型號(hào)A3500)轉(zhuǎn)錄成cDNA，按照兩步法熒光定量反轉(zhuǎn)錄試劑盒(上海研生生化試劑有限公司)說(shuō)明書步驟進(jìn)行測(cè)定，其中，引物：上游序列：5’-TTTTTCGCCCTTAGCGTGAAGA-3’,下游序列：5’-GAGGCAGTCGAAGCTCTCG-3’,U6作內(nèi)參基因,上游引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’,下游序列：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),反應(yīng)體系包含引物各0.5、1 μl cDNA、5.5 μl RNase-free ddH2O、7.5 μl SYBR Green Mix，共15 μl。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀設(shè)置程序95 ℃、12 min，95 ℃、15 s，60 ℃、15 s，72 ℃、15 s，40循環(huán)，進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)束后分析記錄數(shù)據(jù)，miR-106b表達(dá)以2-△△CT進(jìn)行計(jì)算。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 子宮內(nèi)膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)情況：對(duì)比患病組和健康組子宮內(nèi)膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)水平差異。

1.3.2 不同TNM病理分期分組患者子宮內(nèi)膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)情況：對(duì)比Ⅰ-Ⅱ期組和Ⅲ-Ⅳ期組患者子宮內(nèi)膜癌組織血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)水平差異。

1.3.3 子宮內(nèi)膜癌患者TNM病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)間相關(guān)性：Pearson檢驗(yàn)子宮內(nèi)膜癌患者血管緊張素(1-7)、miR-106b和TNM病理分期間的相關(guān)性。

1.3.4 子宮內(nèi)膜癌患者TNM病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)的關(guān)系：采用有序多分類邏輯回歸分析子宮內(nèi)膜癌病理分期和血管緊張素(1-7)、miR-106b間的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)情況比較 患病組患者血管緊張素(1-7)和miR-106b表達(dá)均高于健康組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)情況比較

2.2 不同TNM病理分期分組患者血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)情況比較 Ⅰ-Ⅱ期組患者血管緊張素(1-7)表達(dá)低于Ⅲ-Ⅳ期組，Ⅰ-Ⅱ期組患者miR-106b表達(dá)高于Ⅲ-Ⅳ期組(均P<0.05)，見表2。

表2 不同TNM病理分期分組患者血管緊張素(1-7)和miR-106b表達(dá)情況比較

2.3 子宮內(nèi)膜癌患者TNM病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)的相關(guān)性 Pearson檢驗(yàn)表明，子宮內(nèi)膜癌患者血管緊張素(1-7)與其病理分期呈正相關(guān)(r=0.805，P=0.000)，miR-106b表達(dá)與其病理分期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.547，P=0.000)。

2.4 子宮內(nèi)膜癌患者TNM病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b表達(dá)的關(guān)系 以子宮內(nèi)膜癌TNM病理分期分組為因變量，血管緊張素(1-7)和miR-106b為自變量，行有序多分類邏輯回歸，分析子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜血管緊張素(1-7)和miR-106b表達(dá)和其TNM病理分期間關(guān)系密切(均P<0.05)，見表3。

表3 子宮內(nèi)膜癌患者病理分期與血管緊張素(1-7)、miR-106b的有序多分類邏輯回歸分析

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生現(xiàn)多認(rèn)為是Wnt/β聯(lián)蛋白經(jīng)典通路及Notch信號(hào)通路異常、p53基因突變以及微衛(wèi)星的不穩(wěn)定性等多因素綜合作用的結(jié)果，以上因素還可能影響子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后和轉(zhuǎn)移過(guò)程，但仍有較多機(jī)制難以明確，探索新思路，新方法對(duì)子宮內(nèi)膜癌的治療和預(yù)防有重要價(jià)值[8-9]，臨床以往多采用CA199、CA125等腫瘤標(biāo)志物對(duì)該病患者預(yù)后和診斷進(jìn)行判斷，但其在卵巢癌、盆腔炎癥、子宮內(nèi)膜異位癥等疾病中也有異常表達(dá)，從而使其對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的評(píng)判特異性有限，故尋求具有更好診斷價(jià)值的特異性指標(biāo)對(duì)該病患者預(yù)后改善以及有效診治具有重要作用[10-11]。

血管緊張素Ⅱ以及血管緊張素(1-7)是RAS系統(tǒng)中的一類多功能活性肽，前者對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子具有促進(jìn)作用，從而有利于腫瘤血管的形成，還可調(diào)節(jié)相關(guān)基因和轉(zhuǎn)化因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖進(jìn)程，血管緊張素(1-7)對(duì)其具有抑制作用而對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生抑制效果[12]。miR-106b為人類7號(hào)染色體上的，對(duì)多種基因通路和細(xì)胞因子具有調(diào)節(jié)作用的因子，在乳腺癌、肝癌、胃癌及腫瘤細(xì)胞侵襲以及增殖過(guò)程中均發(fā)揮重要作用[13]，本研究患病組血管緊張素(1-7)和miR-106b均高于健康組，提示子宮內(nèi)膜癌患者體內(nèi)存在miR-106b和血管緊張素(1-7)表達(dá)的異常，據(jù)其病理分期分組比較后發(fā)現(xiàn)，Ⅰ-Ⅱ期組患者血管緊張素(1-7)低于Ⅲ-Ⅳ期組，Ⅰ-Ⅱ期組miR-106b高于Ⅲ-Ⅳ期組，且經(jīng)Pearson檢驗(yàn)得，子宮內(nèi)膜癌患者血管緊張素(1-7)與其病理分期正相關(guān)，miR-106b表達(dá)與其病理分期負(fù)相關(guān)，提示其血管緊張素(1-7)和miR-106b表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者TNM病理分期有較好相關(guān)性，結(jié)合有序多分類邏輯回歸分析得，子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜血管緊張素(1-7)和miR-106b表達(dá)和其TNM病理分期間關(guān)系密切，進(jìn)一步證實(shí)了血管緊張素(1-7)和miR-106b表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者TNM病理分期間具有密切關(guān)系。分析原因：有學(xué)者對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者可能參與調(diào)節(jié)癌細(xì)胞組蛋白乙酰化修飾的相關(guān)miRNA進(jìn)行調(diào)控、分析后發(fā)現(xiàn)有101種miRNA出現(xiàn)表達(dá)的異常，其中miR-106b相關(guān)基因簇與子宮內(nèi)膜癌的變化有密切關(guān)系[14]，另有學(xué)者[15]研究發(fā)現(xiàn):miR-106b可能在子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,且與患者組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及FIGO分期間有明確正相關(guān)關(guān)系，對(duì)子宮內(nèi)膜癌具有一定診斷價(jià)值。殘疾基因同源物2(Disabled homolog 2,DAB2)是一類與多種惡性腫瘤關(guān)系密切的抑癌基因磷蛋白，可通過(guò)絲裂原信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程參與癌細(xì)胞分裂過(guò)程，還可作用于腫瘤胞外信號(hào)的相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白，從而調(diào)控腫瘤的分化與增殖[16]，已有學(xué)者[17]指出，在子宮內(nèi)膜癌發(fā)展與發(fā)生中有DAB2的參與且與患者疾病進(jìn)展表現(xiàn)出一定的正相關(guān)關(guān)系，而miR-106b可對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤細(xì)胞上相關(guān)靶基因DAB2的表達(dá)產(chǎn)生下調(diào)作用，進(jìn)而有助于癌細(xì)胞的侵襲和增殖，促進(jìn)患者病理分期的進(jìn)展和惡化[18]。而血管緊張素(1-7)可通過(guò)拮抗血管緊張素Ⅱ作用，抑制血管緊張素Ⅱ?qū)-myc基因和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β的調(diào)節(jié)作用，從而對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖進(jìn)行調(diào)控，也可拮抗其促血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子分泌作用，達(dá)到減少腫瘤組織內(nèi)血管的形成的作用[19]。此外，其還可直接對(duì)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生抑制分化的效果，從而使異常增生的細(xì)胞編程性死亡，達(dá)到調(diào)控子宮內(nèi)膜相關(guān)組織生長(zhǎng)的作用，進(jìn)而阻礙患者病理進(jìn)程的進(jìn)一步發(fā)展和惡化[20]。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌患者存在血管緊張素(1-7)和miR-106b表達(dá)的異常升高狀態(tài)，其TNM病理分期Ⅰ-Ⅱ期較Ⅲ-Ⅳ期患者具有更低的血管緊張素(1-7)表達(dá)和更高的miR-106b表達(dá)，TNM病理分期與血管緊張素(1-7)和miR-106b表達(dá)水平關(guān)系密切且具有較好相關(guān)性，臨床可針對(duì)患者病理分期結(jié)果進(jìn)行術(shù)后輔助治療的指導(dǎo)，并將其作為新靶點(diǎn)達(dá)到改善預(yù)后的效果。