肺鱗癌患者FGFR1表達與臨床病理特征的關系

陳 杰，吳科芳

(1.慈溪市第三人民醫院醫療健康集團(總院) 呼吸與危重癥醫學科，浙江 寧波 315324；2.慈溪市第三人民醫院醫療健康集團長河分院 內科，浙江 寧波 315324)

肺癌的發病率和死亡率呈快速增長。鱗癌占非小細胞肺癌的25%～30%，細胞毒性藥物是晚期肺鱗癌的主要治療手段。近年來，隨著基因測序技術、生物醫學水平的快速發展，抗腫瘤藥物研發的焦點逐漸從傳統細胞毒性藥物轉移到靶點特異性抗腫瘤藥物。成纖維細胞生長因子受體(fibroblast growth factor receptors，FGFRs)屬于酪氨酸蛋白激酶型受體的一種，能夠與成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factors，FGFs)結合，參與細胞的增殖、分化、新生血管形成、創傷修復等生理過程。FGFRs異常表達可使細胞過度增殖，FGFRs還與腫瘤的侵襲、轉移、腫瘤新生血管形成及化療藥物抗藥性有關，因此被認為是抗腫瘤藥物的分子靶點。FGFR1是FGFRs的4種亞型之一，研究發現FGFR1高表達與肺癌的發生發展存在密切聯系。本研究對比觀察FGFR1在肺鱗癌組織與癌旁組織中的表達水平，探討其與肺鱗癌患者臨床病理特征之間的關系，為肺鱗癌臨床診斷、靶向治療及預后判斷提供依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2014年6月—2016年5月于慈溪市第三人民醫院接受治療的45例肺鱗癌患者的臨床資料，其中男27例，女18例；年齡34～82歲，平均(58.29±6.73)歲；有吸煙史31例；分化程度：低分化21例，中分化16例，高分化8例；有淋巴轉移27例；第8版國際肺癌TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期12例，Ⅲ期9例，Ⅳ期6例。納入標準：①符合肺癌的診斷標準；②符合2015年版WHO肺腫瘤組織學分型標準中鱗狀細胞癌的組織學分型標準；③未接受過放、化療；④信息資料完整。排除標準：①合并其他部位的惡性腫瘤；②妊娠、哺乳期婦女；③精神疾病史。

1.2 材料和試劑 兔源FGFR1多克隆抗體由美國Abnova公司提供，SP免疫組化試劑盒、磷酸鹽緩沖液(PBS)及生物素標記的二抗均購于北京中杉金橋生物技術有限公司，二甲基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 檢測

1.3.1 免疫組化 收集所有45例患者的肺鱗癌組織標本和癌旁組織標本，石蠟包埋切片。取5 μm石蠟組織連續切片，脫蠟，梯度酒精水化，PBS漂洗3×5 min。所有組織標本均采用微波修復抗原，滴加兔源FGFR1多克隆抗體(1∶100稀釋)，4 ℃冰箱過夜。取出切片，PBS漂洗3×5 min。依次滴加生物素標記的二抗和SP溶液，每片滴加新鮮配制的DAB顯色液，光學顯微鏡下控制反應時間(1～5 min)，蒸餾水充分沖洗，復染，常規脫水，透明，中性樹膠封固。

1.3.2 結果判定 400倍光學顯微鏡下每張切片隨機選擇5個視野，要求細胞定位明確，間質清晰，無背景著色，每個視野計數100個腫瘤細胞，結合陽性細胞數目所占比例與細胞染色強度進行評分。陽性細胞數﹤5%為陰性(-)，計0分；5%～25%為弱陽性(+)，計1分；26%～50%為中度陽性(++)，計2分；>50%為強陽性(+++)，其中51%～75%計3分，>75%計4分。按照染色的深淺分為不著色(0分)、淡黃色(1分)、黃色(2分)、棕黃色(3分)4級。最終表達結果為每張切片陽性細胞數評分與染色強度評分的乘積，陰性表達指分數≤3分，陽性表達指分數﹥3分。

1.4 隨訪 統計隨訪時間和生存情況。

1.5 統計學處理 采用SPSS21.0統計學軟件，計量資料比較采用檢驗，計數資料比較采用檢驗，繪制Kaplan-Meier生存曲線，肺鱗癌患者預后的影響因素采用多因素Logistic回歸模型分析。<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 FGFR1在肺鱗癌及癌旁組織中的表達 FGFR1在肺鱗癌組織中的陽性表達率(62.22%，28/45)高于在癌旁組織中的陽性表達率(35.56%，16/45)，差異有統計學意義(=6.403，<0.05)。

2.2 FGFR1在不同臨床資料肺鱗癌患者中的表達情況 肺鱗癌患者FGFRl陽性表達組和陰性表達組的性別、吸煙史、分化程度、淋巴轉移、遠處器官轉移、TNM分期比較，差異均有統計學意義(<0.05)。見表1。

表1 FGFR1在不同臨床資料肺鱗癌患者中的表達情況[n(%)]Table 1 FGFR1 expression in lung squamous cell carcinoma patients[n(%)]

2.3 FGFR1表達與肺鱗癌患者預后的關系 該組病例中40例獲得隨訪，失訪5例，隨訪時間3.9～41.0個月，平均隨訪時間為(24.40±6.10)個月，中位隨訪時間為25.80個月，其中FGFR1表達陽性組患者中位生存時間為24.94個月，FGFR1表達陰性組患者中位生存時間為35.09個月。兩組患者生存時間比較，差異有統計學意義(<0.05)。多因素Logistic回歸分析顯示，分化程度、淋巴結轉移、遠處器官轉移、TNM分期、吸煙史、FGFR1陽性是影響肺鱗癌患者預后的獨立危險因素(<0.05)，見表2。

表2 肺鱗癌患者預后的多因素Logistic回歸分析Table 2 Multivariate Logistic regression analysis of prognosis of patients with lung squamous cell carcinoma

3 討論

流行病學研究顯示，肺鱗癌發生率僅次于肺腺癌，全球每年約有40萬患者死于肺鱗癌。肺癌不同個體或同一個體處于不同狀態下的基因和蛋白表達譜不同，存在明顯的個體特征。個體化治療模式逐漸成為腫瘤臨床治療研究的熱點。

本研究結果顯示，FGFR1在肺鱗癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織，提示FGFR1的高表達可能是引起肺鱗癌發生發展的重要原因。肺鱗癌患者中發生FGFR1基因擴增的概率為10.7%～20.7%，高于肺腺癌的3%。研究發現，FGFR1基因擴增和表達與吸煙狀況有關，男性、有吸煙史的肺鱗癌患者的FGFR1陽性表達率顯著高于女性和無吸煙史患者。本研究結果顯示，肺鱗癌患者FGFRl陽性表達組和陰性表達組的性別、吸煙史、分化程度、淋巴轉移、遠處器官轉移、TNM分期均有顯著差異，FGFR1表達陽性組患者中位生存時間短于FGFR1表達陰性組患者，提示FGFR1表達與肺鱗癌的發生發展及預后存在密切關聯。有文獻報道，胃癌患者FGFR1表達與腫瘤分化程度、TNM分期呈正相關，可能與lncRNA-BBOX1-2正向調節 FGFR1表達參與胃癌的發生發展有關。賴蓉的研究結果顯示，肺鱗癌原發灶SUVmax與T分期存在顯著關聯，相關系數為0.324(=0.005)，與 N、M分期無關。王雨亮的研究結果顯示FGFRl的基因擴增與TNM分期無關。本研究結果顯示，TNM分期Ⅳ期患者FGFRl陽性表達率顯著高于其他TNM分期者，后續還需加大樣本量和延長隨訪時間，進一步明確FGFRl表達在肺鱗癌患者中的臨床意義。經多因素Logistic回歸分析顯示，分化程度、淋巴結轉移、遠處器官轉移、TNM分期、吸煙史、FGFR1陽性是影響肺鱗癌患者預后的獨立危險因素，提示FGFR1表達可作為預測肺鱗癌患者生存質量的臨床指標及治療靶點。

綜上所述，FGFR1在肺鱗癌組織中的陽性表達率明顯高于在癌旁組織中的陽性表達率，FGFRl表達在不同性別、吸煙史、分化程度、淋巴轉移、遠處器官轉移、TNM分期的肺鱗癌組織中的表達存在顯著差異。FGFRl陽性是影響肺鱗癌患者預后的獨立危險因素，FGFRl表達結果可作為判斷肺鱗癌患者病情嚴重程度和預后的重要參考指標。