AIDS患者抗病毒治療中IP-10水平的變化及臨床意義

范偉光， 蘇苗苗， 孟 娟， 石鵬輝， 張 珍

（1.保定市人民醫院檢驗科，河北 保定 071000；2.保定市人民醫院感染科，河北 保定 071000）

人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是導致人類免疫功能缺陷的主要病毒，可主動整合入宿主細胞的DNA，難以徹底清除[1]。HIV感染可導致機體出現嚴重的免疫功能抑制和缺陷，進而導致多種機會性感染、惡性腫瘤等并發癥，最終導致死亡[2]。近年來，隨著高效抗逆轉錄病毒治療（highly active antiroviral therapy，HAART）的廣泛應用，由HIV感染導致的獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）的傳染率及病死率明顯下降。但AIDS患者體內的HIV仍可以以潛伏形式，即前病毒DNA的形式持續存在，持續存在的HIV儲存庫是無法根治HIV感染的根本原因[3]。干擾素誘生蛋白10（interferon-inducible protein-10，IP-10）屬于趨化因子CXC亞家族，由白細胞、上皮細胞、內皮細胞、基質細胞和角化細胞等細胞分泌[4]。IP-10可通過與CXC趨化因子受體3（CXC chemokine receptor 3，CXCR3）結合，發揮趨化作用，募集多種CXCR3+細胞進入炎癥部位[5]，介導輔助性T細胞（T helper cell，Th）1型炎癥反應。IP-10與病毒性感染中的炎癥反應也有密切關系，在機體抗病毒感染的免疫應答過程中，通過與其受體CXCR3的相互作用參與機體的免疫應答反應[6]。目前，關于AIDS患者治療前后IP-10的變化及IP-10與HAART療效的關系的研究較少。為此，本研究擬探討IP-10在HIV感染中的臨床價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年1月—2019年6月保定市人民醫院接受HAART的AIDS患者200例（AIDS組），其中男155例、女45例，年齡（34.57±7.62）歲。以HAART后血漿HIV-1 RNA＜50 拷貝/mL定義為病毒抑制，根據治療后的HIV-1 RNA水平將AIDS患者分為HIV-1抑制組和HIV-1未抑制組。納入標準：（1）酶聯免疫吸附試驗和免疫印跡法均確認HIV-1抗體陽性；（2）初次確診為HIV感染，處于感染無癥狀期，未接受過HAART；（3）最近1個月內未出現外傷、急慢性感染或炎癥性疾病；（4）最近1個月內未服用過抗菌藥物、免疫調節藥物等；（5）無免疫系統疾病史；（6）無嚴重心、腦、血管、肝臟、腎臟等重要臟器疾病；（7）符合HIV-1抗病毒治療條件；（8）患者治療依從性和隨訪依從性良好，且簽署知情同意書。排除標準：（1）并發乙型肝炎、丙型肝炎、全身感染等其他感染性疾病；（2）并發惡性腫瘤及嚴重的心、腦、血管、肝臟、腎臟等重要臟器疾病；（3）處于妊娠期及哺乳期；（4）有吸毒史；（5）治療依從性差，不能完成治療及配合隨訪。另選取保定市人民醫院健康體檢者100名作為正常對照組，其中男75名、女25名，年齡（35.49±8.15）歲。納入標準：（1）經酶聯免疫吸附試驗和免疫印跡法確認為HIV-1抗體陰性；（2）體格檢查正常，各項實驗室檢測指標均處于參考區間內，或超出參考區間但判斷無臨床意義；（3）無嚴重心、腦、血管、肝臟、腎臟等重要臟器疾病史或住院史；（4）無手術、外傷、輸血和藥物過敏史；（5）簽署知情同意書。AIDS組與正常對照組性別、年齡差異均無統計學意義（P＞0.05）。本研究經保定市人民醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 治療方法

HIV-1感染患者確診后立即接受HAART，采用我國一線免費抗病毒治療方案[7]：富馬酸替諾福韋二吡呋酯片，0.3 g/次，每天1次；拉米夫定0.3 g/次，每天1次；依非韋倫0.6 g/次，每天1次。所有患者均持續治療18個月。

1.3 方法

分別于治療前及治療2周、1個月、2個月、3個月、6個月、12個月和18個月時采集AIDS患者空腹肘靜脈血8～10 mL。樣本采集后采集正常對照者體檢當日空腹肘靜脈血8～10 mL，分別置于普通真空采血管和乙二胺四乙酸二鈉抗凝采血管中，混勻，分離血清或血漿。

在抗凝血樣本中加入單克隆熒光抗體標記，采用BD FACSCalibur 流式細胞儀（美國BD公司）及配套試劑檢測CD4+和CD8+T細胞水平。采用cobas TaqMan全自動病毒載量分析系統（瑞士羅氏公司）檢測血漿HIV-1 RNA，檢測下限和定量下限均為20 拷貝/mL。采用Quantikine酶聯免疫試劑盒（美國R&D Systems公司）測定血清IP-10水平，嚴格按試劑說明書操作，試劑盒最低檢測限為1.67 pg/mL，線性范圍1.67～5 000 pg/mL，批內和批間變異系數分別為3.6%、6.7%。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0軟件進行統計分析。呈正態分布的數據以x±s表示，2個組之間比較采用獨立樣本t檢驗，治療前后比較采用配對t檢驗。計數資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Spearman相關分析評估IP-10與其他指標之間的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 AIDS組HIV-1 RNA水平

AIDS組中同性傳播149例（74.50%），異性傳播51例（25.50%），HIV-1 RNA為（4.62±0.73）lg拷貝/mL。

2.2 AIDS組與正常對照組各項指標比較

AIDS組CD4+T細胞百分比顯著低于正常對照組（P＜0.01），IP-10水平和CD8+T細胞百分比顯著高于正常對照組（P＜0.01）。見表1。

表1 AIDS組與正常對照組各項指標比較

2.3 AIDS患者治療前、后各項指標比較

與治療前比較，AIDS患者隨著治療時間的延長，CD4+T細胞百分比逐漸升高（P＜0.01），CD8+T細胞百分比及IP-10、HIV-1 RNA水平逐漸降低（P＜0.01），HIV-1復制受抑制的患者比例逐漸升高（P＜0.01）；治療18個月時HIV-1抑制的患者所占比例達到95.50%。見表2。

表2 AIDS患者治療前及治療后各時間點各項指標的比較

2.4 治療后各時間點HIV-1抑制患者與HIV-1未抑制患者各項指標的比較

治療3、6、12和18個月時，HIV-1抑制組CD4+T細胞百分比顯著高于HIV-1未抑制組（P＜0.01），CD8+T細胞百分比和IP-10水平均低于HIV-1未抑制組（P＜0.01）。見表3。

表3 治療后各時間點HIV-1抑制組與HIV-1未抑制組各項指標的比較

2.5 AIDS患者治療前IP-10水平與CD4+T細胞百分比、CD8+T細胞百分比、HIV-1 RNA水平的相關性

Spearman相關分析顯示，治療前AIDS患者IP-10水平與CD4+T細胞百分比呈負相關（r=-0.763，P＜0.05），與CD8+T細胞百分比和HIV-1 RNA水平呈正相關（r值分別為0.801、0.823，P＜0.05）。

3 討論

HIV感染人體后主要攻擊輔助性T淋巴細胞，侵入細胞后會通過同源重組機制將自身的病毒基因整合入宿主T淋巴細胞，使其終生難以消除。IP-10是一種重要的CXC家族趨化因子，主要誘導因子是γ干擾素（interferon-gamma，IFN-γ），IP-10可通過與其受體的作用來趨化并激活Th至病灶位置，從而激活機體的免疫系統，抵抗感染，并抑制病毒復制過程[8]。在生理狀態下，IP-10的表達量較低；在病理條件下，各種抗原刺激可誘導外周血單個核細胞產生大量IP-10[9]。有Meta分析結果顯示，IP-10可作為診斷肺結核的生物標志物，具有較高的敏感性和特異性[10]。有研究結果顯示，IP-10是感染HIV后水平最早上升的細胞因子之一[11]。IP-10可作為篩查急性期發熱的血清HIV抗體陰性者是否感染HIV的關鍵指標，當血漿IP-10水平為161.6 pg/mL時，其診斷HIV急性感染的敏感性、特異性分別為95.5%、76.5%[12]。本研究結果顯示，AIDS組IP-10水平顯著高于正常對照組（P＜0.01）。HIV-1感染可分別通過Toll樣受體（Toll-like receptor，TLR）7/9信號通路或黑色素瘤分化相關基因5（melanoma differentiationassociated gene 5，MDA5）/視黃酸誘導基因蛋白Ⅰ（retinoic acid-inducible gene Ⅰ，RIG-Ⅰ）信號通路依賴性誘導IP-10表達上調[13]。在HIV急性感染期，聚集的漿細胞樣樹突狀細胞可通過產生干擾素誘導包括單核細胞和嗜中性粒細胞在內的多種白細胞表達IP-10[14]。在HIV慢性感染期，HIV感染持續誘導產生的IFN-γ也可直接誘導IP-10表達上調[15]。此外，本研究結果還顯示，AIDS組CD4+T細胞百分比顯著低于正常對照組（P＜0.01），CD8+T細胞百分比顯著高于正常對照組（P＜0.01）。這與HIV感染人體后主要攻擊Th細胞有關。

ROE等[16]的研究結果顯示，丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）與HIV合并感染患者血清IP-10水平顯著高于HIV單獨感染患者（P=0.012）；在HCV單獨感染患者中，肝纖維化與血清IP-10水平呈正相關（r=0.605，P=0.013）。本研究結果顯示，AIDS患者接受HAART后，CD4+T細胞百分比升高，HIV-1 RNA水平、CD8+T細胞百分比和IP-10水平降低；治療3、6、12和18個月，HIV-1抑制患者CD4+T細胞百分比顯著高于HIV-1未抑制患者（P＜0.01），CD8+T細胞百分比和IP-10水平均低于HIV-1未抑制患者（P＜0.01）；Spearman相關分析結果顯示，AIDS患者IP-10水平與CD4+T細胞百分比呈負相關（r=-0.984，P＜0.05），與CD8+T細胞百分比和HIV-1 RNA水平呈正相關（r值分別為0.958、0.991，P＜0.05）。LIOVAT等[17]研究發現，在原發HIV感染的初期，血漿IP-10≥869 pg/mL預示HIV感染進展迅速，IP-10水平升高預示著CD4+T細胞的迅速減少，同時能預測急性感染6個月后CD4+T細胞計數的變化。NOEL等[18]的研究結果顯示，HIV精英控制者入組時IP-10水平與12個月后的CD4+T細胞計數呈負相關（r=-0.41，P=0.000 9）。RAMIREZ等[19]的研究結果表明，IP-10相關的T細胞功能下降可能是鈣信號傳導途徑異常的結果，同時也是p38磷酸化蛋白表達下降的結果。IP-10水平不僅與CD4+T細胞快速減少有關[20]，同時還可影響CD4+T細胞和CD8+T細胞的功能[21]。因此，IP-10可作為判斷HIV感染嚴重程度的關鍵指標，還可作為判斷HAART臨床療效的指標。

總之，AIDS患者IP-10水平變化明顯，且與CD4+T細胞、CD8+T細胞及HIV-1 RNA水平有關，是潛在的AIDS病情和療效評估的指標。