BC-6000PLUS血液分析儀體液模式檢出限分析

龍一飛， 孟少偉， 劉健平， 張宏遠， 林冬玲

（廣州中醫藥大學第二附屬醫院 廣東省中醫院檢驗科，廣東 廣州 510006）

腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液等是臨床較常見的體液標本，這些標本的常規檢測，尤其是白細胞計數和紅細胞計數，有非常重要的臨床價值。目前，很多全自動血液分析儀已實現搭載體液標本的細胞計數和分類檢測模式，不但提高了檢測速度和準確度、精密度，而且易于標準化，臨床應用越來越廣泛。

深圳邁瑞公司BC-6000PLUS全自動血液分析儀（簡稱BC-6000PLUS）帶有體液檢測模式，但廠商未提供體液細胞計數的檢測下限，無法確保低值體液標本（尤其是腦脊液）檢測結果的穩定性與準確性。我國衛生行業標準WS/T 662—2020《臨床體液檢驗技術》[1]（簡稱WS/T 662—2020）附錄A中明確要求每個實驗室都應建立所用體液模式檢測系統的有核細胞計數和紅細胞計數的檢測下限。據此，本研究以我國衛生行業標準WS/T 514—2017《臨床檢驗方法檢出能力的確立與驗證》[2]（簡稱WS/T 514—2017）文件內容為指導，建立并評價BC-6000PLUS體液模式WBC-BF和RBC-BF細胞計數的空白限（limit of blank，LoB）和檢出限（limit of detection，LoD）[3]，以更好地指導臨床檢測工作。

1 材料和方法

1.1 標本制備

1.1.1 空白樣本 以BC-6000PLUS配套稀釋液（DC稀釋液）為空白樣本。

1.1.2 系列低濃度樣本 根據WBC-BF與RBCBF的LoB值，各配制6個WBC-BF與RBC-BF低濃度水平樣本（根據WS/T 514—2017要求，系列低濃度樣本配制濃度最好為LoB～4倍LoB）。本研究系列低濃度樣本配制采用臨床新鮮腦脊液標本，其WBC-BF與RBC-BF檢測濃度分別約0.01×109/L和0.01×1012/L，用0.9%氯化鈉溶液進行梯度稀釋，配制成10%、20%、40%、60%、80%、100%濃度比例稀釋樣本，稀釋后WBCBF系列理論濃度分別為0.001×109/L、0.002×109/L、0.004×109/L、0.006×109/L、0.008×109/L、0.010×109/L；RBC-BF系列理論濃度分別為0.001×1012/L、0.002×1012/L、0.004×1012/L、0.006×1012/L、0.008×1012/L、0.010×1012/L。

1.2 方法

參考WS/T 514—2017要求，通過統計學方法建立WBC-BF與RBC-BF LoB值和LoD值。所有實驗操作程序均嚴格按照儀器說明書和科室標準操作規程文件要求進行。

1.2.1 LoB值 采用BC-6000PLUS配套DC稀釋液作為空白樣本，每天在BC-6000PLUS體液模式下重復檢測10次，連續6 d，得到60個統計數據。

1.2.2 LoD值 根據LoB值濃度范圍，人工配制一系列低濃度水平體液樣本。鑒于體液樣本穩定性較差，不易保存，配制的6個WBC-BF與RBC-BF低濃度水平樣本在1 d內的不同時間段重復檢測10次，WBC-BF與RBC-BF項目各得到60個統計數據。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0軟件進行統計分析。若數據呈方差齊性，則采用參數統計方法計算；若實驗數據呈非方差齊性，則采用非參數統計方法計算。

2 結果

2.1 LoB值

BC-6000PLUS體液模式WBC-BF和RBCBF所有空白檢測值均為0。檢測結果符合正態分布，按公式LoB=μB+1.645σB計算LoB值，式中μB和σB為空白檢測結果均值和標準差。BC-6000PLUS體液模式WBC-BF LoB值為0×109/L，RBC-BF LoB值為0×1012/L。

2.2 LoD值

數據呈非正態分布，采用非參數分析方法建立WBC-BF和RBC-BF LoD值，按公式LoD=LoB+Dsβ計算LoD值，式中Dsβ為檢測結果中位數（M）與第5百分位數間距，結果見表1、表2。

表1 系列低濃度WBC-BF樣本檢測結果 ×109/L

表2 系列低濃度RBC-BF樣本檢測結果 ×1012/L

2.2.1 WBC-BF LoD值 在60個低濃度水平樣本數據分布中，中位數（M）=60×0.5+0.5=第30.5秩號數值=0.005×109/L，第5百分位數=60×0.05+0.5=第3.5秩號數值=0.001×109/L，Dsβ=0.005×109/L-0.001×109/L=0.004×109/L。WBC-BF LoD=LoB+Dsβ=0×109/L+0.004×109/L=0.004×109/L。

2.2.2 RBC-BF LoD值 在60個低濃度水平樣本數據分布中，中位數（M）=60×0.5+0.5=第30.5秩號數值=0.006×1012/L，第5百分位數=60×0.05+0.5=第3.5秩號數值=0.002×1012/L，Dsβ=0.006×1012/L-0.002×1012/L=0.004×1012/L。RBC-BF LoD=LoB+Dsβ=0×1012/L+0.004×1012/L=0.004×1012/L。

3 討論

目前，傳統人工鏡檢方法已不能滿足臨床需要，腦脊液、漿膜腔積液、關節腔積液等體液標本自動化檢測將日益普及[4-5]?！禖NAS-CL02醫學實驗室質量和能力認可準則》[7]，即ISO15189：2012要求醫學實驗室需對所選檢驗程序進行性能驗證或確認，證實其達到制造商判定標準，才可用于患者標本檢測。因此，全自動血液分析儀體液檢測模式性能驗證非常重要，包括細胞計數的檢出下限。

2020年10月1日，由國家衛生健康委員會頒布的衛生行業標準WS/T 662—2020已正式實施。該標準附錄A明確規定每個實驗室應建立所用檢測系統有核細胞計數和紅細胞計數的檢測下限，且檢測下限不能低于儀器最低檢出限（LoD）。因為當低值體液標本細胞數量低于檢測下限值時，儀器檢測結果的準確性無法得到保證，此時仍需人工鏡檢計數復核確認，尤其是腦脊液標本。所以體液細胞計數的檢出下限是最為關鍵的性能驗證參數之一，儀器制造商如提供儀器的有核細胞計數和紅細胞計數的檢測下限，此時實驗室僅需按計劃實施檢測下限值的驗證，驗證通過則可直接采用儀器制造商聲明的檢測下限值，但制造商并未提供BC-6000PLUS體液模式計數LoB值和LoD值性能說明，因此，本實驗室需依據相關指南或標準文件要求[1-2，6-7]自建。

根據定義，LoB是空白樣品能被觀察到的最大測量值；LoD是樣品中檢出最低分析物濃度[8]。本研究結果表明，BC-6000PLUS WBC-BF、RBCBF的LoB值分別為0×109/L、0×1012/L，LoD值分別為0.004×109/L、0.004×1012/L。當標本白細胞計數為0.004×109/L或紅細胞計數為0.004×1012/L時，95%概率能與空白樣本進行區分。根據WS/T 662—2020關于“檢測下限不能低于儀器的最低檢出限”的要求，本實驗室設定BC-6000 PLUS的WBC-BF檢測下限值為0.004×109/L；RBC-BF檢測下限值為0.004×1012/L。當WBC-BF與RBC-BF檢測結果低于檢測下限時，表明儀器無法保證檢測結果準確，需用人工鏡檢計數“金標準”方法來復檢。

綜上所述，本研究依據WS/T 514—2017標準要求，建立并評價了BC-6000PLUS體液模式的LoB和LoD。因WBC-BF與RBC-BF細胞計數檢出下限值較低，能滿足腦脊液等臨床體液標本自動化檢測的需求。