仔豬水腫病病原分離鑒定及免疫防治研究

張葉茹

摘要：仔豬水腫病（ED）在全球流行廣泛，嚴(yán)重影響著畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的飲食健康。本文通過對仔豬水腫病研究發(fā)現(xiàn)， 引起豬斷奶后腹瀉（PWD）和水腫病（ED）的大腸桿菌菌株僅限于若干血清群，其中滴定檢測法和微陣列檢測法是較為常見的兩種檢測方法。這兩種方法可以有效對地方養(yǎng)豬場豬糞樣品進(jìn)行檢測和驗證，還可以對患有水腫病的仔豬進(jìn)行大腸桿菌篩查。

關(guān)鍵詞：仔豬；水腫病；腹瀉；檢測法

仔豬水腫病是造成斷奶仔豬產(chǎn)生巨大損失的一種嚴(yán)重疾病。大腸埃希菌，也被稱為大腸桿菌（VTEC），被認(rèn)為是豬只患水腫病的主要病因。這些菌株克隆了斷奶仔豬的腸道，并在腸道中產(chǎn)生對細(xì)胞致命的毒素，因此被稱為大腸桿菌。大腸桿菌中的毒素也被稱為志賀樣毒素（SLT），因為它們與痢疾志賀菌產(chǎn)生的志賀毒素關(guān)系密切。目前，根據(jù)與志賀氏菌毒素的關(guān)系命名為志賀氏菌毒素（Stxl，Stx2，Stx2c，Stx2e），產(chǎn)生毒素的大腸桿菌菌株命名為志賀氏菌產(chǎn)毒大腸桿菌（STEC）。在豬身上，水腫病可能發(fā)展為異能血癥，這是斷奶仔豬易患的一種疾病，通常在斷奶后一周內(nèi)發(fā)生，是由于在斷奶后立即給仔豬喂食含藥物的飼料混合物造成感染，老年動物大多不會出現(xiàn)這種情況。在發(fā)生水腫病的豬群中，一窩中的一只仔豬受影響會傳染所有的仔豬，但是也有個別仔豬根本不受這種病的影響。因此可以使用抗毒血清防治水腫病，血清是用從Stx2e類毒素和脂類調(diào)節(jié)劑制備的。

志賀毒素檢測的滴定試驗在VERO細(xì)胞上進(jìn)行。將加熱至56℃滅活30分鐘的血清連續(xù)稀釋，并添加抗生素。向所有稀釋液中加入等量的含有志賀毒素的大腸桿菌上清液（濃度為10%），細(xì)胞毒性劑量會對50%的vero細(xì)胞系產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)，將混合物放在室溫下靜置。第二天，將60微升不同稀釋度的混合物加入平板孔中，并加入90微升濃度為3×10/毫升的Vero細(xì)胞懸浮液。在37℃條件下孵育后，通過掃描電子顯微鏡微鏡下對結(jié)果進(jìn)行評估。72小時后對樣品進(jìn)行最后一次血清稀釋，抑制Vero細(xì)胞變性50%，提高中和抗體滴度，得到檢測結(jié)果。

當(dāng)微陣列檢測法直接應(yīng)用于豬糞便樣本時，可以用于豬場監(jiān)測或特定地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查，是一種有效的初步篩選方法。第一步是使用微陣列直接用豬糞便樣本檢測是否存在潛在的致病性O(shè)血清群。一旦發(fā)現(xiàn)致病血清群，可進(jìn)行進(jìn)一步平板接種以分離目標(biāo)血清群菌落。然后可以通過相同的微陣列檢查分離的菌株，以確定毒力基因模式。雖然微陣列可直接用豬糞便樣本同時檢測致病血清群和毒力基因，但血清群特異性和毒力基因可能來自不同的宿主菌株。PWD和ED疾病通常發(fā)生在斷奶后14天內(nèi)的仔豬身上。攜帶具有相關(guān)毒力基因的PWD和ED相關(guān)血清群菌株的成年豬本身可能不會表現(xiàn)出任何癥狀，但卻可以成為仔豬的感染源。由于病原體的快速傳播，導(dǎo)致大型豬場爆發(fā)PWD和ED，因此在開始繁殖或購買仔豬時，使用這種微陣列對PWD和ED相關(guān)大腸桿菌菌株進(jìn)行初步篩選非常重要。這是檢測PWD和ED的首個可全面檢測大腸桿菌血清型和致病型的DNA微陣列，并有望作為一種新的診斷工具，用于調(diào)查散發(fā)性感染和暴發(fā)以及監(jiān)測這些菌株在不同地理位置的血清群/病理型分布。

對已經(jīng)發(fā)病仔豬在飼料中加入鹽類瀉劑連用2天。病初可采用亞硒酸鈉和維生素E，對癥治療。可用卡那霉素、硫酸新霉素或硫酸鏈霉素，每天2次，連續(xù)注射2～3天。利用分離的病原菌制備高免血清，給仔豬口服或注射，可用于預(yù)防或緊急治療。治療要今早，提倡采用綜合防治方法。一旦發(fā)現(xiàn)仔豬患水腫病，要整窩、全群用藥，特別對感染但未表現(xiàn)臨床癥狀的豬只，以爭取更多的治療時間。增加飼料中多種維生素、硒等的含量，以提高抗應(yīng)激水平。進(jìn)行藥敏試驗，有針對性地使用抗菌藥物，同時要用地塞米松、高滲葡萄糖等加強抗炎與解毒治療。靜注、腹腔注射效果要好于肌注效果。降低日糧蛋白，有利于控制疾病。