慢性心力衰竭患者血清中NAMPT mir-206表達及臨床意義

哈斯高娃， 烏吉斯古楞

(內蒙古醫科大學附屬醫院， 內蒙古 呼和浩特市 010050)

慢性心力衰竭是一組由心臟結構和/或功能異常引起的復雜的臨床綜合征，當患者出現心力衰竭時，往往已到了疾病的終末階段[1]。雖然慢性心力衰竭的治療方法在不斷更新，但并沒有使患者的死亡率下降[2]。因此，及時識別診斷并給予有效治療對慢性心力衰竭患者有重要意義。B型鈉尿肽(B-type natriuretic peptide，BNP)是診斷心力衰竭的常用指標，但由于肺栓塞、高齡等原因會對BNP結果產生一定影響[3]，因此，尋找新的靈敏度和特異度較高的標志物對及時診斷十分重要。煙酰胺磷酸核糖轉移酶(Nicotinamide phosphoribose transferase，NAMPT)參與能量代謝，在調控炎癥反應及腫瘤的發生與發展中起著關鍵性作用[4]。mir-206是miRNA家族成員，具有調節細胞生長增殖和分化的作用[5]。基于此，本研究將探討NAMPT、mir-206在慢性心力衰竭患者中的表達水平，并分析血清中NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭患者的預測價值。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2020年1月至2021年8月在本院接受治療的慢性心力衰竭患者76例為心衰組，男40例，女36例，吸煙史：有39例，無37例，飲酒史：有38例，無38例，年齡48～74歲，平均(56.28±7.22)歲，心功能分級，Ⅱ級18例，Ⅲ級29例，Ⅳ級29例。納入標準：①符合《中國心力衰竭診斷和治療指南(2018)》[6]中慢性心力衰竭診斷標準；②病情穩定且病程>1年者；③心功能分級在Ⅱ～Ⅳ級者；④2周內未接受過治療者。排除標準：①伴有先天性心臟病者；②伴有急性心肌梗死者；③伴有多臟器功能衰竭者；④合并嚴重全身感染者；⑤病情危重，生存期限≤3個月者。另選取同期在本院體檢健康者34例為健康組，男20例，女14例，吸煙史：有18例，無16例，飲酒史：有19例，無15例，年齡46～72歲，平均(55.12±7.28)歲。本研究經本院倫理委員會批準。比較兩組患者吸煙史、飲酒史、年齡等一般資料，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2方 法

1.2.1樣本采集及RNA提取:外周血樣本：分別抽取兩組患者清晨空腹靜脈血5mL，在室溫下3000r/min離心15min，得到上層血清，放入-80℃冰箱保存備用。血清總RNA樣本：使用miRNeasy試劑盒(德國 Qiagen)提取RNA，將所得外周血與PBS溶液1∶1混合，室溫下1500r/min進行離心處理，當離心管內血液分為4層后，取第二層與PBS再次混合，室溫下1000r/min離心2次，提取RNA。

1.2.2實時熒光定量PCR:使用逆轉錄試劑盒對提取的RNA進行逆轉錄，得到cDNA后，使用qRT-PCR檢測試劑盒(美國Gene-Copoeia)，在羅氏LightCycler 480Ⅱ擴增儀進行擴增，具體反應體系參照試劑盒說明書，反應程序為95℃預變性10min，95℃變性15s，60℃退火30s，72℃延伸10s，共40個循環。每個樣本重復3次，取平均值，使用2-△△Ct公式，確定miR-206表達水平。

1.2.3酶聯免疫吸附法:采用酶聯免疫吸附法檢測兩組患者血清中NAMPT和BNP水平，試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，具體步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.4彩色多普勒超聲心動圖檢查:采用超聲心動圖(深圳市靖邦電子有限公司)檢測兩組患者就診當天LVEDD和LVEF水平。

1.3觀察指標:比較心衰組和健康組血清中NAMPT、mir-206水平及不同心功能分級患者血清NAMPT、mir-206水平，分析血清中NAMPT、mir-206的表達與LVEDD、LVEF及BNP的相關性，并分析血清中NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭患者的預測價值。

1.4統計學方法:采用SPSS25.0統計學軟件對數據進行錄入與分析，計量資料以均數±標準差表示，兩組間比較采用t檢驗，多組數據間比較利用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數資料用例(n)或率(%)表示，行卡方檢驗。利用Pearson法分析慢性心力衰竭患者血清中NAMPT、mir-206的表達與LVEDD、LVEF及BNP的相關性，利用受試者工作特征曲線(ROC)分析血清中NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭患者的預測價值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1心衰組和健康組血清中NAMPT、mir-206表達水平及LVEDD、LVEF、BNP指標比較:心衰組NAMPT、LVEDD、BNP水平高于健康組(P<0.05)，mir-206、LVEF水平低于健康組(P<0.05)。見表2。

表2 心衰組和健康組血清中NAMPT mir-206表達水平及LVEDD LVEF BNP指標比較

2.2不同心功能分級患者血清NAMPT、mir-206水平比較:慢性心力衰竭患者血清中NAMPT水平隨著心功能分級的增加逐漸升高(P<0.05)，mir-206水平隨著心功能分級的增加逐漸降低(P<0.05)。見表3。

表3 不同心功能分級患者血清NAMPT mir-206水平比較

2.3慢性心力衰竭患者血清NAMPT、mir-206水平與LVEDD、LVEF及BNP之間的關系:Pearson結果顯示，慢性心力衰竭患者血清NAMPT水平與LVEDD和BNP水平之間均呈正相關(r=0.750、0.757，P<0.05)，與LVEF水平呈負相關(r=-0.759，P<0.05)；血清mir-206水平與LVEDD和BNP水平之間均呈負相關(r=-0.775、-0.883，P<0.05)，與LVEF水平呈正相關(r=0.819，P<0.05)。見表4。

表4 慢性心力衰竭患者血清NAMPT mir-206水平與LVEDD LVEF及BNP之間的關系

2.4血清NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭患者的預測價值:ROC結果顯示，血清NAMPT、mir-206水平預測慢性心力衰竭的曲線下面積(AUC)分別為0.853(95%CI：0.773-0.913)、0.981(95%CI：0.935-0.998)，對應的特異度分別為61.76%、97.06%，靈敏度分別為93.42%、88.16%；血清NAMPT、mir-206二者聯合預測慢性心力衰的AUC為0.993，特異度為97.06%，靈敏度為96.05%。見圖1，表5。

圖1 血清NAMPT、mir-206水平診斷慢性心力衰竭的ROC曲線

表5 血清NAMPT mir-206水平對慢性心力衰竭患者的診斷價值

3 討 論

慢性心力衰竭是心血管疾病患者死亡的主要原因，主要表現為乏力、呼吸困難、水腫等，對患者日常生活帶來很大困擾[7]。并且隨著我國老齡化的加重，慢性心力衰竭的發病率呈上升趨勢。因此，及時診斷及時治療對減少慢性心力衰竭的發病率有重要意義。NAMPT具有調節炎癥反應及腫瘤發生與發展的作用。如：李楊楊等[8]研究表明，NAMPT在呼吸機相關性肺炎患者中呈高表達，并且NAMPT表達水平增高可加重炎癥反應，增加呼吸機相關性肺炎的病死率。茍小霞等[9]研究表明，NAMPT參與著細胞間信號傳導，細胞增殖，在腦膠質瘤中呈高表達，且與腦膠質瘤預后密切相關。本研究結果顯示，NAMPT在慢性心力衰竭患者中表達水平高于健康者，且隨著心功能分級的增高，NAMPT的表達水平也逐漸升高，提示，NAMPT在慢性心力衰竭患者中呈高表達，且高表達水平NAMPT可能與慢性心力衰竭發生有關。BNP是診斷慢性心力衰竭的標志物，隨著慢性心力衰竭的加重，BNP會逐漸升高[10]。LVEDD、LVEF也是反應心功能的有效指標，LVEDD會隨著心力衰竭的加重而增加，LVEF隨著心力衰竭的加重而降低。相關性分析結果顯示，血清NAMPT與LVEDD和BNP水平之間呈正相關，與LVEF呈負相關，提示血清NAMPT和LVEDD、LVEF、BNP共同發揮作用，參與慢性心力衰竭的發生與發展。

mir-206位于人類染色體6p12.2上，是miRNA家族成員，參與細胞分化與血管形成[11]。郭登斌等[12]研究結果顯示，mir-206與骨的發育有關，并且能夠抑制骨細胞分化，在骨折延遲愈合患者中呈低表達。白愛紅等[13]研究結果顯示，mir-206在多囊卵巢綜合征患者血清中呈低表達，且表達水平與胰島素抵抗有關。本研究結果顯示，mir-206在慢性心力衰竭患者中呈低表達，且表達水平與心功能分級密切相關，提示，mir-206參與著慢性心力衰竭患者的病情進展。相關性分析結果顯示，血清mir-206水平與LVEDD和BNP水平之間均呈負相關，與LVEF水平呈正相關，提示血清mir-206與LVEDD、LVEF、BNP共同參與著慢性心力衰竭的發生與發展。BNP作為臨床預測慢性心力衰竭的常用指標之一，靈敏度、特異度均已獲得大量臨床證據支持，但BNP水平變化與多種心血管疾病的發生有關，僅以其作為預測指標可能會存在漏診或誤診患者，因此在結合患者臨床表現的基礎上，尚需參考其他易于檢測的血清指標進行判斷，以提高診斷的準確性。本研究ROC結果顯示，血清NAMPT、mir-206二者聯合預測慢性心力衰竭的AUC為0.993高于血清NAMPT、mir-206單獨預測慢性心力衰竭的AUC(0.853、0.981)，具有較高的靈敏度、特異度，提示全面檢測血清NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭的發生有一定預測價值，對輔助鑒別慢性心力衰竭具有積極意義。

綜上所述，慢性心力衰竭患者血清NAMPT表達水平升高、mir-206表達水平降低，與患者心功能分級有關，對慢性心力衰竭的發生有一定的預測價值，有望成為診斷慢性心力衰竭的生物學指標。但后續還應加大樣本量，進一步對本研究結果進行驗證。