氣相色譜串聯質譜法同時測定魚金注射液中芳樟醇和甲基正壬酮含量

陳驍勇，葛玉松

（1. 江蘇省鹽城市第一人民醫院，江蘇 鹽城 224000； 2. 江蘇省鹽城市食品藥品監督檢驗中心，江蘇 鹽城 224000）

魚金注射液由魚腥草和金銀花2 味藥材經現代工藝提取制成，具有清熱解毒功效，臨床常用于治療熱毒內盛所致上呼吸道感染、支氣管肺炎、病毒性肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術后發熱［1-4］。魚腥草為三白草科植物蕺菜Houttuynia cordataThunb. 的新鮮全草或干燥地上部分，含有生物堿、揮發油等多種成分，其中揮發性成分甲基正壬酮具有抗氧化、抗炎、抗病毒等作用［5-7］。金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb. 的干燥花蕾或帶初開的花，含有機酸、揮發油、黃酮等成分，其中揮發油芳樟醇對大腸桿菌具有較強抑制作用［8-10］。目前，魚金注射液質量標準［11］中僅甲基正壬酮的定量測定方法。為了更好地控制產品質量，本研究中采用氣相色譜串聯質譜（GC - MS/MS）法同時測定制劑中芳樟醇和甲基正壬酮的含量［12-15］。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 8890GC - 7000D 型氣質聯用分析儀（含Agilent 8890 型氣相色譜儀）、7000D 型三重四極桿質譜檢測器、7697A 型頂空進樣器，均購自安捷倫科技有限公司；XS05DU 型電子天平（梅特勒- 托利多儀器<上海>有限公司）。

1.2 試藥

魚金注射液（陜西醫藥控股集團山海丹藥業有限責任公司，批號分別為19040079，20200129，190301，20200619，191208）；芳樟醇對照品（批號為111503 -202004，含量98.8%），甲基正壬酮對照品（批號為110834 - 201603，含量99.8%），均購自中國食品藥品檢定研究院。其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 試驗條件

色譜條件：色譜柱為Agilent 19091S - 431 HP -5MS 毛細管柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫，初始溫度為70 ℃，保持5 min，以5 ℃/min 的速率升至140 ℃，保持5 min，以25 ℃/min 的速率升至250 ℃；進樣口溫度為250 ℃；流速為1.0 mL/min；進樣方式為頂空進樣，置10 mL頂空瓶中，加熱溫度為90 ℃，平衡45 min，分流比為10∶1。

質譜條件：電子轟擊離子源；電子能量為70 eV；離子源溫度為230 ℃；MSD 傳輸線溫度為280 ℃；四極桿溫度為150 ℃；淬滅氣（氦氣）流速為2.25 mL/ min；碰撞氣（氮氣）流速為1.50 mL/ min；多反應監測（MRM）掃描模式，參數優化見表1。總離子流圖見圖1。

表1 MRM參數優化Tab.1 Optimization of MRM parameters

圖1 總離子流圖Fig.1 Total ion chromatograms

2.2 溶液制備

分別稱取芳樟醇對照品34.37 mg、甲基正壬酮對照品15.25 mg，精密稱定，置同一50 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解，定容，即得混合對照品貯備液；精密量取0.8 mL，置10 mL 容量瓶中，加水定容，搖勻，即得混合對照品溶液。以樣品為供試品溶液。按魚金注射液處方工藝分別制成缺魚腥草、金銀花的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：分別取2.2 項下混合對照品貯備液0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，置10 mL 容量瓶中，加水定容，搖勻，即得系列混合對照品溶液。精密量取1 mL，按2.1項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度。以待測成分質量濃度（X，mg/mL）為橫坐標、離子強度（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程及線性范圍。詳見表2。

表2 線性關系考察結果（n=6）Tab.2 Results of the linear relation test（n=6）

精密度試驗：精密量取混合對照品溶液1 mL，共6 份，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度。結果芳樟醇、甲基正壬酮離子強度的RSD分別為1.21%和0.97%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，8，16，24 h 時按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度。結果芳樟醇、甲基正壬酮離子強度的RSD分別為1.91%和1.39%（n= 6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內穩定性良好。

重復性試驗：取同一批（批號為19040079）樣品，共6 份，每份1 mL，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度，并計算樣品含量。結果芳樟醇和甲基正壬酮的平均含量分別為49.28 μg/mL和31.72 μg/mL，RSD分別為1.81%和1.45%（n= 6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取同一批（批號為19040079）樣品0.5 mL，共6 份，精密加入對照品溶液0.5 mL，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度，并計算加樣回收率。結果見表3。

表3 加樣回收試驗結果（n=6）Tab.3 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測定

取5 批樣品各適量，按2.2 項下方法制備供試品溶液，并按2.1項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度，并計算樣品含量，平行操作3次。結果見表4。

表4 樣品含量測定結果（μg/mL，n=3）Tab.4 Results of content determination of linalool and methyl -nnonylketone in the samples（μg/mL，n=3）

3 討論

3.1 供試品溶液制備

預試驗中比較了蒸餾提取揮發油法、固相萃取小柱法及頂空進樣法。揮發油測定法樣品用量較大，蒸餾時間長，油水不易完全分離，易有水溶性雜質干擾。固相萃取小柱法的前處理復雜，有機溶劑用量大。而頂空進樣法可直接取樣品進樣，操作簡便。

3.2 測定方法確定

現行標準中采用火焰離子化檢測器測定成分含量，該法靈敏度低，且對柱效要求高。而頂空進樣法可直接取樣，具有快速、高效、環保的優勢。質譜法具有靈敏度高、專屬性強、重復性好、雜質不影響主成分測定等特點，故本試驗中采用質譜法測定。預試驗中還考察了頂空溫度（85，90，95 ℃）及平衡時間（35，40，45，60 min），發現采用頂空溫度為90 ℃、平衡時間為45 min時，重復性較好。

3.3 質譜條件確定

預試驗中對混合對照品溶液進行二級質譜全掃描，綜合考慮一級掃描質譜圖中質荷比和響應強度選取母離子。對選定母離子進一步進行產物離子掃描，選取2 對離子對用于MRM 掃描，并對MRM 掃描離子對進行碰撞能量優化。