基于活血作用的三七粉質量標志物研究＊

李 新，徐 旭，許 浚，郭海彪，李曉霞，林 娟，張鐵軍＊＊，劉 旻＊＊

（1.天津藥物研究院/天津市中藥質量標志物重點實驗室 天津 300301；2.天津藥物研究院 中藥現代制劑與質量控制技術國家地方聯合工程實驗室 天津 300301；3.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司 廣州 510515；4.華北理工大學研究生院 唐山 063200）

中藥質量是決定其臨床安全有效的基礎，由于中藥具有化學成分復雜、作用機制不清楚等特點，與現代藥品質量控制體系的有機結合還存在一定困難，現有中藥質量控制模式仍存在諸多問題，難以客觀評價和有效控制中藥質量。為解決上述問題，2016 年劉昌孝院士提出了中藥質量標志物（quality marker，QMarker）這一核心質量概念。該概念關聯安全性和有效性，著眼于全過程的物質基礎特有、差異、動態(tài)變化和質量的傳遞性、溯源性，并且具有整體、多元質控的特點，對建立中藥全過程質量控制及質量溯源體系，規(guī)范中藥質量研究和標準建立具有很好的引領作用[1-2]。中藥的整體質量與化藥不同，不是單一成分效果的簡單相加；而是由多層次成分、多環(huán)節(jié)靶點、多維度作用的非線性/線性的協同。因此，首先要對影響中藥質量的藥效成分群與生物活性的相互作用進行分析，針對中藥功效的多靶點進行物質基礎研究，明確藥效物質群，然后以藥效物質群為基礎向上下游延伸，更好地建立中藥整體質量評價體系[3]。

中藥三七是五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.) F.H.Chen 的干燥根和根莖，產于云南、廣西等地區(qū)。三七粉是三七洗凈，干燥，碾成的細粉，性溫，味甘、微苦，歸肝、胃經，功效為散瘀止血、消腫定痛，主要用于治療外傷出血、胸腹刺痛、跌撲腫痛等[4-5]。其主要特點為即有活血作用又有止血作用。《醫(yī)學衷中參西錄》載：“三七，善化瘀血……化瘀血而不傷新血，允為理血妙品。”三七粉活血作用廣泛用于治療各種瘀血證，如冠心病心絞痛、慢性胃炎胃脘痛、崩漏、血痹等病證[6]。從三七粉中分離得到的化學成分主要有皂苷類、黃酮類、糖類、多醇類、聚炔醇類、揮發(fā)油類、氨基酸類及有機酸類等，其中皂苷類為三七粉的主要化學成分。以三七總皂苷（Panax Notoginseng Saponins, PNS）為原料藥的中藥制劑，如血塞通注射液、三七總皂苷膠囊等，已經成為目前中藥制劑中年銷售額最大的品種之一[7]。

2020 版藥典記載三七含量測定以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1為指標[8]。研究發(fā)現三七粉中除人參皂苷Rg1[9]、人參皂苷Rb1[10]和三七皂苷R1[11]具有活血作用外，也有其他成分具有活血作用，如人參皂苷Rg3可延長活化部分凝血活酶時間（Activated Partial Thromboplastin Time, APTT），抑制二磷酸腺苷（Adenosine Diphosphate, ADP）誘導的血小板聚集[12]；槲皮素可延長全血凝血時間，具有抗凝作用，對已成型血栓可降低其質量，促進血栓溶解[13]。目前，針對三七粉活血作用的物質基礎研究還比較分散，有必要進一步開展系統(tǒng)地研究工作，明確其活血作用的質量標志物。本研究在前期網絡藥理和入血成分研究基礎上，對三七粉中十多種成分的活血作用進行考察，探索三七粉基于活血作用的質量標志物。

1 實驗材料

三七總皂苷（PNS）：天津藥物研究院制備，主要成分為人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1，純度＞70%。三七粉主要成分：人參皂苷Rh1（批號：R26N9F75983）、人參皂苷Re（批號：B04D9S76499）、槲皮素（批號：C09S8Y43412）、人參皂苷F2（批號：Z10A9X58128）、人參皂苷Rg1（批號：G16S10Y97436）、人參皂苷Rg3（批號：Z14J10X90607）、人參皂苷Rd（批號：Z09A9X67397）、人參皂苷Rb2（批號：P15O10F9498 3）、人參皂苷Rb1（批號：P19S10U98130）、人參皂苷Rb3（批 號：P05M10F87444）、人 參 皂 苷Rk1（批 號：B27J8S39859）、三七皂苷R1（批號：G22D9Y77958）、人參皂苷Rg2（批號：M07N10S102243）（批號：R05N10F10 2244）等實驗樣品，均購自上海源葉生物科技有限公司。

試劑盒：凝血酶時間（Thrombin Time, TT）試劑盒（批號：031906A）、活化部分凝血活酶時間（APTT）試劑盒（批號：021908A）、凝血酶原時間（Prothrombin Time, PT）試劑盒（批號：011901B）、纖維蛋白原（Fibrinogen,FIB）試劑盒（批號：041908B），美德太平洋（天津）生物科技股份有限公司產品。

試劑：二磷酸腺苷（ADP）（批號：SLCB5611）、去氧腎 上腺 素（phenylephrine，PE）(批 號：MTBXK-CP)，sigma公司產品。

儀器：凝血因子分析儀（LG-Paker 1），北京普利生儀器有限公司；血小板聚集儀（型號：540VS），美國Chrono-log 公司；JZ301 型微張力換能器，北京新航興業(yè)科貿有限公司；MP-150 多導生理信號記錄儀、DA100C 通用放大器，Biopac 公司；HSS-1B 型離體器官恒溫裝置，成都儀器廠；低溫高速離心機，Thermo公司。

動物：家兔，品系為日本大耳白兔，普通級，日齡100-150 日，體質量2.0-2.5 kg，購自北京隆安實驗動物養(yǎng)殖中心，生產許可證號：SYXK（京）2019-0009。

2 實驗方法

2.1 對凝血指標的影響

凝血機制包括凝血和抗凝兩個方面，兩者間的動態(tài)平衡是正常機體維持體內血液流動狀態(tài)和防止血液丟失的關鍵。抗凝機制減弱引起血栓形成是心腦血管發(fā)病的重要原因之一。凝血四項包括凝血酶時間（TT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、纖維蛋白原（FIB），是監(jiān)控凝血系統(tǒng)的重要指標。

實驗取健康日本大耳白家兔6只，雄性，適應性喂養(yǎng)7 天后，禁食過夜，頸總動脈取血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝，全血與抗凝劑之比為9:1，3000 rmp 4℃離心10 min制備血漿。將兔血漿分為2 大組，第一大組分為空白對照組、水溶劑對照組和6個劑量的PNS組（蒸餾水溶解，終濃度為0.1、1、10、100、1000、5000 mg·L-1），共8個小組。第二大組分空白對照組、5%DMSO 溶劑對照組和13 個三七化學成分組，即人參皂苷Re 組、人參皂苷Rh1組、槲皮素組、人參皂苷Rg1組、人參皂苷F2組、人參皂苷Rg3組、人參皂苷Rb2組、人參皂苷Rd 組、人參皂苷Rb1組、人參皂苷Rk1組、人參皂苷Rb3組、三七皂苷R1組、人參皂苷Rg2組，每個化學成分組分別再設5個劑量組（每個化學成分樣品以5%DMSO溶解，終濃度分別為0.05，0.5，5，50，100μM），共67小組。

在兔血漿中分別加入實驗樣品，溶劑對照組分別加入等體積蒸餾水或5%DMSO，空白對照組不做任何添加，37℃孵育15 min；采用凝固法，分別測定凝血酶時間（TT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、纖維蛋白原（FIB）。

TT主要反映纖維蛋白原轉為纖維蛋白的時間，測定方法：取待測血漿200μL，37℃預溫3 min，加入TT試劑200μL，記錄凝固時間，即凝血酶時間（TT）。APTT 主要反映內源性凝血系統(tǒng)狀況，測定方法：取待測血漿100μL，加入APTT 試劑100μL，37℃孵育5 min，再加入已預溫至37℃的氯化鈣（CaCl2）溶液100μL，記錄凝固時間，即活化部分凝血活酶時間（APTT）。PT 主要反映外源性凝血系統(tǒng)狀況，測定方法：取待測血漿100μL，37℃預溫3 min，加入已預溫至37℃的PT 試劑200μL，記錄凝固時間，即凝血酶原時間（TT）。纖維蛋白原（FIB）主要反映纖維蛋白原的含量，測定方法：取不同稀釋度定標血漿各200μL，37℃預溫3 min，分別加入凝血酶溶液100μL，記錄凝固時間，制成標準曲線；待測血漿檢測操作同上，FIB 含量根據凝固時間由儀器在標準曲線上自動讀出。

2.2 對血小板聚集率的影響

血小板聚集是活化的血小板相互作用聚集成團的特性。當血流產生異常的剪切力時可以誘導血小板活化聚集，進而促發(fā)血栓發(fā)生發(fā)展[14]；在創(chuàng)傷發(fā)生時，血小板迅速粘附于血管破損處，并聚集成團形成止血栓子，發(fā)揮有益的止血作用；在高血壓、脂質過氧化物損傷血管內皮時，血小板聚集參與形成動脈粥樣硬化，因此，抗血小板治療成為腦血管病的常規(guī)治療[15]。

實驗取健康日本大耳白家兔6只，雄性，適應性喂養(yǎng)7 天后，禁食過夜，頸總動脈取血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝，全血與抗凝劑之比為9:1，1000 rmp 4℃離心10min制備富含血小板血漿（PRP），3000rmp 4℃離心10min制備貧血小板血漿（PPP），以PPP 調PRP，使其血小板計數保持在1.8～2.2×106個/ml。分別取250 μL PRP加入不同比色杯中，分別加入PNS（終濃度為0.1、1、10、100、1000 mg·L-1）和人參皂苷Re、人參皂苷Rh1、槲皮素、人參皂苷Rg1、人參皂苷F2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rb3、三七皂苷R1、人參皂苷Rg2實驗樣品，每種實 驗樣 品設5 個濃 度，分別 為0.05，0.5，5，50，100μM；2 個溶劑對照組分別加入等體積蒸餾水、5%DMSO。

按比濁法測定血小板聚集性，依次取上述比色杯，置于血小板聚集儀待測區(qū)37℃溫孵10 min。然后置于檢測區(qū)進行檢測：以PPP調100%，PRP調零，在連續(xù)自動攪拌下加入誘導劑ADP，終濃度約為6μM，根據血小板聚集后對透光率的變化，儀器自動記錄血小板聚集率。

2.3 對血管平滑肌的影響

冠心病或缺血性腦病的一個重要發(fā)病原因和危險因素是冠狀動脈狹窄或腦血管狹窄。心腦血管狹窄可使經過心腦血管的血流減少，進而造成心肌細胞或腦細胞缺血死亡。常見的導致血管狹窄的病變包括血管壁有動脈硬化的斑塊或者血管壁增厚，又或者是血管壁里有夾層，導致血管壁總體變厚，而引起心腦血管變窄。擴張血管是改善心腦供血的主要治療手段之一。

實驗取健康日本大耳白家兔6只，雄性，適應性喂養(yǎng)7 天后，禁食過夜，戊巴比妥鈉麻醉，頸總動脈放血后，迅速開胸取胸主動脈，置于預冷生理鹽水中剝離血管表面筋膜，用小眼科剪將主動脈剪成若干螺旋條，置于組織灌流系統(tǒng)37oC 恒溫水浴槽中，被37oC Krebs-Henseleit 營養(yǎng)液完全浸沒，營養(yǎng)液成分包括NaCl 119 mM，KCl 4.7 nM，MgCl21.2 mM，NaH2CO312.0 mM，葡萄糖11 mM，CaCl22.5mM；并給予95%O2及5%CO2飽和混合氣體；動脈條下端固定，上端鏈接張力換能器，由計算機采集張力變化曲線。

營養(yǎng)液中加入去氧腎上腺素，終濃度為0.5 mg·L-1，使動脈條收縮并保持收縮穩(wěn)定狀態(tài)后，分別加入人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素、人參皂苷Rg1、人參皂苷F2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb3、三七皂苷R1、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rg2實驗樣品，每種樣品先以DMSO 儲備液溶解，再以蒸餾水稀釋，配成3劑量的藥液，在營養(yǎng)液中的終濃度分別為1，5，25 μM；溶劑對照組為終濃度0.2%的DMSO；待曲線穩(wěn)定后，測量加藥前后曲線變化值，即張力變化值。正值代表血管收縮，而負值代表血管舒張。

2.4 統(tǒng)計學處理

所有數據均使用GraphPad Prism 5 軟件進行統(tǒng)計處理，用均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way analysis of variance, one-way ANOVA）Tukey法，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。

3 實驗結果

3.1 對凝血因子的影響

3.1.1 對TT的影響

水溶劑組與空白對照組比較，對TT的作用無顯著差異（P＞0.05）。5%DMSO 溶劑組與空白對照組比較，可顯著延長TT（P＜0.01），結果見圖1（A）和（B）。以蒸餾水溶解的PNS 組與水溶劑組比較，在5×103mg·L-1濃度時可顯著延長TT（P＜0.01），結果見圖1（A）；以5%DMSO 溶解的單體成分實驗藥物組與5%DMSO 溶劑對照組進行比較，人參皂苷Rb2在50、100 μM，人參皂苷F2在50 μM，人參皂苷Rb3在100 μM，三七皂苷R1在5.0 μM，人參皂苷Rk1在50、100 μM，人參皂苷Rg2在50、100 μM 時可顯著延長TT（P＜0.05，），結果見圖1（B）。

圖1 PNS及各單體成分對TT 的影響。（A）PNS對TT的影響；（B）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對TT的影響。

3.1.2 對APTT的影響

水溶劑組與空白對照組比較，對APTT 的作用無顯著差異（P＞0.05）。5%DMSO 溶劑組與空白對照組比較，可顯著延長APTT（P＜0.01），結果見圖2（A）和（B）。以蒸餾水溶解的PNS 組與水溶劑組比較，在1×103-5×103mg·L-1濃度時可顯著延長APTT（P＜0.05），結果見圖2（A）；以5%DMSO 溶解的單體成分實驗藥物組與5%DMSO 溶劑對照組進行比較，槲皮素在0.05、0.5 μM，人參皂苷F2在50、100 μM，人參皂苷Rd在100 μM，人參皂苷Rb2在50 μM，人參皂苷Rb1在0.05 μM，人參皂苷Rg2在5.0 μM 時可顯著延長APTT（P＜0.05），結果見圖2（B）。

圖2 PNS及各單體成分對APTT的影響。（A）PNS對APTT的影響；（B）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對APTT的影響。

3.1.3 對PT的影響

水溶劑組與空白對照組比較，對PT的作用無顯著差異（P＞0.05）。5%DMSO 溶劑組與空白對照組比較，對PT 的作用亦無顯著差異（P＞0.05），結果見圖3（A）和（B）。以蒸餾水溶解的三七總皂苷組與水溶劑組比較，在5×103mg·L-1濃度時可顯著延長PT 凝固時間（P＜0.01），結果見圖3（A）。以5%DMSO 溶解的單體成分實驗藥物組與5%DMSO 溶劑對照組比較，人參皂苷Re 在50μM，槲皮素在5.0μM，人參皂苷F2在0.05、0.5μM，人參皂苷Rb3在5.0μM 時可顯著延長PT（P＜0.05），結果見圖3（B）。

圖3 PNS及各單體成分對PT的影響.（A）PNS對PT的影響；（B）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對PT的影響。

3.1.4 對FIB的影響

水溶劑組與空白對照組比較，可顯著增加FIB 的含量（P＜0.05）。5%DMSO 溶劑組與空白對照組比較，可顯著降低體系中FIB 的含量（P＜0.01），結果見圖4（A）和（B）。以蒸餾水溶解的三七總皂苷組與水溶劑組比較，可不同程度的降低FIB 含量，呈現劑量依賴性，1×103和5×103mg·L-1兩個劑量效果顯著（P＜0.05和P＜0.01），結果見圖4（A）。以5%DMSO 溶解的單體成分實驗藥物組與5% DMSO 溶劑對照組比較，槲皮素在0.05 μM，人參皂苷Rg1在0.05 μM，人參皂苷F2在50 μM，人參皂苷Rg3在0.5 μM，人參皂苷Rb1在0.05 μM，人參皂苷Rb2在100 μM，人參皂苷Rb3在50、100 μM，人參皂苷Rg2在100 μM，三七皂苷R1在0.5、5.0 μM 時可顯著降低血漿FIB 含量（P＜0.05），結果見圖4（B）。

圖4 PNS和各單體成分對FIB的影響。（A）PNS對FIB的影響；（B）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對FIB的影響。

3.2 對血小板聚集率的影響

觀察不同配藥溶劑對血小板聚集率的影響，發(fā)現水溶劑對照組血小板聚集率（%）為40.08±7.53，5%DMSO 溶劑對照組血小板聚集率（%）為35.00±10.16，兩者無顯著差異（P＞0.05），結果見圖5（A）和（B）。以蒸餾水溶解的三七總皂苷組與水溶劑組比較，1×103mg·L-1劑量時顯著降低ADP誘導的血小板聚集率（P＜0.01），結果見圖5（A）。以5%DMSO 溶解的單體成分實驗藥物組與5% DMSO 溶劑組比較，人參皂苷Rh1在50、100 μM，人參皂苷F2在0.05 μM，人參皂苷Rg1在0.05-50 μM，人參皂苷Rg3在0.05、100 μM，人參皂苷Rd 在50 μM，人參皂苷Rb2在5.0-100 μM，人參皂苷Rb1在50、100 μM，人參皂苷Rg2在50 μM，三七皂苷R1在5.0-100 μM時血小板聚集率顯著降低（p＜0.05），結果見圖5（B）、（C）。

圖5 三七總皂苷和各單體成分對ADP誘導家兔血小板聚集的影響。（A）PNS對ADP誘導家兔血小板聚集的影響；（B）和（C）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對ADP誘導家兔血小板聚集的影響。

3.3 對血管平滑肌的影響

與DMSO 溶劑對照組比較，人參皂苷Rh1在5、25μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05，P＜0.01）；人參皂苷Rg3在25μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05）；人參皂苷Rd 在1、5、25 μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05）。人參皂苷Rk1在1、5、25 μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05，P＜0.01）；三七皂苷R1在1、25μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05）；人參皂苷Rg2在25 μM 時，可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05），結果見圖6。

圖6 各單體成分對PE誘導離體家兔主動脈環(huán)收縮的影響

4 討論

三七粉活血作用廣泛應用于各種血栓性疾病的治療中。李晨曦等觀察活血祛瘀湯（以當歸、三七超微粉等為主要成分）與低分子肝素鈣聯合使用觀察對骨盆骨折術后凝血指標的影響，選擇氣滯血瘀證型的骨盆骨折病例60例，依據隨機的原則將病例分為治療組和對照組各30例，在圍術期內所有患者均給予相同的下肢深靜脈血栓（DVT）基礎預防干預，治療組在術后加服活血祛瘀湯，分別記錄術前、術后1 天、術后1周和2周的凝血指標變化。結果發(fā)現活血祛瘀湯與低分子肝素鈣聯合使用干預骨盆骨折術后患者的凝血狀態(tài)，能夠延長（TT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT），降低纖維蛋白原（FIB）含量，改善骨盆骨折術后早期凝血功能，聯用使用比單獨使用低分子肝素抗凝效果更好[16]。

三七粉化學成分類型多樣，主要有皂苷類、黃酮類、多糖類、氨基酸類等[17]。皂苷類化合物是三七粉主要的化學成分和有效成分[4]。劉雷等研究發(fā)現主要有效成分為三七總皂苷的注射用血栓通能夠對凝血酶、二磷酸腺苷（ADP）以及膠原誘導的血小板聚集具有明顯的抑制作用，其作用機制可能與抑制血小板機械力離子通道Piezo1蛋白的活化并抑制Ca2+內流相關[14,17]。

三七粉中皂苷類成分可分為原人參二醇型皂苷（protopanaxadiol） 、 原 人 參 三 醇 型 皂 苷（protopanaxatriol）、側鏈變化型皂苷及其他類型皂苷。王靖等將123 例患者隨機分為腦蛋白水解物組、三七通舒膠囊（主要成分人參三醇皂苷）組、聯合用藥組，每組41 例，分別給予相應藥物，療程2 周。三七通舒膠囊組雙側腦血流速度中左側椎動脈（LVA）、左側椎動脈（RVA）、椎-基底動脈度（BA）升高（P＜0.05），血液流變學指標中全血黏度（WBV）、血漿黏度（PV）水平降低（P＜0.05），內皮素-1（ET-1）水平降低（P＜0.05），降鈣素基因相關肽（CGRP）升高（P＜0.05），說明三七通舒膠囊能擴張血管，通暢血流，改善血管內皮功能和血液流變學[18]。

除有效部位外，三七粉中的單體成分也有很多研究。陳重華等研究發(fā)現三七皂苷R1能顯著促進或改善小鼠耳廓的微循環(huán)，亦可延長血漿復鈣時間[11]。方芳等研究發(fā)現三七皂苷R1可抑制AngⅡ誘導的血管平滑肌細胞增殖、遷移，可能是三七皂苷R1預防和治療動脈粥樣硬化及血管再狹窄等血管增生性疾病的作用機制之一[19]。尚不確定三七皂苷R1是否具有直接擴血管作用。蔡婷等研究發(fā)現低濃度（40 μmol·L-1）三七皂苷R1可促進血小板衍生生長因子BB（PDGF-BB）誘導血管平滑肌細胞（VSMC）增殖，高濃度（80 μmol·L-1和160 μmol·L-1）三七皂苷R1能抑制VSMC 增殖并誘導VSMC 發(fā)生凋亡。未見三七皂苷R1直接抑制血小板聚集的報道。本研究采用體外組織灌流方法發(fā)現三七皂苷R1能夠直接舒張動脈條，采用體外ADP誘導血小板聚集的方法發(fā)現三七皂苷R1具有抗血小板聚集的作用。

研究發(fā)現人參皂苷Rd 也能顯著促進或改善小鼠耳廓的微循環(huán)，延長血漿復鈣時間[11]，未見人參皂苷Rd 抗血小板聚集的報道。Zhang Baobao 等研究發(fā)現口服人參皂苷Rd 能過逆轉尼古丁引起的血清一氧化氮（NO）減少和血管緊張素II（AngII）生成增強，HE 染色顯示主動脈內皮細胞受到保護[21]。人參皂苷Rd 是否具有直接擴血管作用尚需進一步驗證。本研究采用體外組織灌流方法發(fā)現人參皂苷Rd 具有直接擴血管的作用，體外血小板聚集實驗發(fā)現三七皂苷Rd 具有抗血小板聚集的作用。人參皂苷Rb2的研究多集中在抗炎和抗氧化方面。Cho Woo Hyun 等研究發(fā)現人參皂苷Rb2能夠抑制大鼠呼吸機誘導肺損傷（VILI）產生的炎癥和氧化應激反應[22]。未見人參皂苷Rb2抗凝和抗血小板聚集的報道。本研究發(fā)現人參皂苷Rb2能夠延長TT、APTT，減少FIB含量，抑制血小板聚集。張然等研究發(fā)現人參皂苷Rbl可通過保護肝竇內皮細胞，逆轉組織因子（TF）、組織型纖維蛋白酶原活化劑抑制物（PAI-1）的高表達及肝竇微環(huán)境的高凝及低纖溶狀態(tài)，有效預防肝竇靜脈阻塞綜合癥（HSOS）的發(fā)生[10]。表現出一定的纖溶作用，未見抗凝和抗血小板作用的報道。本研究發(fā)現人參皂苷Rb1能夠延長APTT，減少FIB含量，抑制血小板聚集。

C.T.Li 等研究發(fā)現人參皂苷Rg2均能顯著延長活化部分凝血活酶、凝血酶原和凝血酶時間[9]。未見人參皂苷Rg2擴血管作用的報道。本研究通過體外離體實驗發(fā)現Rg2能夠直接舒張家兔動脈血管條。石耀輝研究發(fā)現人參皂苷Rb3能明顯降低心肌缺血再灌注損傷大鼠血漿前列環(huán)素（PGI2）含量，升高血漿PGI2含量及前列環(huán)素（PGI2）/血栓素（TXA2）比值（P＜0.05 或P＜0.01）[23]，具有抗血栓作用，但對凝血四項指標的作用尚不明確。本研究發(fā)現人參皂苷Rb3可延長TT、PT，減少FIB 含量。周靜等研究發(fā)現人參皂苷F2可抑制3T3-L1前脂肪細胞增殖分化，可能通過在分化前期調控C/EBPβ 表達并抑制PPARγ、C/EBPα 表達水平而減少脂質積累[24]。劉迪等研究發(fā)現人參皂苷F2預處理后能夠減少H2O2誘導凋亡細胞的LDH 釋放率、升高凋亡細胞的線粒體膜電位、保護線粒體膜免受損傷[25]。未見人參皂苷F2活血作用的報道，本研究發(fā)現人參皂苷F2可延長TT、APTT、PT，抗血小板聚集、擴張血管。

本課題通過對三七粉中單體成分的研究新發(fā)現：人參皂苷Rb3可延長TT、PT，減少FIB 含量；人參皂苷Rd 可延長APTT，抑制血小板聚集；人參皂苷Rb1能夠延長APTT，減少FIB 含量，抑制血小板聚集；人參皂苷Rb2能夠延長TT、APTT，減少FIB 含量，抑制血小板聚集；人參皂苷F2能夠延長TT、APTT、PT，抗血小板聚集、舒張動脈條；三七皂苷R1能夠抗血小板聚集、舒張動脈條；人參皂苷Rg2、人參皂苷Rd 能夠舒張動脈條。本研究結果有助于更加系統(tǒng)地了解三七粉活血作用的物質基礎。

綜上所述，三七粉活血作用表現在抗凝、抗血小板聚集、擴血管等方面，人參皂苷F2、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg1、槲皮素等可能為三七活血作用的物質基礎，可作為潛在的質量標志物。