基于心血管保護作用的三七粉質(zhì)量標志物研究＊

李 新，徐 旭，許 浚，林 娟，李曉霞，王德勤，張鐵軍＊＊，郭海彪＊＊

（1.天津藥物研究院/天津市中藥質(zhì)量標志物重點實驗室 天津 300301；2.天津藥物研究院/中藥現(xiàn)代制劑與質(zhì)量控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室 天津 300301；3.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司 廣州 510515；4.華北理工大學(xué)研究生院 唐山 063200）

中藥質(zhì)量一直是中藥臨床需求和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要問題。中藥區(qū)別于化學(xué)藥的特點主要體現(xiàn)在中藥是一個復(fù)雜體系，一種中藥往往含有結(jié)構(gòu)、性質(zhì)不盡相同的多種成分，不同性質(zhì)的成分數(shù)量多、結(jié)構(gòu)差異大，而化學(xué)藥一般由單體或幾個化合物組成；由于中藥成分復(fù)雜，常通過多途徑、多成分、多靶點、多層次發(fā)揮整體療效作用，而化學(xué)藥作用于人體特異性靶點，具有較高的選擇性和專一性[1]。由于中藥質(zhì)量缺少系統(tǒng)的理論指導(dǎo)，長期以來，聚焦到中藥質(zhì)量本質(zhì)和內(nèi)涵的研究，還處于碎片化狀態(tài)，是制約中藥質(zhì)量研究的關(guān)鍵瓶頸問題[2]。為解決這一問題，2016 年劉昌孝院士針對中藥生物屬性、制造過程及配伍理論等自身醫(yī)藥體系的特點，整合多學(xué)科知識，提出了中藥質(zhì)量標志物（quality marker，Q-Marker）這一核心質(zhì)量概念。該概念關(guān)聯(lián)安全性和有效性，著眼于全過程的物質(zhì)基礎(chǔ)特有、差異、動態(tài)變化和質(zhì)量的傳遞性、溯源性，并且具有整體、多元質(zhì)控的特點[3]。

中藥三七是五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.) F.H.Chen 的干燥根和根莖，主要產(chǎn)地云南、廣西等地區(qū)，性溫，味甘、微苦，歸肝、胃經(jīng)，功效為散瘀止血、消腫定痛，主要用于治療外傷出血、胸腹刺痛、跌撲腫痛等[4]。《本草綱目》稱三七為“止血之神藥、理血之妙品”，三七活血作用廣泛用于心腦血管疾病的防治，含三七成分的中藥制劑，如血塞通注射液、三七總皂苷片等，已經(jīng)成為目前中藥制劑中年銷售額最大的品種之一[5]。通過對130 例急性腦梗死患者的治療觀察，發(fā)現(xiàn)以血塞通注射液+阿托伐他汀聯(lián)合治療,對患者心電異常發(fā)生率，血液流變學(xué)具有顯著降低作用[6]。通過對慢性心力衰竭大鼠模型的研究，發(fā)現(xiàn)三七總皂苷可通過調(diào)節(jié)慢性心力衰竭大鼠心臟功能指標，改善心室收縮肌舒張功能,并降低利鈉肽及血管緊張素Ⅱ水平,有效防止心肌重構(gòu)[7]。2020 年藥典記載三七含量測定以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1為指標[8]。有文獻報道同等劑量三七超微粉的生物利用度優(yōu)于三七常規(guī)粗粉。三七超微粉中主要成分，如人參皂苷Rb1、三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量均高于三七細粉中的成分，兩者間的含量有顯著性差異[9]。另外，有研究發(fā)現(xiàn)三七中的其他成分也具有心血管保護作用，如人參皂苷Rg3通過調(diào)節(jié)SIRT1/NFκB 通路抑制NLRP3 炎性小體和氧化應(yīng)激，從而減輕血管緊張素II誘導(dǎo)的心肌肥厚[10]；人參皂苷Rg2通過調(diào)節(jié)TGF-β1/Smad 信號通路減輕心肌纖維化[11]。由此可見，2020 年藥典記載的三七成分人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1，并不能完全代表三七心血管保護的物質(zhì)基礎(chǔ)，而其他相關(guān)研究也比較分散，且多集中在個別皂苷類成分研究，甚至有些研究將一些心血管疾病的病因研究，如凝血機制、血脂異常等，與三七粉直接保護心血管的作用相混淆。目前尚未有針對三七粉保護心血管作用物質(zhì)基礎(chǔ)的系統(tǒng)研究報道。本研究在前期網(wǎng)絡(luò)藥理和入血成分研究基礎(chǔ)上，采用直接干預(yù)心肌細胞、內(nèi)皮細胞的實驗方法，以三七粉中代表成分（包括皂苷類、黃酮類、三七素等）為研究對象，探索三七粉基于心血管保護作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，明確質(zhì)量標志物。

1 實驗材料

三七粉由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司負責(zé)收集，來源于五加科人參屬植物三七Panaxnotoginseng（Burk.）F.H.Chen。三七總皂苷：天津藥物研究院制備。三七粉主要成分：人參皂苷Rh1（批號：R26N9F75983）、人參皂苷Re（批號：B04D9S7649 9）、槲皮素（批號：C09S8Y43412）、人參皂苷F2（批號：Z10A9X58128）、人參皂苷Rg1（批號：G16S10Y97436）、人參皂苷Rg3（批號：Z14J10X90607）、人參皂苷Rd（批號Z09A9X67397）、人參皂苷Rb2（批號：P15O10F9498 3）、人參皂苷Rb1（批號：P19S10U98130）、人參皂苷Rb3（批 號：P05M10F87444）、人 參 皂 苷Rk1（批 號：B27J8S39859）、三七皂苷R1（批號：G22D9Y77958）、人參皂苷Rg2（批號：M07N10S102243）、三七素（批號：R05N10F102244）14 種實驗樣品，均購自上海源葉生物科技有限公司。三七總皂苷和三七素以PBS 配制成儲備液，其他單體成分以DMSO配制成儲備液。

試劑盒：BCA 蛋白濃度測定試劑盒（批號：010719190624）、SOD 試劑盒（批號：060619190723）、MDA 試劑盒（批號：030819190522），碧云天公司產(chǎn)品；LDH 試劑盒，南京建成公司產(chǎn)品（批號：20191109）；ACP試劑盒（批號：FJ2XQKQU6Z）：武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司產(chǎn)品。

試劑：CoCl2·6H2O（批號：SLBZ4786），sigma 公司產(chǎn)品；MTT（批號：123A0510），索萊寶公司產(chǎn)品；H2O2（批號：20181205）國藥集團化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。

儀器：酶標儀，Thermo Fisher Scientific 公司；倒置顯微鏡，Leica 公司；低溫高速離心機；Thermo 公司；生物安全柜：濟南鑫貝西生物技術(shù)有限公司。

細胞：大鼠心肌細胞（H9C2）、人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC），購自于賽百慷（上海）細胞庫。

2 實驗方法

2.1 對心肌細胞的影響

大鼠H9C2 心肌細胞經(jīng)復(fù)蘇、傳代，取對數(shù)生長期的H9C2 細胞接種于96 孔板培養(yǎng)，分別給予三七總皂苷（終濃度為3.125、6.25、12.5、25、50、100、200 mg·L-1）及人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rh1、三七素實驗樣品（每種實驗樣品設(shè)5 個終濃度0.1、1、10、100、200μM），MTT 法測定實驗藥物對正常心肌H9C2 細胞的作用。計算細胞存活率公式如下：細胞存活率（%）=（實驗組OD 值-校正組OD值）÷（對照組OD值-校正組OD值)×100%。

采用CoCl2制備心肌細胞（H9C2）損傷模型。取對數(shù)生長期的H9C2 細胞接種于96 孔板，每孔接種100 μL，在37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h。根據(jù)上述正常H9C2 心肌細胞實驗結(jié)果，按空白組和給藥組給予空白培養(yǎng)液或不同濃度的三七總皂苷/三七單體實驗樣品溶液各50 μL（共150 μL/孔）繼續(xù)培養(yǎng)24 h。處理結(jié)束后，加入終濃度為500 μM 的CoCl2溶液或空白培養(yǎng)液50 μL 至上述96孔板中（共200 μL/孔），在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后每孔避光加入終濃度為0.5 mg·mL-1的MTT 20 μL，在培養(yǎng)箱中孵育4 h。孵育結(jié)束取走上清液后，每孔加入150 μL DMSO，震蕩10 min至藍紫色結(jié)晶完全溶解后，酶標儀490 nm 處測定OD值。每組設(shè)6個復(fù)孔，實驗平行重復(fù)三次。上清液按照試劑盒要求檢測LDH，實驗平行重復(fù)三次。心肌細胞用預(yù)冷PBS 洗2 遍后，每孔加入裂解液60 μL，冰上裂解10min 后，刮下細胞，以12000r 低溫離心10 min，取上清進行蛋白定量。隨后按照試劑盒要求測定MDA含量和SOD活性，實驗平行重復(fù)三次。

2.2 對血管內(nèi)皮細胞的影響

人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）經(jīng)復(fù)蘇、傳代，取對數(shù)生長期的HUVEC 細胞接種于96 孔板培養(yǎng)，分別給予三七總皂苷（終濃度3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400、800 mg·L-1），以及人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rg2、人參皂苷Re、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rd、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rh1、三七素實驗樣品，（每種實驗樣品設(shè)5 個終濃度0.1、1、10、100、200 μM），MTT 法檢測實驗藥物對HUVEC 細胞存活率的作用。

選取對數(shù)生長期的HUVEC細胞，接種于96孔板，密度為6×104cells/mL，每孔中接種100 μL，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24h。根據(jù)上述正常人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）實驗結(jié)果，加入不同濃度的三七總皂苷/三七單體成分50 μL，孵育24h。然后按空白組和造模組分別給予400 μM H2O2溶液或空白培養(yǎng)液各50 μL（共200 μL/孔）繼續(xù)培養(yǎng)2h。藥物處理結(jié)束后，每孔避光加入終濃度為0.5 mg·mL-1的MTT 20 μL，在培養(yǎng)箱中孵育4h。孵育結(jié)束后，取走上清液，每孔加入150 μL DMSO，震蕩10 min 至藍紫色結(jié)晶完全溶解后于酶標儀490 nm 處測定OD 值。每組設(shè)3 個復(fù)孔，實驗平行重復(fù)三次。上清液按照試劑盒說明書檢測LDH、ACP，實驗平行重復(fù)三次。

3 實驗結(jié)果

3.1 對心肌細胞的影響

3.1.1 對正常心肌細胞的影響

三七總皂苷的濃度在3.125-100 mg·L-1時對H9C2 細胞存活率無影響（P＞0.05）；其濃度在200-400 mg·L-1時表現(xiàn)出輕微的細胞增殖作用（P＞0.05），濃度為800 mg·L-1時表現(xiàn)出顯著的細胞毒性（P＜0.01），因此小于等于400 mg·L-1是三七總皂苷的安全劑量。

單體成分中人參皂苷Rb3、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg3和人參皂苷Rh1具有促進心肌細胞增殖作用。部分成分超過10μM，出現(xiàn)毒性反應(yīng)，因此各單體成分在0.1-10 μM 范圍內(nèi)均為安全劑量，可進行效應(yīng)比較。結(jié)果詳見圖1。

圖1 三七總皂苷和各單體對H9C2細胞存活率的影響。（A）三七總皂苷對H9C2細胞存活率的影響；（B-C）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、槲皮素、人參皂苷F2等單體對H9C2細胞存活率的影響。

3.4.2 對心肌損傷細胞存活率的影響

選擇對H9C2 細胞存活率無毒性影響的三七總皂苷濃度在3.125-200 mg·L-1，觀察對CoCl2誘導(dǎo)的心肌細胞（H9C2）損傷模型的影響。實驗結(jié)果表明，三七總皂苷3.125-50 mg·L-1濃度時，與CoCl2組比較，未見顯著差異（P＞0.05）；100、200 mg·L-1時，可顯著增加細胞存活率（P＜0.05，P＜0.01）。

選擇對H9C2 細胞存活率無毒性影響的三七單體成分濃度在在0.1-10 μM，觀察對CoCl2誘導(dǎo)的心肌細胞（H9C2）損傷模型的影響。實驗結(jié)果表明，與CoCl2組比較，三七單體成分人參皂苷Rb3、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rd、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rh1、三七素能夠顯著增加H9C2 細胞存活率（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果詳見圖2。

圖2 三七總皂苷和各單體對CoCl2誘導(dǎo)H9C2細胞存活率的影響。（A）三七總皂苷對CoCl2誘導(dǎo)H9C2細胞存活率的影響；（B-C）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、槲皮素、人參皂苷F2等單體對CoCl2誘導(dǎo)H9C2細胞存活率的影響。

3.4.3 對心肌損傷細胞LDH的影響

三七總皂苷100 mg·L-1、200 mg·L-1預(yù)處理組LDH檢測結(jié)果分別為104.07±45.06，116.64±27.31，與CoCl2細胞損傷模型組檢測結(jié)果152.78±6.92比較，具有顯著差異，能夠減少LDH 活性（P＜0.01）。單體成分人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1和人參皂苷Rh1能夠顯著降低H9C2 細胞上清中LDH 活性（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果詳見圖3。

圖3 各單體化合物對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞上清LDH含量的影響。（A）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2等5個單體化合物對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞上清LDH含量的影響；（B）人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg3、人參皂苷Re等4個單體化合物對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞上清LDH含量的影響；（C）三七總皂苷及槲皮素、人參皂苷F2等5個單體成分對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞上清LDH含量的影響。

3.4.4 對心肌損傷細胞SOD、MDA的影響

三七總皂苷100 mg·L-1、200 mg·L-1預(yù)處理組SOD檢測結(jié)果分別為0.91±0.07，0.74±0.03，與CoCl2細胞損傷模型組檢測結(jié)果0.65±0.03 比較，具有顯著差異，能夠提高SOD 活性（P＜0.05，P＜0.01）。單體成分人參皂苷Rb3、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rd、槲皮素和三七素能夠顯著增加H9C2 細胞SOD 活性（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果詳見圖4。

圖4 各單體化合物對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞SOD含量的影響。（A）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2等9個單體化合物對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞SOD含量的影響；（B）三七總皂苷及槲皮素、人參皂苷F2等5個單體成分對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞SOD含量的影響。

三七總皂苷100mg·L-1、200mg·L-1預(yù)處理組MDA檢測結(jié)果分別為14.62±2.01，11.19±0.38，與CoCl2細胞損傷模型組檢測結(jié)果44.65±2.21比較，具有顯著差異，能夠減少MDA含量（P＜0.01）。

單體成分人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rg3、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rh1和三七素能夠顯著降低H9C2 細胞上清液MDA含量（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果詳見圖5。

圖5 各單體化合物對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞MDA含量的影響。（A）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2等9個單體化合物對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞MDA含量的影響；（B）三七總皂苷及槲皮素、人參皂苷F2等5個單體成分對CoCl2誘導(dǎo)的H9C2細胞MDA含量的影響。

3.5 對血管內(nèi)皮細胞的影響

3.5.1 對正常內(nèi)皮細胞的影響

三七總皂苷的濃度在3.125 mg·L-1時，對HUVEC細胞存活率無顯著影響（P＞0.05）；其濃度在6.25-100 mg·L-1時其細胞存活率雖有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05，P＜0.01），但細胞并未受到明顯損傷；其濃度在200 mg·L-1時細胞存活率與空白對照組無顯著性差異（P＞0.05）；其濃度為400-800 mg·L-1時表現(xiàn)出顯著的細胞毒性（P＜0.01），因此小于等于200 mg·L-1是三七總皂苷的安全劑量。

與溶劑對照組比較，三七皂苷R1在1 μM 劑量下有促進內(nèi)皮細胞增殖作用（P＜0.05）；人參皂苷Rb3在0.1-1 μM 劑量下有促進內(nèi)皮細胞增殖作用（P＜0.05）。各單體成分除人參皂苷F2外在0.1-10 μM 范圍內(nèi)均為安全劑量，可進行效應(yīng)比較。結(jié)果詳見圖6。

圖6 三七總皂苷和各單體對HUVEC細胞存活率的影響。（A）三七總皂苷對HUVEC細胞存活率的影響；（B-C）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、槲皮素、人參皂苷F2等單體對HUVEC細胞存活率的影響。

3.5.2 對內(nèi)皮損傷細胞存活率的影響

選擇對正常內(nèi)皮細胞無毒性作用的三七總皂苷濃度3.125-200mg·L-1，觀察對H2O2誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞（HUVEC）損傷模型的影響。實驗結(jié)果表明，三七總皂苷3.125-100mg·L-1與H2O2組比較，對H2O2誘導(dǎo)的心肌細胞損傷并未見顯著性差異（P＞0.05），三七總皂苷200 mg·L-1可顯著增加細胞存活率（P＜0.01）。

選擇對正常內(nèi)皮細胞無毒性作用的三七單體成分濃度0.1-10 μM，觀察對H2O2誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞（HUVEC）損傷模型的影響。實驗結(jié)果表明，三七單體成分三七皂苷R1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rh1、三七素可顯著提高HUVEC細胞存活率（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果詳見圖7。

圖7 三七總皂苷和各單體對H2O2誘導(dǎo)HUVEC細胞存活率的影響。（A）三七總皂苷對H2O2誘導(dǎo)HUVEC細胞存活率的影響；（B-C）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、槲皮素、人參皂苷F2等單體H2O2誘導(dǎo)對HUVEC細胞存活率的影響。

3.5.3 對內(nèi)皮損傷細胞LDH的影響

三七總皂苷100 mg·L-1、200 mg·L-1預(yù)處理組LDH檢測結(jié)果分別為138.49±13.69，172.48±23.53，與H2O2細胞損傷模型組檢測結(jié)果175.13±17.28 比較，能夠減少LDH活性（P＜0.05，P＞0.05）。

單體成分人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Re、人參皂苷Rd 和三七素均能不同程度降低細胞上清中LDH 活性（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果詳見圖8。

圖8 各單體對H2O2誘導(dǎo)HUVEC細胞上清LDH活性的影響。（A）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2等9個單體化合物對H2O2誘導(dǎo)HUVEC細胞上清LDH活性的影響；（B）三七總皂苷及槲皮素、人參皂苷F2 等5個單體化合物對H2O2誘導(dǎo)HUVEC細胞上清LDH活性的影響。

3.5.4 對內(nèi)皮損傷細胞ACP的影響

三七總皂苷100 mg·L-1、200 mg·L-1預(yù)處理組ACP檢測結(jié)果分別為0.34±0.21，0.45±0.04，與H2O2細胞損傷模型組檢測結(jié)果0.67±0.07比較，能夠減少ACP活性（P＜0.05）。

單體成分人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rg2、人參皂苷Re、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rd、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rh1和三七素均能不同程度降低細胞上清中ACP活性（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果詳見圖9。

圖9 各單體對H2O2誘導(dǎo)HUVEC細胞上清ACP含量的影響（A）三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2等9個單體化合物對H2O2誘導(dǎo)HUVEC細胞上清ACP含量的影響；（B）三七總皂苷及槲皮素、人參皂苷F2 等5個單體化合物對H2O2誘導(dǎo)HUVEC細胞上清ACP含量的影響。

4 小結(jié)

三七單體成分對心肌損傷細胞存活率、心肌細胞LDH、心肌細胞SOD、內(nèi)皮損傷細胞存活率、內(nèi)皮細胞LDH、內(nèi)皮細胞ACP 等6 個指標的作用，匯總?cè)缦拢斠姳?。

表1 三七粉中單體成分心血管保護指標匯總

5 討論

中藥三七是五加科植物人參三七panaxnotoginseng（Burk）F.H.Chen 的干燥根，主產(chǎn)于云南、廣西等地。三七活血作用廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病的防治[12]。其主要作用機制包括，保護心肌，維持心肌正常泵血功能；保護血管內(nèi)皮，預(yù)防動脈粥樣硬化斑塊形成等。三七化學(xué)成分類型多樣，主要有皂苷類、黃酮類、多糖類、氨基酸類等。本實驗結(jié)合血清移行成分結(jié)果和文獻查證，選取了12個人參皂苷類成分（包括5 個人參三醇類成分和7 個人參二醇類成分），1個黃酮類成分和1 個氨基酸類成分，從中藥心血管保護的多種機制方面研究三七的標志性成分。

5.1 保護心肌細胞

冠心病是冠狀動脈粥樣硬化導(dǎo)致血管腔阻塞，心肌缺血、缺氧而引起的心臟病。心臟對缺血缺氧極其敏感，缺血缺氧造成的心肌細胞損傷較難恢復(fù)，因此保護心肌對冠心病患者非常重要[13]。戴紅紅等將92例心源性腦栓塞患者分為對照組和觀察組,對照組（n=46）給予常規(guī)治療，中藥治療組（n=46）在對照組基礎(chǔ)上給予黃芪三七湯治療，結(jié)果顯示經(jīng)過治療后，中藥治療組在生活質(zhì)量評分方面顯著高于對照組,具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），在經(jīng)過治療7 天、14 天后，中藥治療組在NIHSS 評分、MMP-9 方面均顯著比對照組低,具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。因此認為黃芪三七湯治療心源性腦栓塞能夠阻礙患者血漿中MMP-9 的高表達，臨床效果較好[14]。

冷雪等采用異丙腎上腺素建立大鼠急性心肌缺血模型，腹腔注射給予人參皂苷Rg110、20 mg·kg-1，連續(xù)5天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，人參皂苷Rg1組，心肌表面平均血流有顯著提升，血清一氧化氮（NO）升高，肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）降低，心肌丙二醛（MDA）含量降低，谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）含量升高，內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA 表達含量升高，PI3K/Akt 通路蛋白的表達升高，認為人參皂苷Rg1可以通過調(diào)控PI3K-Akt-eNOS 信號通路改善急性心肌缺血大鼠心臟變化防治心血管病變[15]。吳惠珍等采用結(jié)扎冠狀動脈左前支30 min 后再松解手術(shù)線的方法制備大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，灌胃給予人參皂苷Rb310、20、30 mg·kg-1，連續(xù)2 天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，人參皂苷Rb3組大鼠心肌梗死面積百分比降低，同工酶、丙二醛、乳酸脫氫酶、內(nèi)皮舒張因子水平降低，谷胱甘肽過氧化酶、超氧化物歧化酶水平升高，認為人參皂苷Rb3對大鼠心肌缺血再灌注損傷有保護作用，其作用機制可能與抗細胞脂質(zhì)過氧化、抗自由基、抗炎癥反應(yīng)及影響心肌酶參與體內(nèi)能量代謝的過程有關(guān)[16]。

當機體缺血缺氧時，活性自由基會突然生成增多，超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）和維生素等內(nèi)源性物質(zhì)的活性開始降低，由于難以承受負荷，生成的自由基如MDA，難以清除掉，使得細胞內(nèi)的生物膜脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸受到損傷，并引起線粒體受損，因而造成心肌細胞損傷，釋放LDH。本研究采用CoCl2誘導(dǎo)的H9C2心肌細胞損傷模型，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg3、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rh1、三七素可以顯著提高心肌細胞存活率，其機制可能與提高心肌細胞SOD活力，降低MDA含量有關(guān)。

5.2 保護血管內(nèi)皮

血管內(nèi)皮細胞損傷及功能改變是動脈粥樣硬化的初始環(huán)節(jié)。內(nèi)皮細胞損傷不僅可以促進血管局部血栓的形成，還可促進多種細胞因子的釋放，如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶、內(nèi)皮素、5-羥色胺、生長因子、細胞因子、黏附分子等，促進血管的收縮，吸引炎性細胞的趨化和黏附，動脈粥樣斑塊形成[17]。梁文華等選擇109例氣虛痰瘀阻絡(luò)型不穩(wěn)定型心絞痛（UA）患者，分為治療組與對照組。對照組患者給予常規(guī)心內(nèi)科監(jiān)護及規(guī)范治療，治療組患者在對照組基礎(chǔ)上給予自擬的芪蛭三七湯口服治療。結(jié)果顯示，對照組總有效率為73.58%（39/53），治療組總有效率為95.92%（47/49），治療組總有效率高于對照組（P＜0.05），治療后對照組和治療組患者在中醫(yī)證候評分、心絞痛的發(fā)作頻率及硝酸甘油的用量、血液流變學(xué)指標、TXB2、ET-1 等方面均較治療前顯著降低，而且治療組顯著低于對照組（P＜0.05）；治療后，對照組和治療組患者在NO 水平方面顯著升高，且治療組高于對照組（P＜0.05）[18]。

陳文明等采用球囊損傷法制備大鼠頸動脈損傷模型，術(shù)后次日灌胃人參皂苷Rg35、10 mg·kg-1，每日1次，連續(xù)14 天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，人參皂苷Rg3組血管內(nèi)膜增生明顯減輕，內(nèi)膜與中膜面積比明顯下降，新生內(nèi)膜區(qū)平滑肌細胞凋亡率明顯增加，損傷血管Fas 基因表達水平明顯升高，Bcl-2 基因表達水平明顯降低，認為人參皂苷Rg3可能通過促進平滑肌細胞的凋亡，從而減輕球囊損傷后血管內(nèi)膜的增生[19]。鄧敏貞等采用四血管阻斷法復(fù)制血管性癡呆（VD）模型，灌胃給予人參皂苷Rb310 mg·kg-1，每日2 次，連續(xù)30 天。結(jié)果與模型組比較，人參皂苷Rb3組小鼠的避暗潛伏期顯著延長，錯誤次數(shù)均顯著減少，4-羥基壬烯酸（4-HNE）、8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）、活性氧（ROS）含量以及Bax mRNA、蛋白的表達水平均顯著降低，Bcl-2 mRNA、蛋白的表達水平均顯著升高（P＜0.05 或P＜0.01），認為人參皂苷Rb3對VD 模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力具有一定改善作用，其機制可能與抗氧化應(yīng)激、抗海馬組織凋亡有關(guān)[20]。

本研究采用了過氧化氫誘導(dǎo)HUVEC 細胞損傷2h內(nèi)的急性氧化應(yīng)激損傷，與冠心病、高血壓等病理演變的始動環(huán)節(jié)吻合，可誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞存活率降低，細胞功能標志物L(fēng)DH 和ACP 分泌增加。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)三七皂苷R1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rh1、三七素可明顯增高氧化損傷下的細胞存活率，保護內(nèi)皮細胞。

綜上所述，三七具有保護心肌、保護血管內(nèi)皮等作用，主要活性成分為人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、槲皮素、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rh1、三七素等。