一例多種病原混合感染導(dǎo)致肥育豬呼吸道病綜合征的診治

葛生虎，齊曉亮，張 智

（1.河北銘諸生物科技有限公司，河北 邢臺(tái) 054000；2.邢臺(tái)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河北 邢臺(tái) 054000）

隨著生豬規(guī)模化養(yǎng)殖密度不斷提高，豬呼吸道病綜合征（Porcine respiratory disease complex,PRDC）在豬場(chǎng)十分常見(jiàn)，該病是由潛在發(fā)病原（如免疫抑制性病原感染）、繼發(fā)性病原（如常見(jiàn)細(xì)菌病原和病毒）、較差的飼養(yǎng)管理水平和環(huán)境應(yīng)激等多種負(fù)面因素共同影響而引起[1]。該病多發(fā)于保育和肥育階段豬群，多發(fā)于冬季和春季。其臨床癥狀主要包括發(fā)熱、氣喘、呼吸困難、咳嗽和厭食等，發(fā)病較輕時(shí)病死率較低，但會(huì)影響料重比，繼而造成“隱性”經(jīng)濟(jì)損失；發(fā)病較嚴(yán)重時(shí)，其病死率較高，可達(dá)20%～90%，給豬場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2-3]。

大量文獻(xiàn)表明，豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、豬鏈球菌和豬肺炎支原體等是導(dǎo)致豬呼吸道病綜合征的常見(jiàn)原發(fā)性病原，其中PRRSV可感染豬肺泡巨噬細(xì)胞，使病豬出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫抑制，從而繼發(fā)感染其它病原并引發(fā)疾病[4-5]。2021年11月初，河北邢臺(tái)某豬場(chǎng)肥育豬出現(xiàn)咳嗽、氣喘和呼吸困難等癥狀，且病死率較高。根據(jù)診斷結(jié)果，筆者制定系列防控措施，最終使該病得到有效控制，現(xiàn)對(duì)診斷與防控過(guò)程進(jìn)行介紹，旨在為肥育豬呼吸道病綜合征的防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 發(fā)病情況

河北邢臺(tái)某豬場(chǎng)存欄肥育豬約300頭，該場(chǎng)肥育豬群于2021年11月初出現(xiàn)疑似呼吸道病綜合征，其臨床癥狀主要包括呼吸困難、咳嗽和氣喘等；部分發(fā)病嚴(yán)重豬群（最終死亡）皮膚發(fā)紺，口鼻處有血液泡沫；驅(qū)趕也不愿動(dòng)，且體溫上升（＞41 ℃）。該場(chǎng)肥育豬群發(fā)病率為20%左右，病死率達(dá)40%；豬舍內(nèi)平均溫度為20 ℃左右，衛(wèi)生情況較差，且消毒不徹底。全部豬群免疫接種過(guò)豬瘟、豬偽狂犬病和口蹄疫疫苗；雖然養(yǎng)殖戶對(duì)發(fā)病豬群進(jìn)行抗生素治療，但效果不佳，且豬群發(fā)病情況有嚴(yán)重趨勢(shì)。

2 剖檢病變

選擇瀕臨死亡的肥育豬3頭，可見(jiàn)豬只皮膚發(fā)紺，剖檢可見(jiàn)豬氣管嚴(yán)重充血，且有膿性痰液；3頭豬出現(xiàn)明顯的大葉性肺炎，肺部切面有淡黃色膠凍狀液體滲出（圖1A）；胸腔積液較嚴(yán)重，且胃底部均有彌漫性出血或潰瘍，胃腸道沒(méi)有飼料殘?jiān)２∝i心冠脂肪堆積嚴(yán)重（圖1B），肝臟腫大瘀血（圖1C），脾臟腫大、梗死（圖1D）。此外，我們還發(fā)現(xiàn)病豬腎臟瘀血，且膀胱有彌漫性出血或點(diǎn)狀出血。根據(jù)病豬臨床癥狀及病理剖檢結(jié)果，我們認(rèn)為豬群發(fā)病不是由單一病原感染引起，遂取病豬扁桃體、脾臟、肺臟、胸腔積液和氣管黏液等樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

圖1 肥育豬病理剖檢結(jié)果

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌性病原檢測(cè)結(jié)果

分別無(wú)菌切取少量3頭豬各組織樣品（氣管黏液、胸腔積液、肺臟和脾臟）后混勻，加入適量滅菌生理鹽水，高速、低溫勻漿后用滅菌接種環(huán)蘸取少量上清液接種于TSA-YE培養(yǎng)基（含5%小牛血清及1.5%煙酰胺腺嘌呤二核苷酸），按照需氧和厭氧培養(yǎng)方式將其放置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，其后觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。根據(jù)細(xì)菌菌落形態(tài)挑選單一菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢；同時(shí)使用PCR技術(shù)對(duì)分離菌株16S rRNA基因序列進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序與分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：3個(gè)平板上均出現(xiàn)菌落A，其菌落形態(tài)為表面光滑、灰白色的圓形菌落；革蘭氏染色為短桿菌，且兩端鈍圓，屬于革蘭氏陰性菌，進(jìn)一步PCR擴(kuò)增、測(cè)序結(jié)果表明該菌株為胸膜肺炎放線桿菌；2個(gè)平板上出現(xiàn)菌落B，其形態(tài)為光滑、白色半透明的濕潤(rùn)菌落，革蘭氏染色發(fā)現(xiàn)其為球桿菌，且為革蘭氏陰性菌，進(jìn)一步PCR擴(kuò)增、測(cè)序結(jié)果表明該菌株為豬支氣管敗血波氏桿菌；2個(gè)平板出現(xiàn)菌落C，其形態(tài)為表面光滑、濕潤(rùn)的半透明灰白色菌落，屬于革蘭氏陰性桿菌，進(jìn)一步PCR擴(kuò)增、測(cè)序結(jié)果表明該菌株為巴氏桿菌。

3.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

為確定分離菌株對(duì)常見(jiàn)抗生素耐藥性，也為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)，隨機(jī)挑選本文分離的胸膜肺炎放線桿菌、豬支氣管敗血波氏桿菌和巴氏桿菌各5株，選用14種常見(jiàn)抗生素藥敏紙片（杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品）用于細(xì)菌耐藥性試驗(yàn)，其操作步驟和評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格參考產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。結(jié)果如表1所示：同一種細(xì)菌不同菌株對(duì)抗生素敏感性存在差異，其中胸膜肺炎放線桿菌對(duì)頭孢拉定、替米考星、青霉素和阿莫西林等耐藥率均低于50%；豬支氣管敗血波氏桿菌對(duì)鏈霉素、卡那霉素、替米考星和四環(huán)素等耐藥率均低于50%；而巴氏桿菌對(duì)替米考星、阿莫西林、氟苯尼考和環(huán)丙沙星耐藥率均低于50%。

表1 不同分離菌對(duì)常見(jiàn)抗生素耐藥性和敏感性統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果 %

3.3 病毒性病原檢測(cè)結(jié)果

取病料組織樣品（脾臟、肺臟、淋巴結(jié)等）混勻，高速勻漿后取上清液用于DNA/RNA基因組提取，其后將基因組中RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用商業(yè)化qPCR病原檢測(cè)試劑盒對(duì)核酸中多種DNA病毒[PCV2、豬偽狂犬病病毒（PRV）]和RNA病毒[PRRSV和豬瘟病毒（CSFV）]進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3頭病豬來(lái)源樣品均未檢出PRV、PCV2和CSFV核酸，但有2份樣品檢出PRRSV，且CT較低，說(shuō)明其病毒載量較高。

4 結(jié)果判定

根據(jù)病豬發(fā)病癥狀、病理剖檢變化結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，可判定該場(chǎng)肥育豬出現(xiàn)呼吸道病綜合征是由細(xì)菌和病毒混合感染所致。猜測(cè)可能是豬群感染PRRSV后受免疫抑制，繼而感染其它細(xì)菌性病原（胸膜肺炎放線桿菌、豬支氣管敗血波氏桿菌和巴氏桿菌），由此多種病原混合感染導(dǎo)致豬群出現(xiàn)嚴(yán)重疾病，并給豬場(chǎng)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。

5 防控方案及效果

5.1 緊急隔離與免疫治療

將發(fā)病豬群和假定健康豬群進(jìn)行隔離，將豬舍內(nèi)外仔細(xì)打掃后使用消毒劑對(duì)豬舍進(jìn)行全景消毒，保證各處消殺完全；在飼糧內(nèi)添加20%含量磺胺甲氧嘧啶750 g/t、20%替米考星2 kg/t、20%氟苯尼考750 g/t、3倍麻杏石甘顆粒和2倍保肝護(hù)腎產(chǎn)品，同時(shí)在飼糧中添加適量?jī)?yōu)質(zhì)益生菌和黃芪多糖等，連續(xù)用藥5 d；對(duì)發(fā)病豬群肌肉注射阿莫西林注射液，每日1次，連續(xù)治療3 d；對(duì)全部豬群免疫接種PRRSV活疫苗（CH-1R株）。

5.2 提高飼養(yǎng)管理水平

使用消毒劑每日對(duì)豬舍進(jìn)行消毒，及時(shí)清除糞污，同時(shí)保證豬舍內(nèi)溫度適宜；實(shí)行嚴(yán)格的全進(jìn)全出制度，生豬轉(zhuǎn)欄后對(duì)欄舍進(jìn)行消毒，使用火焰噴燈和消毒劑聯(lián)合消殺，并使豬舍干燥至少1周后方可購(gòu)入豬；需對(duì)購(gòu)入的豬群進(jìn)行病原檢測(cè)，防止外界病原進(jìn)入豬場(chǎng)；注意豬群飼養(yǎng)密度，禁止在豬場(chǎng)飼養(yǎng)犬、貓等動(dòng)物，同時(shí)定期滅鼠；定期對(duì)豬群開(kāi)展病原學(xué)或血清學(xué)監(jiān)測(cè)，根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果及時(shí)對(duì)豬群免疫接種疫苗或淘汰病豬。

該場(chǎng)實(shí)施以上方案3 d后豬群發(fā)病癥狀有所緩解，其采食量逐漸提高，同時(shí)不愿意動(dòng)的病豬逐漸活躍；病豬咳嗽、皮膚發(fā)紺等癥狀有所緩解，不再出現(xiàn)病豬死亡現(xiàn)象；兩周后回訪得知，該場(chǎng)豬群發(fā)病得到有效控制，肥育豬生產(chǎn)成績(jī)已恢復(fù)正常水平，說(shuō)明該防治方案有效。

6 討論

肥育豬抵抗力較仔豬和保育豬強(qiáng)，此類豬群發(fā)病多以混合感染為主，其中以病毒和細(xì)菌性疾病混合感染最為常見(jiàn)。此外，由于2020年后我國(guó)動(dòng)物飼料中全面禁止添加抗生素，且養(yǎng)殖過(guò)程中應(yīng)盡量“減抗或限抗”，這使得細(xì)菌性疾病的防治更為困難。豬繁殖與呼吸綜合征和豬圓環(huán)病毒2型病在我國(guó)豬場(chǎng)十分常見(jiàn)，當(dāng)豬群感染此類疾病且未得到有效治療，病豬的抵抗力會(huì)下降，由此易感染其它病原，繼而使豬群出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸道疾病，因此又稱為呼吸道病綜合征[7]。

可導(dǎo)致豬群出現(xiàn)呼吸道病綜合征的細(xì)菌性病原種類繁多，其主要包括肺炎支原體、副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、豬鏈球菌和巴氏桿菌等[8-9]。本文涉及到的案例中共分離到3種細(xì)菌，分別為豬胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌和豬支氣管敗血波氏桿菌，前兩種細(xì)菌屬于呼吸道病綜合征的常見(jiàn)病原，雖然豬支氣管敗血波氏桿菌是導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)萎縮性鼻炎的主要病原，但該病原感染肥育豬不會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重疾病。因此，筆者猜測(cè)該場(chǎng)豬群發(fā)病是由于PRRSV原發(fā)性感染，繼發(fā)感染豬胸膜肺炎放線桿菌、豬支氣管敗血波氏桿菌和巴氏桿菌而引起。此外，由于不同細(xì)菌性病原對(duì)抗生素耐藥率存在較大差異，為有效防治細(xì)菌性疾病，應(yīng)先對(duì)致病菌進(jìn)行分離、鑒定和藥敏試驗(yàn)，以篩選對(duì)多種細(xì)菌相對(duì)敏感的藥物用于治療。本研究對(duì)3種細(xì)菌性病原進(jìn)行藥敏試驗(yàn)后，根據(jù)結(jié)果選擇在飼糧中添加適當(dāng)比例氟苯尼考、替米考星和磺胺甲氧嘧啶進(jìn)行拌喂，同時(shí)進(jìn)行對(duì)癥治療，最終取得較好的治療效果。

對(duì)于此類疾病的防治，應(yīng)采取“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療”原則。該場(chǎng)出現(xiàn)疑似呼吸道疾病綜合征后，當(dāng)負(fù)責(zé)人得知傳統(tǒng)抗生素治療無(wú)法有效防控該病，便及時(shí)尋求專業(yè)豬病診斷中心幫助，以此對(duì)該病的致病性病原進(jìn)行確診。根據(jù)診斷結(jié)果，筆者對(duì)豬群進(jìn)行針對(duì)性治療，使得豬場(chǎng)病情得到有效控制，值得注意的是，本文采用的消毒劑對(duì)豬場(chǎng)進(jìn)行全景消毒，取得較好的消殺效果，這十分有利于疾病的治療與未來(lái)防控。