不同標(biāo)本前處理方法對新型冠狀病毒核酸檢測結(jié)果的影響分析

楊曉龍

摘要：目的：研究分析新型冠狀病毒核酸檢測中對標(biāo)本進(jìn)行不同前處理對于檢測結(jié)果的影響情況。方法：選取新型冠狀病毒核酸檢測顯示為陽性為12份滅活的咽拭子標(biāo)本，分為四份，A前處理為化學(xué)裂解15min，B為化學(xué)裂解30min，C為56℃水浴30min，D為56℃水浴60min，分析四組的檢測結(jié)果。結(jié)果：水浴檢查獲得的陽性情況優(yōu)于化學(xué)裂解，化學(xué)裂解出現(xiàn)兩份陰性。結(jié)論：化學(xué)裂解會一定程度會破壞病毒的結(jié)構(gòu)，對結(jié)果影響較大，日常不建議使用該種前處理模式。

關(guān)鍵詞：新型冠狀病毒;核酸檢測;標(biāo)本處理

由新型冠狀病毒所感染導(dǎo)致的肺炎稱為新型冠狀病毒肺炎，該肺炎在2019年全球爆發(fā)。人類感染該種病毒后會出現(xiàn)咳嗽、發(fā)熱以及呼吸困難等癥狀，如果不及時開展相應(yīng)的治療可直接威脅患者生命安全。為了進(jìn)一步防治該種病毒，需要開展核酸檢測，而核酸檢測一般為咽拭子，在核酸檢測之前需要對樣本進(jìn)行前處理，前處理模式比較多，日常檢測分析中應(yīng)該選取何種為本次研究重點(diǎn)。

1.資料與方法

1.1基礎(chǔ)資料來源

檢測結(jié)果為陽性的12份滅活的咽拭子標(biāo)本。

1.2處理方法

1.2.1儀器材料

所用的儀器為數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋;全自動核酸提取儀;熒光定量PCR;SARS-Co-2核酸檢測試劑盒。

1.2.2檢測方法

采取全自動核酸提取儀對核酸進(jìn)行提取，并依據(jù)SARS-Co-2核酸檢測試劑盒相關(guān)說明書進(jìn)行操作，之后置于PCR之上，于45℃ 10min，95℃ 15s;58℃ 30s循環(huán)40次。58℃進(jìn)行單點(diǎn)熒光檢測，檢測ORFlab基因、N基因、內(nèi)源性基因MNBH，并且內(nèi)源性基因MNBH作為本次的參照基因。

1.3結(jié)果判斷依據(jù)

陰性：擴(kuò)增曲線不是S型，Ct值>39.00或者Ct值為空白;擴(kuò)增曲線S型，Ct值≤39.00為陽性。SARS-Co-2核酸檢測為陽性時需要符合以下兩個條件其中1個：（1）同一份標(biāo)本中ORFlab基因、N基因在PCR檢測中均為陽性;（2）兩種類型標(biāo)本PCR檢測同時出現(xiàn)單靶標(biāo)陽性，或者同種類型標(biāo)本兩次采集檢測均出現(xiàn)單靶標(biāo)陽性。

1.4數(shù)據(jù)分析

相應(yīng)的數(shù)據(jù)納入辦公軟件EXCEL中進(jìn)行分析。

2.結(jié)果

A組、B組出現(xiàn)陰性，C組和D組結(jié)果均為陽性，具體結(jié)果見表1。

3.討論

新型冠狀病毒具有比較強(qiáng)的傳染性，因此在對標(biāo)本進(jìn)行檢測分析前，一般需要對其進(jìn)行滅活處理，但是如果滅活的方式不對可能會導(dǎo)致病毒核酸降解從而出現(xiàn)假陰性。

本次的研究分析中，使用水浴處理的結(jié)果與不處理的結(jié)果相近，且假陽性率為0 ，并且該種分析結(jié)果比較經(jīng)濟(jì)。而化學(xué)裂解的處理模式出現(xiàn)的假陰性，結(jié)果與未處理的標(biāo)本之間差異性比較大，造成該種情況原因可能為長時間的化學(xué)裂解后標(biāo)本被破壞，釋放的SARS-Co-2核酸被RNA酶降解，該結(jié)果提示我們后續(xù)的處理中，使用化學(xué)裂解模式需要慎重考慮。

新型冠狀病毒可導(dǎo)致患者出現(xiàn)新型冠狀病毒性肺炎，該種疾病出現(xiàn)后患者出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)方面的障礙，嚴(yán)重情況下會直接威脅患者的生命安全。在我國雖然該種病毒已經(jīng)被控制，但在國外，特別是印度該病毒還在危害著人們，因此需要對該疾病做出及時的檢測，并給予患者相應(yīng)的治療，從而保證其生命安全。但是由于病毒具有非常強(qiáng)的傳染性，需要對樣本進(jìn)行處理，之后進(jìn)行核酸分析，根據(jù)核酸的陰性或者陽性判斷，其是否感染新型冠狀病毒。本次的處理分析中我們選擇了化學(xué)裂解15min、化學(xué)裂解30min、56℃水浴30min以及56℃水浴60min，結(jié)果顯示，使用水浴后獲得的結(jié)果比較接近未處理的樣本，該種處理模式獲得更加客觀的結(jié)果，而化學(xué)裂解后的樣本出現(xiàn)比較高的假陰性，說明該種處理模式不適合臨床應(yīng)用。

綜上所述，化學(xué)裂解會一定程度會破壞病毒的結(jié)構(gòu)，對結(jié)果影響較大，日常不建議使用該種前處理模式。

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