多囊卵巢綜合征患者血清RBP-4、SF水平與IVF-ET妊娠結局的相關性研究

李學榮，黃雪昆，梅珺琰，翁治委，周少虎，彭新良

廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學科，廣東廣州 510405

多囊卵巢綜合征(PCOS)是一種發(fā)病率較高的婦科疾病，PCOS患者多伴有胰島素抵抗(IR)，可引起女性不孕[1]。臨床多利用體外受精-胚胎移植(IVF-ET)幫助PCOS患者懷孕，內分泌異常、IR、氧化應激、血糖異常升高對IVF-ET助孕結局會產生一定影響[2]。既往研究表明，視黃醇結合蛋白-4(RBP-4)是一種單一肽鏈蛋白質，與IR有關[3]，且其在PCOS患者血清中水平上調，RBP-4可能影響PCOS病理發(fā)展[3-4]。另外，血清鐵蛋白(SF)是一種反映機體鐵負荷的重要指標，其在PCOS患者中水平顯著升高，具有輔助診斷PCOS的潛在價值[5]。但血清RBP-4、SF水平與PCOS患者IVF-ET妊娠結局是否有關尚不明確。因此，本文檢測了PCOS患者的RBP-4、SF水平，旨在分析RBP-4、SF與IVF-ET妊娠結局的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年11月至2020年1月于本院行IVF-ET的PCOS不孕患者127例作為PCOS組，年齡23～39歲、平均(31.69±6.84)歲。選取同期因輸卵管因素于本院行IVF-ET治療的127例繼發(fā)不孕患者作為對照組，年齡22～40歲、平均(31.16±6.65)歲，排除合并其他內分泌疾病者。對照組和PCOS組年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準：(1)PCOS患者均符合2003年歐洲人類生殖與胚胎學/美國生殖醫(yī)學學會擬定的PCOS診斷標準[6]；(2)患者均為首次行IVF-ET助孕治療；(3)患者檢查資料均完整。排除標準：(1)無完整卵巢、子宮或合并子宮、卵巢器質性病變者；(2)合并高泌乳素血癥、內分泌疾病者；(3)患有先天性腎上腺皮質增生、庫欣綜合征者；(4)合并傳染性疾病、腫瘤者；(5)合并生殖系統急性感染者；(6)心血管疾病者。受試者及其家屬均知情同意，本研究獲得本院倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1臨床資料的收集 收集納入研究患者的空腹胰島素(FINS)水平、不孕年限、空腹血糖(FBG)水平、體質量指數(BMI)、穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(HOMA-IR，HOMA-IR=FINS×FBG/22.5)等資料。

1.2.2標本采集 月經規(guī)律受試者在卵泡早期(月經第2日)，月經稀發(fā)/閉經者在經陰道B型超聲診斷儀檢查顯示最大卵泡直徑均值小于10 mm時抽取外周靜脈血于離心管中，4 800 r/min，離心7 min取上清，儲存于-80 ℃冰箱。

1.2.3酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清RBP-4、SF水平 按人RBP-4 ELISA檢測試劑盒(上海恒斐生物科技有限公司)、SF ELISA檢測試劑盒(艾美捷科技有限公司)說明書配制RBP-4、SF的標準品溶液，使用酶標儀(Q3000型，北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司)測定RBP-4、SF標準品溶液、血清標本在450 nm處的吸光度，繪制RBP-4、SF的標準曲線，結合回歸方程，計算血清RBP-4、SF水平。

1.2.4觀察指標 觀察受試者年齡、體質量指數(BMI)、不孕年限、FINS、FBG、HOMA- IR、RBP-4、SF、獲卵數、成熟卵率、正常受精率、優(yōu)質胚胎率及臨床妊娠率等。

1.2.5促排卵方案 兩組受試者均利用黃體中期短效長方案進行降調節(jié)。受試者月經第21天時給予促性腺激素釋放激素激動劑(醋酸曲普瑞林，輝凌制藥有限公司)降調節(jié)，以0.1 mg/d，連續(xù)皮下注射15 d，第16天給予75～225 IU/d注射用重組人促卵泡激素(瑞士默克雪蘭諾公司)啟動超排卵，當受試者有2～3個主導卵泡平均直徑為17～20 mm 時，給予肌肉注射重組人絨毛膜促性腺激素250 μg，35～36 h后在B型超聲診斷儀引導下穿刺取卵、授精。72 h后在B型超聲診斷儀(JH-3202型，江蘇佳華電子設備有限公司)引導下進行胚胎移植，移植后每日以肌肉注射方式給予黃體酮(國藥準字H31021401，上海通用藥業(yè)股份有限公司)支持黃體功能。

1.2.6妊娠結局判定標準 胚胎移植后第14天檢測血人絨毛膜促性腺激素(HCG)，以HCG≥15 IU/L為生化妊娠，移植后第35天行陰道B型超聲診斷儀檢查，以見到妊娠囊為臨床妊娠。

2 結 果

2.1兩組一般資料比較 與對照組比較，PCOS組FINS水平、HOMA-IR顯著升高(P<0.05)，年齡、BMI、不孕年限、FBG水平差異無統學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2兩組血清RBP-4、SF水平比較 與對照組比較，PCOS組患者血清RBP-4、SF水平升高(P<0.05)，見表2。

表2 兩組血清RBP-4、SF水平比較

2.3兩組IVF-ET妊娠結局評價指標比較 與對照組比較，PCOS組患者臨床妊娠率明顯降低(P<0.05)，獲卵數、成熟卵率、正常受精率、優(yōu)質胚胎率差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 兩組IVF-ET妊娠結局評價指標比較

2.4IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4、SF水平與FINS、HOMA-IR的相關性 Pearson相關分析顯示，IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4水平與FINS水平、HOMA-IR呈正相關(r=0.557、0.432，P<0.05)，見圖1、2；SF水平與FINS、HOMA-IR也呈正相關(r=0.425、0.387，P<0.05)，見圖3、4。

圖1 IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4與FINS的相關性

圖2 IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4與HOMA-IR的相關性

圖3 IVF-ET助孕PCOS患者SF與FINS的相關性

圖4 IVF-ET助孕PCOS患者SF與HOMA-IR的相關性

2.5IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4、SF水平與IVF-ET結局的相關性 Spearman相關分析顯示：IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4、SF水平與臨床妊娠率呈負相關(r=-0.463、-0.538，P<0.05)。

2.6Logistic回歸分析PCOS患者IVF-ET妊娠結局的影響因素 以PCOS患者IVF-ET妊娠結局為因變量(臨床妊娠=0，生化妊娠=1)，以FINS、HOMA-IR、RBP-4、SF等連續(xù)變量的實測值為自變量，利用逐步向前-LR法進行Logistic回歸分析，結果顯示，HOMA-IR、RBP-4、SF為PCOS患者影響IVF-ET妊娠結局的危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 Logistic回歸分析影響PCOS患者IVF-ET妊娠結局的危險因素

3 討 論

PCOS以IR、稀發(fā)排卵或無排卵等為臨床特征，嚴重損害育齡期女性身心健康[7-8]。PCOS患者的卵巢內的卵泡缺少成熟顆粒細胞，雌激素產生受阻，導致排卵障礙，對女性受孕產生不良影響，而IVF-ET是常用的輔助生殖技術，IVF-ET雖可在一定程度上解決PCOS患者排卵障礙問題，但IVF-ET對PCOS不孕患者的助孕效果有限[9]。因此，尋找影響PCOS不孕患者IVF-ET助孕結局的因素，及時干預，對改善患者妊娠結局有一定積極意義。

RBP-4是由脂肪組織、肝臟分泌的細胞因子，可協助維生素A的吸收、代謝、貯存，結合、轉運維生素A視黃醇類代謝物，影響上皮組織分化、胚胎發(fā)育等過程，與動脈粥樣硬化、妊娠糖尿病、IR等疾病進展關系密切[10-11]。研究發(fā)現，血清RBP-4水平在產后妊娠糖尿病患者中顯著升高，與HOMA-IR呈正相關，其可通過影響磷脂酰肌醇3激酶活性等方式，進而參與IR發(fā)病環(huán)節(jié)，RBP-4可作為妊娠期糖尿病患者產后糖代謝異常的標志物[12-13]。另外，PCOS及PCOS合并糖尿病患者血清RBP-4水平均明顯高于健康對照組，RBP-4可能在PCOS疾病進展中發(fā)揮重要作用[14]。本研究中，PCOS組患者血清RBP-4水平明顯高于對照組，提示RBP-4可能在PCOS發(fā)病過程中具有重要作用。另外，PCOS患者FINS、HOMA-IR水平較高，與奚迪等[15]研究相符，且PCOS患者臨床妊娠率較低，提示PCOS患者存在IR，且PCOS可能對IVF-ET助孕結局產生不利影響。進一步研究顯示，IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4水平與FINS、HOMA-IR呈正相關，與臨床妊娠率呈負相關，提示RBP-4可能與FINS、HOMA-IR相互影響，從而共同影響PCOS患者IVF-ET助孕結局，推測PCOS患者血清RBP-4水平升高，RBP-4可能通過影響相關酶活性加重IR，使患者發(fā)生排卵障礙性不孕，或是RBP-4通過影響卵子成熟、胚胎發(fā)育，從而影響PCOS患者IVF-ET助孕結局，但具體作用機制還需要深入探究。

鐵是人體必需的微量元素之一，以多種形態(tài)保持動態(tài)平衡，但機體鐵過多可促進自由基對器官、組織的損傷，引發(fā)多種病變。既往研究認為，鐵過量可影響機體胰島素敏感性，增加IR，且SF是肝內合成的儲鐵蛋白，可有效評估體內儲鐵情況[16-17]。SF在妊娠期糖尿病患者中水平上調，與HOMA-IR具有良好相關性，其可能在患者IR發(fā)生過程中起促進作用[18]。本研究中，PCOS組患者血清SF水平明顯高于對照組，與TIONGCO等[5]研究一致，提示SF可能與PCOS發(fā)生、發(fā)展有關。分析其原因：機體鐵超負荷可引起氧化應激反應，產生大量活性氧，促進脂質氧化，降低機體對葡萄糖的利用，促進肝臟糖異生，引發(fā)肝臟介導的IR；鐵在肌肉組織及肝臟處沉積，降低肌肉組織和肝臟對胰島素的攝取，以及肝臟對胰島素的滅活、清除，引起高胰島素血癥；胰島素促進細胞內鐵沉積，加強氧化應激反應，導致細胞氧化損傷，降低胰島素活性，形成惡性循環(huán)，加重IR[19-20]，從而加速PCOS發(fā)生發(fā)展。進一步研究顯示，IVF-ET助孕PCOS患者SF水平與FINS、HOMA-IR呈正相關，與臨床妊娠率呈負相關，提示SF可能與PCOS患者IVF-ET助孕結局密切相關，其有望成為預測PCOS患者IVF-ET助孕結局的標志物。此外，Logistic回歸分析顯示，血清RBP-4、SF水平升高，HOMA-IR升高均是影響PCOS患者IVF-ET妊娠結局的獨立危險因素，提示監(jiān)控血清RBP-4、SF水平有利于臨床改善PCOS患者IVF-ET的助孕結局。

綜上所述，本研究發(fā)現，RBP-4、SF在PCOS不孕患者血清中水平較高，兩者均可能影響PCOS患者IVF-ET助孕結局，及時監(jiān)控血清RBP-4、SF水平有助于臨床預防行IVF-ET助孕PCOS患者發(fā)生不良妊娠結局。但RBP-4、SF只是影響PCOS患者IVF-ET妊娠結局的部分因素，且本研究未深入探究兩者在PCOS中作用機制，后期需增加樣本量，并加入更多相關因素進行研究。