蘇州地區呼吸道感染未成年住院患者常見呼吸道病毒IgM抗體檢測及分析*

張 馨，李 陽，李 丹，繆美華，何 萍，花盛浩，邵雪君，閔蘭芳△

1.蘇州大學附屬兒童醫院檢驗科，江蘇蘇州 215025；2.蘇州大學附屬第二醫院檢驗科，江蘇蘇州215004；3.蘇州大學附屬兒童醫院兒研所，江蘇蘇州 215025

急性呼吸道感染是兒童最常見的感染性疾病。超過90%的急性呼吸道感染由呼吸道病毒引起[1]。呼吸道病毒感染對兒童健康有較大影響[2]，是引起兒童發病和死亡的主要原因[3]。研究發現，呼吸道病毒的流行趨勢與季節、性別、年齡、氣候等因素相關[4-6]，而且不同環境下的呼吸道病毒常存在一定差異，因此進行呼吸道感染病毒的流行病學調查對該地區呼吸道感染的預防和臨床治療意義重大。基于以上背景，本研究利用間接免疫熒光法對2016年3月至2021年2月在蘇州大學附屬兒童醫院住院的臨床診斷為呼吸道感染的未成年患者血清標本進行了5種常見呼吸道病毒IgM抗體的檢測，包括腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒A型(IVA)、流感病毒B型(IVB)、人類副流感病毒(HPIVS)，并進行流行病學分析，旨在了解常見呼吸道病毒的感染情況及流行趨勢。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據《實用兒科學》[7]中的診斷標準，將2016年3月至2021年2月在蘇州大學附屬兒童醫院住院的有急性呼吸道感染呼吸道癥狀、發熱時間較長，臨床診斷為呼吸道感染的未成年患者納入研究，共42 429例。其中男性24 525例，女性17 904例，男、女比例為1.37∶1。根據我國南方季節特征，每年春季為3～5月，夏季為6～8月，秋季為9～11月，冬季為12至次年2月(將1、2月份計入前一年進行數據統計)。參考王衛平主編的《兒科學》[8]，將納入研究的未成年患者按年齡段分組：新生兒組(0～<28 d)、嬰兒組(28 d至<1歲)、幼兒組(1～<3歲)、兒童組(3～<14歲)、青少年組(14～<18歲)。納入研究的未成年患者性別及臨床科室分布情況見表1。本研究經蘇州大學附屬兒童醫院醫學倫理委員會審查通過。

表1 納入研究的未成年患者性別及臨床科室分布情況(n)

1.2儀器與試劑 5種呼吸道病毒IgM抗體檢測試劑盒為比爾賽有限公司產品。熒光顯微鏡為德國LEICA公司產品，型號為LEICA DM 2000。

1.3方法

1.3.1標本采集 采集納入研究患者急性期外周靜脈血3 mL，注入促凝管，以4 000 r/min離心10 min，收集血清備用。

1.3.2標本檢測 采用間接免疫熒光法，參照試劑盒說明書分別檢測ADV、RSV、IVA、IVB、HPIVS 5種呼吸道病毒IgM抗體。(1)在干燥、潔凈的EP管中加入15 μL PBS、15 μL吸附劑和15 μL血清，徹底混勻后，13 000 r/min離心10 min去除沉淀，以防干擾檢測。(2)載玻片3孔中分別加入15 μL經步驟(1)處理過的血清、15 μL陽性對照、15 μL陰性對照，并于37 ℃孵育90 min后清洗兩次自然晾干。(3)上述3孔每孔加入15 μL抗人IgM FITC結合物溶液，于37 ℃溫育30 min，清洗并自然晾干。最后加適量封閉介質并加蓋玻片，用熒光顯微鏡在400倍放大率下觀察每孔的熒光強度。

1.3.3結果判斷 陽性：觀察到1%～15%細胞的細胞核、胞質或胞膜出現蘋果綠色熒光(在RSV和HPIVS中能同時觀察到著色的合胞體)；陰性：觀察到細胞呈現紅色。

1.4統計學處理 采用Microsoft Office Excel 2003、SPSS20.0、GraphPad軟件對所收集的數據進行分析，計數資料用頻數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.15年間5種呼吸道病毒抗體檢出情況 呼吸道病毒IgM抗體檢出率在不同年份之間的差異有統計學意義(χ2=602.02，P<0.05)，見表2。5種呼吸道病毒中，IVB和HPIVS的總檢出率居前兩位，分別為6.55%和5.35%。

2.2不同性別人群5種呼吸道病毒的檢出情況 男性和女性人群比較：呼吸道病毒IgM抗體檢出率差異有統計學意義(P<0.05)；IVB、HPIVS IgM抗體的檢出率差異有統計學意義(P<0.05)；而ADV、RSV、IVA IgM抗體的檢出差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同性別人群5種呼吸道病毒IgM抗體的檢出情況分析[n(%)]

2.3不同季節5種呼吸道病毒的檢出情況 5種呼吸道病毒IgM抗體在不同季節之間的檢出率差異均有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 不同季節5種呼吸道病毒IgM抗體檢出情況分析[n(%)]

2.4不同年齡段分組的5種呼吸道病毒檢出情況 不同年齡段分組的5種呼吸道病毒IgM抗體檢出率比較差異有統計學意義(P<0.05)。RSV在嬰兒組中的檢出率最高(P<0.05)。見表5。

表5 不同年齡段人群5種呼吸道病毒IgM抗體檢出率分析[n(%)]

2.5不同年份、季節、年齡段分組的5種呼吸道病毒IgM抗體檢出情況 綜合分析不同年份、季節、不同年齡段分組中檢出的5種呼吸道病毒IgM抗體的分布情況，見表6。

表6 不同年份、季節、年齡段分組中檢出的5種病毒IgM抗體的分布情況[n(%)]

續表6 不同年份、季節、年齡段分組中檢出的5種病毒IgM抗體的分布情況[n(%)]

3 討 論

急性呼吸道感染主要由呼吸道病毒感染引起，不同病毒感染的臨床癥狀相似，但治療用藥卻各有不同[9]，未成年人免疫系統尚不完善、易感染，是呼吸道病毒主要侵犯對象[10]。因此對急性呼吸道感染未成年患者進行呼吸道病毒檢測，對疾病的早期診斷、干預以及治療具有重要的指導意義。呼吸道病毒IgM抗體檢測具有簡便、快速、成本低等優點[11]，通常在發病后一周內可在血清中被檢測到，因此IgM抗體可作為急性感染期的診斷指標，適合臨床快速篩查呼吸道病毒感染，指導臨床早期準確用藥。

本研究分析了2016年3月至2021年2月有急性呼吸道感染癥狀的42 429例住院未成年患者血液標本中的5種常見呼吸道病毒IgM抗體檢測結果，總檢出率為13.40%，結果低于國內一些文獻的報道[12-13]，這可能與地域、檢出病毒的種類、檢測方法與時間(IgM產生的窗口期)等因素有關[6]。5種常見呼吸道病毒中，IVB和HPIVS的IgM抗體檢出率位居前列，這和文獻[14-15]的報道基本一致。2020年病毒抗體檢出率顯著降至8.69%，這可能跟全民響應國家號召，積極做好新冠疫情防護措施有關，如勤洗手、戴口罩、多通風、少接觸等。本研究中，呼吸道病毒IgM抗體檢出率，男性(11.92%)明顯低于女性(15.42%)，這與文獻[16]報道的結論相符。不同性別人群中檢出率的差異可能與男女氣道結構差異，激素水平及抵抗力不同有關。5種常見呼吸道病毒感染呈現一定季節性，主要集中在春冬交替季節，結果與文獻[17]報道的一致。IVB主要流行于春冬季；HPIVS主要流行于夏秋季。春冬季由于氣溫低，室內開窗通風時間較短，學校、幼兒園等聚集場所易引起群發性病毒感染，從而導致未成年人發生急性呼吸道感染的風險顯著增加。年齡偏小的新生兒組、嬰兒組易感染HPIVS，而幼兒組、兒童組以及青少年組則以IVB感染為主。RSV在嬰兒組中的檢出率最高。不同年齡段呼吸道病毒IgM抗體檢出率隨著年齡的增長先增加后降低，3～14歲的兒童組最高，這與文獻[18]的報道一致，這可能與兒童接觸范圍大且接觸人群復雜，兒童機體免疫系統尚未發育完全，抵抗力低下等因素有關。本研究還發現，不同各年份、季節、年齡段分組中，均以IVB或HPIVS抗體的檢出率最高。2016、2017年HPIVS較為流行，2018、2019年IVB較為流行，2020年又以HPIVS流行為主，筆者推測IVB和HPIVS兩種病毒以兩年為周期交替暴發流行。

綜上所述，因地區、氣候、檢測方法、時間、研究對象等因素的不同，本研究與其他文獻報道的研究結果不完全相同，但根據蘇州大學附屬兒童醫院呼吸道病毒IgM抗體檢測結果，兒童急性呼吸道感染以IVB、HPIVS感染為主，好發于春冬兩季，3～14歲的女童為易感人群。故針對易感人群，積極開展預防接種、健康教育、衛生宣教等活動，加強家長及兒童防護意識非常必要。血清IgM抗體檢測的結果雖與抗原檢測的結果有所差異，但對兒科呼吸系統疾病的早期快速診斷具有重要價值，如將二者聯合運用，可顯著提高疾病檢出率，為臨床診療提供快速、準確的診斷依據。本研究也存在一定的不足：(1)未涉及呼吸道病原體其他檢測方法，缺乏對呼吸道病原體檢測更深入的分析；(2)呼吸道病原體的研究種類偏少，在后續的研究中將進一步擴大研究范圍，更全面地探討呼吸道病原體的分布規律以及流行趨勢。