4種自身抗體檢測在中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病中的鑒別診斷價(jià)值

李云珍，李 玲，蘇坤華，張 玲，姚少濠

廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣東廣州 510005

中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)多灶性及炎性脫髓鞘為主的一種自身免疫系統(tǒng)疾病，其臨床特征主要包括反復(fù)發(fā)作、多次緩解及復(fù)發(fā)。臨床較為常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病包括多發(fā)性硬化癥、視神經(jīng)脊髓炎、急性散播性腦脊髓炎等，近年來中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病發(fā)病率呈逐年升高趨勢，對(duì)患者生活質(zhì)量產(chǎn)生了嚴(yán)重影響，對(duì)患者身心健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病十分復(fù)雜，僅僅通過臨床癥狀、影像學(xué)和病理檢查很難準(zhǔn)確診斷。本研究通過檢測患者血清中水通道蛋白-4(AQP4)抗體、髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)抗體、 髓鞘堿性蛋白(MBP)抗體和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)抗體，分析它們?cè)谥袠猩窠?jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病中的鑒別診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月1日至2021年6月22日在廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心進(jìn)行中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病鑒別診斷套餐檢測的患者1 368例為研究對(duì)象，其中視神經(jīng)脊髓炎263例、脊髓炎231例、腦炎167例、中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病151例、肌無力142例、顱內(nèi)病變119例、頭痛頭暈101例、多發(fā)性硬化癥79例、癲癇66例、周圍神經(jīng)病25例、腦梗死24例；男635例，女733例；年齡1～92歲，平均(39.46±20.62)歲。

1.2儀器與試劑 賽默飛EVOS M5000正置熒光顯微鏡，試劑為益養(yǎng)生物自主研發(fā)試劑。

1.3方法 4種抗體檢測試劑盒均基于細(xì)胞轉(zhuǎn)染的間接免疫熒光法(CBA)，4種抗體檢測原理是將AQP4、MOG、MBP、GFAP基因轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面特異表達(dá)4種抗原，且在轉(zhuǎn)染中共表達(dá)了綠色熒光蛋白作為檢測的內(nèi)參。4種抗體試劑盒均將轉(zhuǎn)染細(xì)胞固定在96孔微板上制成抗原片，采用CBA半定量檢測人血清、血漿或腦脊液樣品中的抗體。結(jié)果判斷：熒光顯微鏡下觀察，先用綠光觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況，若質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功，則可觀察到細(xì)胞有綠色熒光；然后用紅光觀察，若觀察到標(biāo)本孔中轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞其細(xì)胞膜有較為明顯的紅色熒光(非轉(zhuǎn)染細(xì)胞無明顯紅色熒光或紅色熒光明顯弱于轉(zhuǎn)染細(xì)胞)，且細(xì)胞膜邊緣輪廓清晰，則為自身抗體陽性標(biāo)本；若觀察到標(biāo)本孔中轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞其細(xì)胞膜無較為明顯的紅色熒光、有紅色熒光但邊緣輪廓不清，或未轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞均有紅色熒光等情況，則為陰性標(biāo)本。

2 結(jié) 果

2.1不同性別及年齡抗體陽性分布情況 1 368例患者中，抗體總陽性率(任意1種抗體陽性)為24.93%(341例)。男性陽性率為18.43%(117/635)，女性陽性率為30.56%(224/733)，男女陽性率比為1.00∶1.66；平均發(fā)病年齡為 (41.10±20.61)歲，其中0～<18歲陽性率為18.63%(49/263)，18～<40歲陽性率為27.80%(114/410)，40～<60歲陽性率為25.91%(121/467)，60～92歲陽性率為25.00%(57/228)，0～<18歲與18～40歲及40～<60歲患者抗體陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其他年齡段患者抗體陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2不同抗體陽性組合模式在不同性別間差異及平均發(fā)病年齡 4種抗體在陽性患者中有5種陽性組合模式，分別為GFAP抗體陽性、MOG抗體陽性、AQP4抗體陽性、GFAP+MOG抗體陽性和GFAP+AQP4抗體陽性，未見MBP抗體陽性。男性GFAP抗體陽性率明顯高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.04)，男女陽性率比為1.00∶0.64；女性AQP4抗體陽性率明顯高于男性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),男女陽性率比為1.00∶5.24；其他抗體陽性組合模式男女間陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。不同抗體陽性患者平均發(fā)病年齡從低到高依次為MOG抗體陽性、GFAP抗體陽性、AQP4抗體陽性患者，分別為(27.49±19.53)、(39.66±19.93)、(48.38±15.23)歲。見表1。

表1 不同抗體陽性組合模式在男性和女性之間陽性率比較[n(%)]

2.3不同陽性組合模式在不同臨床診斷中的陽性率比較 視神經(jīng)脊髓炎4種抗體的總陽性率最高，為46.77%，其次是脊髓炎(32.90%)，再次是腦炎(23.35%)。AQP4抗體陽性率居前3位的疾病分別為視神經(jīng)脊髓炎、脊髓炎和多發(fā)性硬化癥；GFAP抗體陽性率居前3位的疾病分別為顱內(nèi)病變、腦炎和癲癇；MOG抗體陽性率居前3位的疾病分別為腦炎、中樞神經(jīng)脫髓鞘疾病和視神經(jīng)脊髓炎；GFAP+AQP4抗體可見于視神經(jīng)脊髓炎、脊髓炎、頭痛及頭暈，其他疾病未見；GFAP+MOG抗體可見于視神經(jīng)脊髓炎、脊髓炎、腦炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病和肌無力，其他疾病未見；MBP抗體在所有疾病中未檢測出陽性。見表2。

表2 不同陽性組合模式在不同臨床診斷中的陽性率比較[n(%)]

3 討 論

臨床實(shí)踐表明，通過臨床癥狀、病理學(xué)、影像學(xué)等進(jìn)行診斷常易將不同的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病混淆，影響患者治療和預(yù)后[1-2]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病特異性抗體的發(fā)現(xiàn)，為準(zhǔn)確鑒別診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病提供了重要的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(NMOSD)是一組主要由體液免疫參與的抗原-抗體介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘疾病。AQP4-IgG自身抗體是NMOSD特有的一種生物免疫標(biāo)志物，具有高度特異性[3]。MOG-IgG相關(guān)疾病(MOGAD)是近年來提出的一種免疫介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病，國際上提出的《MOG腦脊髓炎診斷和抗體檢測專家共識(shí)》[4]和《MOG-IgG相關(guān)疾病的擬診斷標(biāo)準(zhǔn)》[5]建議把MOGAD定義為一種獨(dú)立疾病譜。2020年《中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志》發(fā)表了《抗髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白免疫球蛋白G抗體相關(guān)疾病診斷和治療中國專家共識(shí)》[6]，專家共識(shí)指出MOG-IgG是MOGAD的重要生物學(xué)診斷標(biāo)志物，MOG-IgG滴度與MOGAD病情嚴(yán)重程度相關(guān)。膠質(zhì)纖維酸性蛋白星形細(xì)胞病(GFAP-A)是一種自身免疫性炎癥性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，主要累及腦膜、腦、脊髓和視神經(jīng)，以發(fā)熱、頭痛、腦炎、脊髓炎、視力異常為主要臨床特征，2016年美國梅奧醫(yī)院的Lennon團(tuán)隊(duì)首次報(bào)道了該疾病，確認(rèn)了GFAP-A是不同于多發(fā)性硬化癥和NMOSD的獨(dú)立疾病，并指出特異性GFAP抗體是該類疾病的生物學(xué)標(biāo)志物[7]。髓鞘堿性蛋白(MBP)是構(gòu)成神經(jīng)髓鞘的主要成分之一，約占髓鞘蛋白總量的30%，是髓鞘中抗原性最強(qiáng)的蛋白質(zhì)，是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)由少突細(xì)胞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)雪旺細(xì)胞合成的一種強(qiáng)堿性膜蛋白，具有神經(jīng)組織特異性[8]。當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變累及髓鞘時(shí)，MBP可以進(jìn)入腦脊液及血液中，通過免疫反應(yīng)而產(chǎn)生MBP抗體，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘疾病的發(fā)生。本研究通過對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病患者的血清進(jìn)行AQP4、MOG、MBP、GFAP抗體檢測，并分析該4種抗體在該類疾病中的鑒別診斷價(jià)值。

本研究發(fā)現(xiàn)1 368例患者血清中4種自身抗體檢測的總陽性率為24.93%，因MOGAD和GFAP-A近年才被發(fā)現(xiàn)，以往的研究以AQP4抗體、MOG抗體、GFAP抗體或者兩種抗體同時(shí)報(bào)道為主[2，9-12]，關(guān)于AQP4、MOG、MBP、GFAP這4種抗體同時(shí)報(bào)道的研究少有。女性總陽性率高于男性，男女陽性率比為1.00∶1.66。陽性抗體以AQP4抗體陽性率最高，女性AQP4抗體陽性率明顯高于男性，男女陽性率比為1.00∶5.24；男女MOG抗體陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，男性GFAP陽性率高于女性，男女陽性率比為1.00∶0.64。MOG抗體陽性患者平均發(fā)病年齡最小，為(27.49±19.53)歲；GFAP抗體陽性患者平均發(fā)病年齡為(39.66±19.93)歲；AQP4抗體陽性患者平均發(fā)病年齡最大，為(48.38±15.23)歲。可見MOGAD和GFAP-A好發(fā)于青年人，NMOSD好發(fā)于中年人。王倩雯等[9]和康新梅等[10]也報(bào)道，MOG抗體陽性患者中男女比例相當(dāng)，未見較大差異，而在AQP4抗體陽性的患者中女性則明顯多于男性?？敌旅返萚10]、武國良等[2]和楊華才[11]報(bào)道AQP4-IgG陽性患者平均發(fā)病年齡分別為(41.7±14.9)、(42.15±15.78)和(42.55±13.15)歲，均好發(fā)于中年人，本文研究與以上研究結(jié)論一致。另外康新梅等[10]還報(bào)道MOG-IgG 陽性患者平均發(fā)病年齡為(27.0±17.7)歲，本研究結(jié)果與之接近。楊華才[11]報(bào)道的GFAP抗體陽性率與本研究結(jié)果一致，也是男性高于女性，但該研究報(bào)道的平均發(fā)病年齡為(44.50±16.08)歲，大于本研究中報(bào)道的平均發(fā)病年齡。GFAP-A為罕見病，是一種新型的神經(jīng)免疫系統(tǒng)疾病，目前研究數(shù)據(jù)還尚少，未來還需更多的研究數(shù)據(jù)補(bǔ)充。

在4種自身抗體檢測中，診斷為視神經(jīng)脊髓炎的患者陽性率最高，為46.77%，其次是脊髓炎(32.90%)，再次是腦炎(23.35%)。視神經(jīng)脊髓炎、脊髓炎和多發(fā)性硬化癥以AQP4抗體陽性為主。腦炎中抗體以GFAP抗體和MOG抗體陽性為主。AQP4抗體少見于腦炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病、肌無力、頭痛及頭暈、周圍神經(jīng)病，在顱內(nèi)病變、癲癇、腦梗死患者中未發(fā)現(xiàn)AQP4陽性；MOG抗體陽性率最高的是腦炎，其次是中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病和視神經(jīng)脊髓炎；GFAP抗體在本研究所有疾病中均可以檢測到。出現(xiàn)雙抗體陽性最多的是視神經(jīng)脊髓炎和脊髓炎，均伴GFAP抗體陽性，抗體陽性與GFAP-A一致[12]。本研究還發(fā)現(xiàn)，1 368例中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病患者中，無1例患者檢測出MBP抗體，本研究中檢測方法為CBA，以往關(guān)于MBP抗體的研究報(bào)道均采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測[13-14]，并且文獻(xiàn)多數(shù)在2016年以前，之后顯有對(duì)MBP抗體的報(bào)道，可見MBP抗體可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病的相關(guān)性不大，或者臨床并不認(rèn)同MBP的診斷價(jià)值。

綜上所述，AQP4抗體、MOG抗體和GFAP抗體檢測可為中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病診斷和鑒別提供重要實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，MBP抗體檢測價(jià)值不大，建議取消該項(xiàng)檢測。