外周血循環腫瘤細胞檢測在慢性阻塞性肺疾病患者肺癌篩查及預后判斷中的價值*

和建武，郭春麗，程西安，羅 祥

陜西省銅川市人民醫院呼吸內科，陜西銅川 727000

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種以氣流受限、肺功能下降為主要特征的肺部疾病，一般氣流阻塞呈現不完全可逆性、進展性發展，常發生于老年患者，具有較長的病程和較高的致殘率、致死率[1-3]。該病病因較復雜，與顆粒物吸入、有毒氣體吸入、肺部感染等有關，一般患者僅出現咳嗽、氣短、多痰、喘息、肺啰音、繼發性肺部感染等非特異性臨床表現[4-5]。肺癌是臨床中常見的惡性腫瘤之一，流行病學調查發現，近年來肺癌的發病率和病死率均呈現逐年遞增的趨勢，肺癌也是癌癥主要死因，嚴重危害人類的健康和生命[6-8]。COPD患者的肺癌發病率高達16.7‰，且肺癌早期無明顯癥狀，待出現明顯癥狀后往往已處于晚期，嚴重影響患者的臨床療效和生命安全，因此，對COPD患者進行早期肺癌的篩查具有重要意義。外周血循環腫瘤細胞(CTCs)檢測是一種抽取惡性腫瘤患者的外周血，檢查腫瘤細胞的方法。惡性腫瘤發展的過程中，有可能通過血液傳播出現轉移，因此，外周血中可能存在腫瘤細胞，檢測CTCs有利于腫瘤轉移患者的診斷，并且對判斷腫瘤的復發和轉移都有幫助。CTCs檢測方法為細胞計數法，包括免疫細胞化學法、流式細胞術及核酸檢測法。本研究探討了CTCs在COPD患者肺癌篩查及預后判斷中的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年6月至2017年9月本院收治的55例COPD合并肺癌患者納入合并組，選擇同期收治的60例單純COPD患者納入COPD組。所有患者均符合《慢性阻塞性肺疾病全球倡導(2017版)》[9]診斷標準，合并組患者均同時接受了支氣管鏡肺部活檢、經皮穿刺肺活檢、痰細胞檢測、淋巴結活檢。排除有嚴重肝腎功能障礙、循環系統紊亂、腦梗死、精神類疾病、認知功能障礙的患者，剔除臨床病歷資料不全及失訪患者。所有患者均有咳嗽、多痰和喘息等一般性臨床癥狀，25例(21.74%)出現胸痛癥狀(合并組17例，COPD組8例)，54例(46.96%)出現發熱癥狀(合并組31例，COPD組23例)，42例(36.52%)出現痰中帶血(合并組28例，COPD組14例)。經胸部X線片或CT檢查，主要表現為局限性肺不張、阻塞性肺炎、片狀陰影等。兩組患者的一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。所有患者均自愿參與本研究，并簽署了知情同意書。本研究經本院醫學倫理委員會審核批準(2021143)。

表1 兩組一般資料比較

1.2儀器與試劑 免疫熒光顯微鏡、0.1%Triton X-100通透胞膜、肺腺癌A549細胞株(北京天沃科技發展有限公司)、鼠抗人細胞角蛋白(廣譜)單克隆抗體(P-CK，上海田源生物技術有限公司)、4,6-二脒基-2-苯基吲哚(北京索萊寶科技有限公司)、4%多聚甲醛、磷酸鹽緩沖液、5%牛血清蛋白。

1.3方法

1.3.1CTCs檢測 采集患者外周靜脈血6 mL(舍去穿刺后前2 mL血液)，加入肝素后采用密度梯度離心法收集腫瘤細胞。分離環狀乳白色單核細胞層，磷酸化，再次進行離心。將單個核細胞懸液均勻涂在載玻片上，室溫靜置30 min，4%多聚甲醛固定，10 min后以0.1%Triton X-100通透胞膜進行磷酸鹽緩沖液沖洗(15 min)，以5%牛血清蛋白封閉， 采用P-CK和4,6-二脒基-2-苯基吲哚進行染色，在免疫熒光顯微鏡視野下觀察細胞情況。

1.3.2CTCs陽性判定標準 細胞呈現橢圓、圓形或長形，細胞核質比明顯大于血細胞，可同時被P-CK和4,6-二脒基-2-苯基吲哚染色，熒光下細胞形態完整，呈現藍色和綠色熒光即判定為陽性。

1.3.3腫瘤分期 參照國際抗癌協會修訂的《最新國際肺癌TNM分期診斷標準(第7版)》[10]標準對合并組患者腫瘤進行分期。

2 結 果

2.1兩組患者CTCs陽性表達情況比較 COPD組患者的CTCs陽性表達率為0，合并組患者的CTCs陽性表達率為85.45%(47/55)，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2各種檢測方式對合并組患者肺癌確診情況比較 合并組中，經支氣管鏡肺部活檢診斷為肺癌患者37例(67.27%)，經皮穿刺肺活檢診斷4例(7.27%)，痰細胞檢測診斷6例(10.91%)，淋巴結活檢診斷8例(14.55%)。各種方式的檢出率均明顯低于CTCs陽性表達率(85.45%)，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.3不同特征COPD合并肺癌患者CTCs陽性表達情況比較 不同性別、年齡、病理分型COPD合并肺癌患者的CTCs陽性表達例數比較，差異無統計學意義(P>0.05)，但不同的TNM分期、遠處轉移情況COPD合并肺癌患者的CTCs陽性表達例數比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同特征COPD合并肺癌患者CTCs陽性表達情況比較(n)

2.4不同CTCs表達情況患者預后情況比較 合并組中，CTCs陽性表達患者47例，平均生存周期為(7.36±1.85)個月，CTCs陰性表達患者8例，平均生存周期為(13.54±2.34)個月，差異有統計學意義(P<0.05)。CTCs整體陰性患者(COPD組60例與合并組中CTCs陰性表達患者8例)的平均生存周期為(20.76±4.24)個月，CTCs陽性表達COPD合并肺癌患者的平均生存周期也明顯短于CTCs整體陰性患者，差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討 論

近年來，隨著人口老齡化進程加快，人們生活及飲食習慣改變，以及環境的變化等因素影響，各類慢性疾病的患病率不斷升高，COPD作為一種嚴重威脅患者生活質量、耗費醫療資源的肺部疾病，目前已成為臨床上第三大致死疾病[11-13]。肺癌是起源于支氣管黏膜或腺體癌變的惡性腫瘤，患者預后往往較差。有研究證實，肺癌與COPD的并發主要與患者存在吸煙史或有長期刺激性氣體(顆粒物)暴露史等有關，也與COPD造成的肺纖維化和上皮組織過度增生、患者長期使用激素類藥物等造成機體免疫抑制等有關[14-16]。臨床發現，由于CT、X線片、組織活檢等傳統檢測方式對肺癌早期檢測具有一定的局限性，且其結果受到影像學檢查醫務工作人員或病理科醫生的影響，加之肺癌早期不具有特異性表現，大多數COPD合并肺癌的患者在采用傳統檢測方法確診時常為肺癌晚期，且因為COPD進展導致患者肺功能差,一般難以行手術治療，使患者錯過最佳治療期，嚴重影響患者的預后[17-18]。因此，尋求一種特異度高的早期篩查肺癌手段具有重要臨床意義。

CTCs是游離于外周血中所有腫瘤細胞的統稱。研究證實，除了從已形成的實體瘤病灶(原發灶、轉移灶)脫落入血外，腫瘤細胞在形成實體瘤病灶之前便有可能進入血液系統中[19]，提示CTCs的存在往往要早于影像學表現或臨床癥狀的出現。CTCs檢測可以檢測出已經進入血液循環系統的腫瘤細胞，且該技術對腫瘤特有的抗原、基因、蛋白等進行捕捉、判定，可檢測出在血液中游離的腫瘤細胞究竟是哪個部位的，這意味著該技術能檢測出游離在血液中所有種類的腫瘤細胞，對于腫瘤細胞的極早期篩查有不可忽視的作用。通過檢查人血液中是否存在CTCs，可在腫瘤萌芽階段就發現腫瘤，從而保證患者得到早期治療，改善預后。

外周血CTCs檢測與傳統檢測方法比較，是一種取材方便、對患者機體損傷小、特異度低、指標清晰的新型腫瘤檢測方式。目前，已有研究發現外周血CTCs檢測在腫瘤的臨床診斷、病情監測、發現早期轉移等方面具有重要意義，若CTCs陽性則提示患者預后差[19-20]。本研究結果也驗證了上述研究結論，CTCs陽性表達的COPD合并肺癌患者的平均生存周期[(7.36±1.85)個月]短于CTCs陰性表達的COPD合并肺癌患者[(13.54±2.34)個月]，也明顯短于CTCs整體陰性表達患者的平均生存周期[(20.76±4.24)個月]，差異有統計學意義(P<0.05)；COPD組的CTCs陽性表達率為0，合并組的CTCs陽性表達率為85.45%，差異有統計學意義(P<0.05)。這提示COPD患者若出現CTCs陽性表達，患者有較大的概率并發肺癌，且患者的預后情況較差。本研究還發現，腫瘤分期Ⅳ期及有遠處轉移COPD合并肺癌患者的CTCs陽性表達例數明顯多于腫瘤分期Ⅲ期及無遠處轉移COPD合并肺癌患者，差異有統計學意義(P<0.05)，進一步表明CTCs可以提示患者的病情和預后情況。

綜上所述，CTCs在對COPD患者肺癌篩查中可作為重要參考指標，且可反映患者遠處轉移情況，對患者病情評估和預后判斷具有重要的指導意義，CTCs陽性表達提示患者預后較差。