金線草藥材薄層鑒別及含量測定

李 杉，覃子龍，陸梅元，馬秀梅，曾海生

（1.廣西壯族自治區食品藥品審評查驗中心，南寧 530029；2.柳州市質量檢驗檢測研究中心，廣西 柳州 545001；3.右江民族醫學院附屬醫院，廣西 百色 533000）

金線草為蓼科植物金線草［Antenoron filiforme（Thunb.）Roberty et Vantier］的全草，別名重陽柳、毛蓼、人字草等［1］，主要分布于廣西、云南、湖南、湖北等地。金線草主要含有黃酮類、有機酸、香豆素等化學成分［2，3］。金線草味澀微苦，性平，有活血舒筋、行氣止痛、抗菌消炎、止血生肌等功效，用于跌打損傷、外傷出血、勞傷等疾?。?，4，5］。黃酮類化合物是一類植物體內的次級代謝產物，具有清除自由基、抗腫瘤、抗病毒、抗炎和抗菌等作用，且無毒無害，廣泛應用于食品、藥品、保健品等領域［6］。

本研究采用薄層色譜法對金線草藥材進行鑒別，使用高效液相色譜法對金線草中的蘆丁、槲皮素、山奈酚的含量進行測定，建立其藥材鑒別和含量測定方法，并為開展藥材品質評價、建立該藥材質量控制方法及進一步開發利用提供了科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材 金線草藥材于2020年9月采自廣西靖西市，金線草由右江民族醫學院附屬醫院藥學部曾海生副主任藥師鑒定為蓼科植物金線草［Antenoron filiforme（Thunb.）Roberty et Vantier］的全草。樣品陰干，粉碎至備用。

1.1.2 試藥 硅膠G薄層板；甲醇、乙醇、甲酸乙酯、甲酸、氯仿、二氯甲烷（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；乙腈（美國Fisher公司，色譜純）；磷酸為分析純。蘆丁對照品（批號：205128，上海融禾醫藥科技有限公司）；槲皮素對照品（批號：100081-200408，中國藥品生物制品檢定所）；山柰酚對照品（批號：110861-202012，中國藥品生物制品檢定所）。

1.1.3 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀（Agilent 1260色譜工作站、DAD檢測器）、電子分析天平（AG1353型，瑞士Mettler-Toledo公司）、超聲波清洗器（KQ-250-B型，昆山市超聲儀器有限公司）、101A-3E型電熱鼓風干燥箱（上海實驗儀器廠有限公司）。

1.2 薄層鑒別

1.2.1 對照品溶液的制備 使用電子分析天平分別精密稱取適量蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品，利用甲醇溶液溶解并分別定容至10 mL容量瓶中，制得濃度分別為0.72、0.98、0.85 mg/mL的對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取金線草1 g，放入具蓋錐形瓶中，然后加入25 mL甲醇溶液，稱定其重量，加熱回流提取1 h，趁熱濾過，蒸干，殘渣加入1 mL甲醇溶液使其溶解，作為供試品溶液。

1.2.3 薄層層析條件 硅膠G薄層板（10 cm×10 cm）；吸取供試品溶液6μL，蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品溶液2μL，分別點于同一塊硅膠G板上，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（10∶3∶1.5）為展開劑，展開，晾干，噴3%三氯化鋁-乙醇溶液，晾干，置紫外燈（360 nm）下檢視。

1.3 HPLC含量測定

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸（B）水溶液，梯度洗脫（0～20 min，10%-＞32%A；21～45 min，32%-→48%A；46～60 min，48%-→62%A；61～80 min，62%-→10%A），流速：1 mL/min，進樣量：10μL，柱溫：30℃，檢測波長：370 nm。色譜峰與其他雜質峰有很好的分離度（圖1）。

圖1 對照品（A）和樣品甲醇提取物（B）色譜圖

1.3.2 制備對照品溶液 使用電子分析天平分別精密稱取適量蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品，甲醇溶解并定容至10 mL的容量瓶中，制得濃度分別為0.25、0.18、0.42 mg/mL的混合對照品溶液。

1.3.3 樣品的制備 精密稱取金線草1.0 g，放入具蓋錐形瓶中，然后加入25 mL甲醇，稱定其重量，加熱回流提取1 h，冷卻到室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，輕搖后濾過，取續濾液離心后過0.22μm濾膜，即得樣品溶液。

2 結果與分析

2.1 薄層鑒別試驗結果

薄層色譜圖試驗發現，金線草藥材在與蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品斑點的相同位置處，均有相同顏色斑點，且斑點較清晰（圖2）。

圖2 金線草藥材TLC鑒別

2.2 方法學結果

2.2.1 線性關系 在“1.3.1”色譜條件依次進樣10μL，以濃度（x）為橫坐標，峰面積（y）為縱坐標繪制標準曲線，即得各成分線性回歸方程及相關系數分別為：蘆?。簓=17 905x-15.915，r=0.999 4，在濃度為2.12～100.80μg/mL范圍內線性關系良好；槲皮素：y=33 029x-9.054，r=0.999 8，在 濃 度 為25.50～758.86μg/mL范圍內線性關系良好；山奈酚：y=30 464x+0.722 3，r=0.999 5，在濃度為2.62～250.48 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.2.2 精密度 精密吸取“1.3.2”項下混合對照品溶液，按照“1.3.1”項下色譜條件連續進樣6次，分別記錄對應的峰面積，蘆丁、槲皮素、山奈酚峰面積的RSD分別為0.56%、0.32%和0.89%，表明該方法精密度良好。

2.2.3 重復性 精密稱取金線草藥材粗粉共6份，每份1.0 g，按照“1.3.3”項下方法制備金線草樣品溶液，分別精密吸取樣品溶液10μL，按照“1.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，蘆丁、槲皮素、山奈酚的RSD分別為2.12%、1.45%和2.06%，表明該方法重復性良好。

2.2.4 穩定性 精密稱取金線草藥材粗粉1.0 g，按照“1.3.3”項下方法制備成樣品溶液，精密吸取樣品溶液10μL，分別在0、3、6、9、12、24 h后于上述色譜條件下進樣，蘆丁、槲皮素、山奈酚的RSD分別為1.28%、1.96%和1.52%，表明樣品在24 h內穩定。

2.2.5 加樣回收率 精密稱取金線草藥材粗粉6份，每份0.5 g，并加入適量的蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品，各待測成分平均回收率（n=6）分 別 為98.42%、101.21%、97.92%；RSD分 別 為1.90%、2.78%、2.35%，表明該測定方法測定結果準確、可靠。

2.3 含量測定結果

精密稱取3份金線草藥材樣品1.0 g，按照“1.3.3”項下方法制備金線草藥材樣品溶液，按照“1.3.1”項下色譜條件進行測定、計算，按照外標一點法計算藥材樣品中蘆丁、槲皮素和山柰酚的含量（每個樣品重復進樣3次，取平均值），結果見表1。

表1 廣西靖西市產金線草中3種黃酮成分的含量（n=3）（單位：mg/g）

3 小結

通過對樣品制備方法、展開劑等因素的考察，對金線草藥材中蘆丁、槲皮素、山奈酚成分薄層鑒別進行了分析，表明該方法具有較好的分離效果，樣品與對照品的斑點均較易檢出，且具有良好的重現性。運用高效液相色譜法測定金線草中蘆丁、槲皮素、山奈酚的含量，操作簡單、準確可靠，可作為金線草藥材質量控制、資源評價等工作的參考。