3 株水產病原維氏氣單胞菌對常用抗菌藥物耐藥性比較分析

湯環宇 ，翟偉 ，朱鑫海 ，周一凡 ，唐建清 ，張曉君

（1.揚州大學動物科學與技術學院，江蘇 揚州 225009；2.江蘇省淡水研究所，江蘇 南京 210017）

本研究采用紙片擴散法（K－B 法）測定了分離自羅氏沼蝦、克氏原螯蝦和青蝦的3 株維氏氣單胞菌對37 種抗菌類藥物的敏感性，同時采用試管稀釋法測定了5 種抗菌藥物對這3 株病原維氏氣單胞菌的最小抑菌濃度（MIC） 和最小殺菌濃度（MBC），研究結果可為水產養殖中維氏氣單胞菌引起的水生動物疾病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

維氏氣單胞菌JDM2020 分離自揚州高郵市某養殖場患病羅氏沼蝦，維氏氣單胞菌CPA2020 分離自江蘇省泗洪縣某養殖場患病克氏原螯蝦，維氏氣單胞菌GJL2020 分離自揚州市某養殖場患病青蝦。3 株維氏氣單胞菌均保存于實驗室備用。

1.2 試驗藥品

表1 5 種抗菌藥藥品信息

1.3 病原菌藥物敏感性測定

病原菌對37 種抗菌類藥物的敏感性測定采用常規瓊脂擴散法。將菌JDM2020、CPA2020和GXL2020 分別接種于普通營養肉湯，在28 ℃，180 r/min 的搖床中培養 24 h 后，取 100 L 菌液均勻涂布于普通營養瓊脂平板上。待自然干后，用經滅菌的鑷子取藥敏紙片依次平貼于涂布細菌的培養基表面，每個平板貼6 張藥敏紙片，重復3 次。置28 ℃培養箱中培養24 h 后測量抑菌圈直徑，并根據藥敏紙片使用說明書判定敏感性。

1.4 病原菌對5 種常見藥物的MIC 和MBC 測定

將菌株 JDM2020、CPA2020 和 GXL2020 分別接種于普通營養肉湯中，在28 ℃，180 r/min 的搖床中培養24 h 后，將菌液濃度稀釋至10CFU/mL。5 種藥物各設 14 個濃度梯度試驗組（30，25，20，15，10，9，8，7，6，5，4，3，2 和 1 mg/L）和 1 個空白對照組。各試驗組分別加入0.1 mL 上述菌液，空白對照組不加菌液。每個試驗組設3 個重復。振蕩使被測菌與藥液充分混勻，置28 ℃恒溫培養24 h 后，肉眼觀察呈現澄清且搖動后仍澄清者，則表示無細菌生長（被抑制）；若呈混濁狀態則表示有細菌生長（無抑制）。無細菌生長的最大稀釋度的藥液，即為該藥物的MIC。從澄清的試管中吸取0.1 mL，涂布于普通營養瓊脂平板，于28 ℃培養箱中培養24 h后，仍無細菌生長的最低藥物濃度為供試藥物對細菌的MBC。

2 結果與分析

2.1 3 株不同來源維氏氣單胞菌對37 種抗菌類藥物的敏感性

通過紙片擴散法測定羅氏沼蝦源維氏氣單胞菌JDM2020、克氏原螯蝦源維氏氣單胞菌CPA2020、青蝦源維氏氣單胞菌GXL2020 對供試37 種抗菌類藥物敏感性見表2。結果顯示，羅氏沼蝦源維氏氣單胞菌JDM2020 對頭孢呋辛、氧氟沙星和左氟沙星等9 種藥物敏感，對氟苯尼考、慶大霉素、頭孢唑林、氨曲南等14 種藥物中介，對恩諾沙星、諾氟沙星、卡那霉素等14 種藥物耐藥?？耸显r源維氏氣單胞菌CPA2020 對氯霉素、頭孢呋辛、左氟沙星等13 種藥物敏感，對恩諾沙星、氟苯尼考、卡那霉素等10 種藥物中介，對復方新諾明、環丙沙星、氨芐西林等14 種藥物耐藥。青蝦源維氏氣單胞菌GXL2020 對氟苯尼考、妥布霉素、頭孢呋辛等10 種藥物敏感，對恩諾沙星、卡那霉素、慶大霉素等17 種藥物中介，對四環素、青霉素G、環丙沙星等10 種藥物耐藥。

表2 3 株不同來源維氏氣單胞菌對37 種抗菌藥物的敏感性①

續表

2.2 5 種抗菌藥物對3 株不同來源維氏氣單胞菌的MIC

表3 5 種抗菌藥對3 株維氏氣單胞菌MIC①

2.3 5 種抗菌藥物對3 株不同來源維氏氣單胞菌的MBC

表4 5 種抗菌藥對3 株不同來源維氏氣單胞菌的MBC①

3 討論

為指導對維氏氣單胞菌引起的水生動物疾病的精準用藥，研究開展了不同來源的維氏氣單胞菌對常見抗菌藥物的敏感性測定，并采用試管稀釋法測定了養殖生產中常用的5 種抗菌藥物對不同來源的維氏氣單胞菌的MIC 和MBC，結果發現氟苯尼考、恩諾沙星對維氏氣單胞菌的殺菌效果最好，可用較低濃度殺滅不同來源的維氏氣單胞菌。氟苯尼考可以通過抑制轉肽酶，使肽酶的增長受阻，抑制細菌內肽鏈的形成，從而阻止蛋白質的合成，達到抗菌目的，亦具有廣譜抗菌作用。恩諾沙星屬第三代氟喹諾酮新藥，具有良好的抗菌活性，而且殺菌力強，吸收快，被廣泛用于水產養殖業。

隨著抗菌藥物長期且大量使用，使得致病菌的耐藥性逐漸凸顯出來。因此，在預防與治療水產動物細菌性病害中，要避免盲目用藥，嚴格控制用量，高效殺滅細菌的同時做到準確用藥和減量用藥，以保障水產養殖業的健康可持續發展。