孟魯司特鈉咀嚼片在健康人體內的生物等效性

[摘要]目的評估空腹狀態下孟魯司特鈉咀嚼片在人體內的生物等效性。方法試驗采用隨機、交叉、單劑量、兩周期、兩序列設計。入組的24例健康受試者在空腹狀態下口服孟魯司特鈉咀嚼片受試制劑或參比制劑5 mg，用高效液相色譜-質譜聯用法測定血漿中的藥物濃度，用WinNonlin^? 7.0軟件按非房室模型進行藥代動力學參數的計算，并采用SAS 9.4統計軟件分析兩種制劑的生物等效性。結果空腹單次給藥后，孟魯司特鈉主要藥動學參數如下：受試制劑、參比制劑的最大血藥濃度（C_max）分別為（247.83±65.49）和（277.08±56.09）μg/L;達峰時間（T_max）分別為（3.15±1.40）和（2.79±0.94）h;半衰期（t_1/2）分別為（5.02±0.60）和（5.07±0.59）h;從0時到最后計算時間點濃度-時間曲線下面積（AUC_0-t）分別為（1 862.74±409.99）和（1 937.62±436.24）μg·h/L;從0時到無限時間濃度-時間曲線下面積（AUC_0-∞）分別為（1 939.89±442.26）和（2 012.45±480.69）μg·h/L。受試制劑與參比制劑的C_max、AUC_0-t、AUC_0-∞幾何均值比的90%置信區間均在80.00%～125.00%之間。結論在空腹狀態下，孟魯司特鈉咀嚼片受試制劑與參比制劑具有生物等效性。

[關鍵詞]孟魯司特鈉;白三烯拮抗劑;色譜法，液相;質譜分析法;藥代動力學;治療等效

[中圖分類號]R969.1[文獻標志碼]A[文章編號]2096-5532（2022）02-0269-05

doi：10.11712/jms.2096-5532.2022.58.038[開放科學（資源服務）標識碼（OSID）]

[網絡出版]https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20220312.2137.001.html;2022-03-1512：03：29

BIOEQUIVALENCE OF MONTELUKAST SODIUM CHEWABLE TABLETS IN HEALTHY VOLUNTEERS" "ZHANG Xiaolei， WANG Chenjing， LI Xin， LIU Yanping， GAO Hua， CAO Yu （School of Pharmacy， Qingdao University， Qingdao 266021， China）

[ABSTRACT]ObjectiveTo evaluate the bioequivalence of montelukast sodium chewable tablets in fasting volunteers. MethodsA randomized crossover single dose design was adopted with two phases and two sequences. The 24 healthy volunteers enrolled were orally administered 5 mg of montelukast sodium chewable tablets or reference formulation. Drug concentration in plasma was determined with high-performance liquid chromatography-mass spectrometry （HPLC-MS）. Pharmacokinetic parameters were calculated using non-compartmental modeling in WinNonlin^? 7.0 software. The bioequivalence of both formulations was evaluated using SAS 9.4 software. ResultsAfter a single oral dose in fasting state， the pharmacokinetic parameters of montelukast sodium chewable tablets versus reference formulation were as follows： maximum plasma concentration （C_max） was （247.83±65.49） and （277.08±56.09） μg/L; time to maximum plasma concentration （T_max） was （3.15±1.40） and （2.79±0.94） h; half-life （t_1/2） was （5.02±0.60） and （5.07±0.59） h; the area under the concentration-time curve from 0 to the last measurable concentration （AUC_0-t） was （1 862.74±409.99） and （1 937.62±436.24） μg·h/L; the area under the concentration-time curve extrapolated to infinity （AUC_0-∞） was （1 939.89±442.26） and （2 012.45±480.69） μg·h/L. The 90% confidence intervals of geometric mean ratios of C_max， AUC_0-t， and AUC_0-∞ of both formulations were 80.00%-125.00%. ConclusionMontelukast sodium chewable tablets and reference formulation are bioequivalent in fasting healthy volunteers.

[KEY WORDS]Montelukast sodium; leukotriene antagonists; chromatography， liquid; mass spectrometry; pharmacokine-tics; bioequivalence

孟魯司特是一種新型的、強選擇性的白三烯受體拮抗劑，其作用和其他白三烯受體拮抗劑類似（抑制炎癥反應和滲出、抗過敏等），在過敏性鼻炎、多種哮喘、上呼吸道感染后咳嗽以及慢性阻塞性肺疾病等呼吸系統相關的疾病中應用廣泛[1-7]。該藥由默沙東制藥有限公司研發，商品名為順爾寧，1998年在美國上市，之后陸續在中國等許多國家銷售使用。孟魯司特的劑型包括片劑、咀嚼片和顆粒劑。其中，孟魯司特鈉咀嚼片服用方便，一天服用一次，安全性好，不良反應輕微，因此應用范圍廣，可用于成年人和12個月及以上兒童哮喘的預防和長期治療，同時還能緩解季節性以及常年性過敏性鼻炎引起的不適。鑒于孟魯司特的以上作用特點以及近些年來哮喘和過敏性鼻炎病人不斷增多的趨勢[8-9]，通過生物等效性試驗對孟魯司特鈉咀嚼片仿制藥和原研藥的一致性進行評價，可以確保仿制藥在質量和療效上與原研藥一致，為后期在臨床上以孟魯司特鈉咀嚼片仿制藥替代原研藥奠定堅實的基礎，從而有效降低目標病人高額的醫藥費用[10]。對于通過一致性評價的藥品國家也頒布了一系列的激勵政策，如醫保支付方面的支持、藥品集中采購的傾斜、醫療機構采購與選用的優先權、對相應企業申請資金時給予的支持等[11]。在上述背景下，某藥企研制了孟魯司特鈉咀嚼片仿制藥，本研究在成年受試者空腹狀態下觀察上述仿制藥和原研藥的藥代動力學參數及生物利用度，進而評價兩種制劑的生物等效性，以期為仿制藥上市提供技術支持。

1材料與方法

1.1儀器及軟件

色譜系統包括：DGU-20A5R型脫氣機、CBM-20A型控制器、LC-20AD型液相泵（日本島津公司），CTC PAL型自動進樣器（瑞士思特斯分析儀器有限公司）和DT-230A型柱溫箱（上海楚越電子科技有限公司）;串聯質譜系統包括：API 4000型質譜儀、配套電噴霧離子源（美國Sciex公司）;數據采集所用Analyst 1.6.2軟件（美國Applied Biosystems公司）。

1.2藥品與試劑

受試制劑：孟魯司特鈉咀嚼片（國內某制藥有限公司，規格為每片5 mg，批號為20170101）;參比制劑：孟魯司特鈉咀嚼片，商品名為順爾寧（默沙東制藥有限公司，規格為每片5 mg，批號為M038748）;孟魯司特鈉對照品（TLC Pharmaceutical Standards Ltd.，批號為1827-014A1，純度為99.8%）;內標：孟魯司特鈉-d6（Toronto Research Chemicals Inc.，批號為2-XAL-140-3，化學純度為95%，核素純度為99.5%）。以乙腈、甲醇、甲酸為色譜純;水是自制的超純水。

1.3受試者選擇

根據既往研究的藥代動力學數據，孟魯司特鈉咀嚼片（5 mg）的個體內變異為17%。假定受試制劑和參比制劑的幾何均值比為0.95～1.05，把握度為0.90，雙向單側顯著性水平為0.05，個體內變異為17%，經統計軟件計算得到需有20例受試者才可證明生物等效性。考慮到受試者脫落因素，本試驗計劃入組24例受試者。已入組的24例健康受試者，篩選期體格檢查、實驗室檢查、生命體征評估、12導聯心電圖均正常或異常無臨床意義。無受試者報告酗酒史、藥物濫用史、獻血/輸血史。其中男性受試者20例，女性4例;平均年齡（26.33±5.31）歲;平均身高為（170.27±7.18）cm;平均體質量為（63.48±8.52）kg，平均體質量指數為（21.88±2.37）kg/m2。本研究已通過青島大學附屬醫院醫學倫理委員會的批準（藥臨倫審 QYFYEC 2017-019-01），所有受試者試驗前均簽署知情同意書。

1.4試驗方案

本試驗采用隨機、平衡、開放、單劑量、兩周期、兩序列、兩交叉設計，清洗期為7 d。24例受試者按照簽署知情同意書的先后順序給予“篩選號”，參加體格篩選，篩選合格的受試者在第1次入住研究中心時獲得“隨機號”，并被隨機分配到一個給藥組。使用SAS 9.4統計軟件編寫隨機化程序，按區組隨機方法將受試者隨機分為2組，每組12例。所有受試者于給藥前1 d入住研究中心，每個周期內，受試者在空腹至少10 h后隨機服用受試制劑或者參比制劑，用240 mL溫水送服，給藥前、后1 h內禁止飲水，分別于給藥4、10 h后進食統一的清淡午餐和晚餐。試驗過程中密切監測并記錄受試者的生命體征和不良事件。經過7 d清洗期后，第2周期受試者按照方案規定交叉服用另一種藥物，重復第1周期的流程。

每一周期每一受試者共采集16管靜脈血（每管4 mL），分別在給藥0時（給藥前1 h內）以及給藥0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0、24.0 h后采集，采集的血樣置于事先貼有標簽的真空采血管中。血樣采集后在預冷離心機中（2～8 ℃）以3 000 r/min離心10 min，分離血漿，取800 μL血漿放入測試管中，剩余血漿放入備份管中。密集點血漿樣本暫存于-20 ℃冰箱中，于24 h內轉移至（-70±10）℃冰箱中凍存，非密集點血漿樣本直接放（-70±10）℃冰箱中凍存，以供藥代動力學分析[12]。

1.5色譜與質譜條件

色譜柱為：Phenomenex Luna C18（50 mm×2 mm，5 μm），無預柱;流動相：水-乙腈，采用梯度洗脫（0 min：水-乙腈（25∶75）;2.0 min：水-乙腈（25∶75）;2.1 min：水-乙腈（5∶95）;2.9 min：水-乙腈（5∶95）;3.0 min：水-乙腈（25∶75）;4.0 min：水-乙腈（25∶75））;流量：0.45 mL/min;柱溫：40 ℃;進樣量：20 μL。

采用電噴霧離子化技術、正離子模式、多反應監測的液相色譜-串聯質譜法進行分析。離子源參數如下：氣簾氣（CUR）壓力206.85 kPa，噴霧電壓5 000 V，溫度550 ℃，離子源氣體1（GS1）壓力為344.75 kPa，離子源氣體2（GS2）壓力344.75 kPa。孟魯司特監測離子對為m/z586.2→m/z422.2，去簇電壓（DP）為77 V;內標孟魯司特-d6離子對為m/z592.3→m/z427.2，DP為77V;掃描時間為200 ms。

1.6血漿樣品處理

取樣本50 μL加到96孔聚丙烯板中，加入100 μg/L內標工作溶液50 μL，在室溫黃光條件下振搖樣本板約1 min后，加入乙腈300 μL，于室溫黃光條件下振搖混勻約10 min。再將上述樣本板于4 ℃條件下，以4 000 r/min離心10 min，轉移上清液200 μL至另一干凈的96孔聚丙烯板中，并加水50 μL進行稀釋，在室溫黃光條件下振搖混勻約10 min。最后將該樣本板于4 ℃條件下，以4 000 r/min離心5 min，取上清液，進樣20 μL進行分析。

1.7方法學驗證

1.7.1方法選擇性取6份不同來源的空白人血漿和相應空白血漿制備的濃度為2 μg/L的定量下限樣本，用以評價該分析方法的選擇性。待測物通道的干擾峰面積不超過相應基質制備的定量下限樣本中待測物峰面積的20%，內標通道的干擾峰面積不超過相應基質制備的定量下限樣本中內標峰面積的5%。

1.7.2標準曲線與定量下限應用空白人血漿新鮮制備8個濃度水平（2、4、10、50、200、600、900、1 000 μg/L）的標準曲線樣本，按“1.6血漿樣品處理”中方法處理后進樣分析。

1.7.3精密度與回收率用空白人血漿新鮮制備5個濃度水平（2、6、40、500、800 μg/L）的質控樣本，按“1.6血漿樣品處理”中方法處理后進樣測定。每個濃度水平的質控樣本各6份在同一天內進行測定，連續測定3 d，以此計算該測定方法的批內與批間精密度。

取空白人血漿，提取后向提取物中添加待測物和內標制得濃度分別為6、500和800 μg/L的參比樣本。再應用空白人血漿配制濃度分別為6、500、800 μg/L的質控樣本作為測試樣本。每個濃度水平的參比樣本和測試樣本分別各配制6份。計算內標校正后的提取回收率（每個濃度水平的測試樣本中待測物與其內標峰面積比的均值除以同濃度參比樣本中待測物與其內標峰面積比的均值），用以評估該分析方法的提取回收率。

1.7.4穩定性試驗對于待測物在全血和血漿樣本中的穩定性，均觀察低、高（6、800 μg/L）兩個濃度水平的質控樣本，每個濃度水平的樣本各6份，分別進行全血樣本室溫白光放置2.0 h、血漿樣本室溫白光放置2.5 h、血漿樣本室溫黃光放置19.5 h、血漿樣本-80 ℃循環凍融5次、血漿樣本-80 ℃放置36 d的穩定性試驗。

1.8數據處理及統計分析

使用WinNonlin^? 7.0軟件，按照非房室模型的參數計算方法，計算孟魯司特鈉的人體藥代動力學參數，并采用SAS 9.4統計軟件對所得數據進行統計學分析。受試制劑與參比制劑的達峰時間（T_max）比較采用配對樣本的非參數檢驗。最大血藥濃度（C_max）、從0時到最后計算時間點濃度-時間曲線下面積（AUC_0-t）、從0時到無限時間濃度-時間曲線下面積（AUC_0-∞）的數據在進行自然對數轉換以后，進行方差分析（ANOVA）及雙向單側t檢驗，計算受試制劑和參比制劑血漿中孟魯司特C_max、AUC_0-t和AUC_0-∞幾何均值比的90%置信區間，進行生物等效性評價。若受試制劑與參比制劑藥代動力學參數（C_max、AUC_0-t、AUC_0-∞）幾何均值比的90%置信區間在80.00%～125.00%范圍內（包括邊界值），則可認為受試制劑與參比制劑等效[12]。

2結果

2.1方法學驗證

方法學驗證結果顯示，空白人血漿中的內源性物質對孟魯司特鈉和內標的測定沒有顯著性影響，該方法的選擇性良好。以孟魯司特鈉的質量濃度為橫坐標（x），待測物與內標峰面積比值為縱坐標（y）進行線性回歸，所得回歸方程如下：y=0.007 15x+0.000 38（r=0.999 00），權重因子為1/x2，線性范圍為2～1 000 μg/L，最低定量限為2 μg/L。在不同試驗條件下，孟魯司特鈉全血和血漿樣本均保持穩定且相對標準偏差（RSD）<15%，符合方法學的要求。精密度與回收率試驗結果見表1。

2.2藥代動力學參數

入組的24例受試者分別空腹口服孟魯司特鈉受試制劑和參比制劑5 mg后的主要藥代動力學參數見表2。由表2數據可知，兩種制劑中，孟魯司特鈉的主要藥代動力學參數基本相似，且與國外有關文獻結果一致[13-14]。

2.3生物等效性分析

受試制劑和參比制劑的主要藥代動力學參數C_max、AUC_0-t及AUC_0-∞在進行對數轉換后，進行交叉試驗設計的方差分析。分析結果顯示，孟魯司特鈉咀嚼片C_max制劑間的差異有統計學意義（F=6.211，P<0.05），但不影響受試制劑的生物等效性評價，給藥序列間、給藥周期間的差異均無統計學意義（Pgt;0.05）;AUC_0-t及AUC_0-∞在給藥序列間、制劑間和給藥周期間的差異也均無統計學意義（Pgt;0.05）。兩種制劑的T_max比較差異也無統計學意義。采用雙向單側t檢驗，計算得出受試制劑與參比制劑C_max、AUC_0-t和AUC_0-∞幾何均值比的90%置信區間分別為81.03%～96.20%、89.78%～102.69%和89.99%～103.12%，均符合藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導原則中生物等效性的等效范圍要求（80.00%～125.00%）。以上數據表明，在空腹狀態下受試制劑和參比制劑生物等效。

2.4安全性評價

本研究的24例受試者在試驗期間共有3例受試者發生4次不良事件，分別為第5號受試者第2周期服參比制劑后發生上呼吸道感染;第9號受試者第2周期服參比制劑后發生T波改變、竇性心動過速;第17號受試者在第2周期服參比制劑前發生暈厥。其中，前2例受試者發生的3次不良事件均為輕度，無需處理;后1例受試者發生暈厥為中度不良事件，給予口服500 g/L葡萄糖液后好轉。經分析，前2例受試者發生的3次不良事件與研究藥物可能有關;而后1例受試者發生暈厥與研究藥物無關，因為17號受試者出現暈厥時，距離第1周期服藥已經7 d，尚未服用第2周期的藥物，且已空腹10 h，口服葡萄糖后完全好轉無后遺癥，持續時間共14 min，因此判定暈厥為低糖血癥所致。整個試驗過程中未觀察到嚴重或導致退出的不良事件。同時，生命體征和體格檢查也均未出現有臨床意義的異常結果。故孟魯司特鈉咀嚼片受試制劑與參比制劑的安全性和耐受性良好。

3討論

孟魯司特鈉口服即可有效，吸收迅速，無論單獨服用還是與其他藥物聯合使用，臨床療效顯著;此外，因毒性小，不良反應輕微，病人的耐受性和依從性都比較高，而且孟魯司特鈉適用于兒童和成年目標病人，故該藥自2002年在國內上市以來，臨床應用日趨廣泛[15]。

本研究采用高效液相色譜-質譜聯用法測定血漿中孟魯司特鈉的血藥濃度，經方法學驗證，該方法選擇性、靈敏度、穩定性、精密度和回收率均符合要求，待測藥物濃度與響應值的線性關系良好。

本次試驗方案的設計主要參考國家藥品監督管理總局2016年頒布的《以藥動學參數為終點評價指標的化學藥物仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則》[12]。按照該指導原則，將原研藥順爾寧作為本研究的參比制劑。同時，該指導原則中明確規定，試驗給藥之間應有足夠長的清洗期（一般為待測物7倍半衰期以上），孟魯司特的半衰期為2.7～5.5 h，因此本研究在兩次給藥之間設置了7 d的清洗期。本研究采用單劑量、雙周期、兩序列的交叉試驗設計，每1例入組的受試者均連續服用兩次不同的藥物制劑，等同于自身對照，從而減少了不同試驗周期以及個體差異對結果的干擾。另外，為了減少與藥品間差異無關的因素的影響，試驗納入健康的男性和女性受試者，最終，所有受試者均完成了整個研究，并且均按照要求用藥，各周期服藥依從性良好。

本文研究結果顯示，受試制劑與參比制劑中，孟魯司特鈉的主要藥代動力學參數基本相似，且與已有的文獻報道結果一致[13-14]。兩種制劑的平均血藥濃度-時間曲線的走向吻合度也比較高，說明二者在人體內的藥代動力學過程接近。進一步的生物等效性分析結果表明，兩種孟魯司特鈉咀嚼片在空腹狀態下吸收速度和程度相當，符合生物等效性的判定標準，而且兩種制劑的安全性和耐受性較好。

綜上所述，在空腹狀態下，孟魯司特鈉咀嚼片受試制劑與參比制劑具有生物等效性。

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（本文編輯馬偉平）