PCSK9基因rs562556與冠心病患者血脂水平的相關性分析

孫靈杰

大連普蘭店區中心醫院心內一科，遼寧省大連市 116200

冠心病(Coronary heart disease，CHD)是冠狀動脈粥樣硬化造成冠狀動脈血供不足而導致的疾病[1]，多發病于中老年人，其中在老年人中的發病率接近15.0%，嚴重威脅患者的生命安全。冠心病發病機制復雜，具體病因包括血脂紊亂、炎癥反應、糖尿病等[2-3]。現代研究表明血脂異常是引發和加重冠心病的重要因素之一，血脂的主要成分包括高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，血脂異常可引起血管內皮細胞的損傷，促進冠心病的發展[3]。其中LDL-C被巨噬細胞攝取后可形成泡沫細胞，加重血管內皮損傷，形成動脈粥樣硬化斑塊[4]。HDL-C是心臟保護性因子，具有一定的抑炎作用[5]。前蛋白轉化酶枯草溶菌素9(Proprotein convertase subtilisin 9，PCSK9)是一種含692個氨基酸的前蛋白轉化酶，具有調節細胞因子、細胞表面受體、內分泌激素表達等功能。PCSK9基因外顯子12的rs562556位點突變與血脂水平存在相關性，進而參與動脈粥樣硬化的進程[6]。本文探討與分析了PCSK9基因rs562556與冠心病患者血脂水平的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年12月—2021年8月本院心內科診治的冠心病患者88例作為冠心病組，同期選擇在本院體檢的健康者88例作為對照組。納入標準：冠心病組符合冠心病的診斷標準，且為首次發病；年齡20～80歲；冠心病組與對照組無親戚與血緣關系；本研究經醫院倫理委員會批準；既往無腦卒中、心臟病史。排除標準：入院前1個月使用過調節血脂藥物的患者；有腦部手術史或創傷史患者；近期進行過動脈穿刺的患者；合并先天性心臟病、冠狀動脈血管畸形的患者；妊娠與哺乳期婦女；合并惡性腫瘤、凝血功能異常的患者；臨床資料記錄不完全或者缺項患者。兩組一般資料對比無統計學差異(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料對比

1.2 血脂檢測 采集所有入選者的空腹靜脈血2～3ml，2 000r/min離心5min，取上層血清，采用全自動生化分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。

1.3 PCSK9基因rs562556檢測 取1.2中的血清學樣本，采用酶聯免疫法(利生物梅里埃公司)檢測血清PCSK9含量，所有步驟由儀器自動完成，檢驗時間不超過20min，檢測靈敏度為0.005ng/ml。采用基因組DNA 提取試劑盒提取DNA(標準酚氯仿法)，定量DNA濃度后，采用基因分型探針試劑盒(ABI公司)對多態性位點rs562556進行基因多態性分析。設計PCSK9基因rs562556位點的引物(上游5’-AATTTACCGGGACTGCGGACC-3’、下游5’-GCAAATTCCAGGGCCAACCG-3’)，配置PCR 反應體系25μl后，其中DNA樣本5μl，PCR循環為35個，收集PCR 產物后用自動DNA 測序儀測定基因序列，根據測序結果判斷rs562556位點的多態性。

2 結果

2.1 兩組血脂水平對比 冠心病組的TG、TC與LDL-C含量高于對照組(P<0.05)，HDL-C含量低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血脂水平對比

2.2 兩組血清PCSK9含量對比 冠心病組的血清PCSK9含量為(3.89±0.22)ng/ml，高于對照組的(1.89±0.21)ng/ml(t=12.743，P=0.000<0.05)。

2.3 兩組PCSK9基因rs562556基因型與等位基因分布特征對比 冠心病組的PCSK9基因rs562556基因型GG與等位基因G分布頻率高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組PCSK9基因rs562556基因型與等位基因分布特征對比[n(%)]

2.4 相關性分析 在冠心病組中，Spearsman分析顯示PCSK9基因rs562556基因型GG、等位基因G分布頻率與TG、TC、LDL-C、HDL-C都存在相關性(P<0.05)。見表4。

表4 PCSK9因rs562556與冠心病患者血脂水平的相關性(n=88)

3 討論

當前冠心病在我國的發病人數日益增多，其發病也是高血壓、高血脂、糖尿病等共同作用的結果。現代研究表明頸動脈粥樣硬化斑塊與冠心病具有一定的一致性，其中脂質成分改變在冠心病進程中發揮重要作用[7]。比如LDL-C可刺激血管內皮細胞增殖，促進血液成分沉積于冠狀動脈血管壁，使冠狀動脈血管管腔縮小，導致冠心病患者病情惡化[8]。本研究結果顯示，冠心病組的TG、TC與LDL-C含量高于對照組，HDL-C含量低于對照組，表明冠心病患者多伴隨有血脂異常。從機制分析，TG、TC與LDL-C含量增加，可提高對血管內皮細胞的黏附性，使其大量進入動脈血管壁，促進炎癥細胞的形成，進而促進血管內皮損傷，誘導炎癥因子的產生，促進動脈粥樣硬化斑塊的形成[9]。而HDL可促進脂質溶解，抑制補體激活和瀑布反應，并從膽汁中排泄，從而延緩動脈粥樣硬化進程[10]。

PCSK9為一種與脂代謝調節密切相關的新蛋白，可以打破肝細胞表面低密度脂蛋白受體(LDLR)再循環功能，降低肝臟對膽固醇的清除能力，PCSK9高表達可促進炎癥因子表達增加[11-12]。研究顯示腦梗死患者腦脊液中PCSK9明顯升高，且與患者的癡呆及認知障礙存在相關性。基因多態性是近年來研究冠心病患者的重要熱點問題，PCSK9基因被證實在rs562556位點存在多態性，PCSK9基因rs562556多態性可造成基因表達發生改變及PCSK9分泌的變化[13]。rs562556多位點的突變類型為等位基因A 向G的突變，突變后形成雜合基因型AA及純合基因型GG[14]。本研究結果顯示，冠心病組的血清PCSK9含量高于對照組；冠心病組的PCSK9基因rs562556基因型GG與等位基因G分布頻率高于對照組。從機制上分析，PCSK9是體內調節LDL-C代謝過程的蛋白酶，冠心病患者的血清PCSK9含量顯著升高，且多伴隨有rs562556基因型GG與等位基因G分布[15]。

血脂是冠狀動脈粥樣斑塊的重要成分，體內脂代謝紊亂可會促進LDL-C 在動脈內膜沉積并形成粥樣斑塊。特別是冠心病患者體內冠狀動脈粥樣斑塊的性質呈動態變化，當斑塊內LDL-C增多時，斑塊的穩定性逐步下降，若發生斑塊破裂則會誘發血栓形成，從而導致機體出現心肌梗死甚或心力衰竭[16]。在心血管疾病患者中，PCSK9可結合細胞內和細胞膜的LDLR，可以促進肝細胞表面LDLR降解，使血液LDL-C水平升高[17]。有研究表明HDL-C是心腦血管疾病的保護因素，LDL-C 代謝紊亂會進一步影響其他脂質成分的代謝[18]。PCSK9在體內主要參與LDL-C 的代謝，特別是冠心病患者體內PCSK9基因rs562556位點A向G的突變會影響斑塊性質、使斑塊的穩定性下降。本研究Spearsman分析顯示，冠心病患者的PCSK9基因rs562556基因型GG、等位基因G分布頻率與TG、TC、LDL-C、HDL-C都存在相關性，提示冠心病患者體內PCSK9基因rs562556的突變會影響脂代謝過程。不過本研究也存在一定的不足，納入的病例數較少，且沒有分析其他心血管疾病患者，將在以后的研究中進行完善分析。

總之，冠心病患者多伴隨有血脂異常，同時伴隨有PCSK9基因表達升高與基因突變，PCSK9基因rs562556的突變會影響血脂代謝過程。