美伐他汀結晶純化工藝研究

吳勇良，王平

（1.浙江海正藥業股份有限公司，浙江臺州 318000；2.雅塞利（臺州）制藥有限公司，浙江臺州 318000）

美伐他汀（mervastatin）是他汀類藥物的一種，又名康百汀（compactin），通常作為普伐他汀（pravastatin）藥物生產的前體物質。普伐他汀為3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase，HMG-CoA還原酶）的競爭性抑制劑，對降低體內膽固醇有積極作用。美伐他汀的質量直接影響轉化菌的轉化效率和普伐他汀的純度，同時也是普伐他汀生產成本的主要來源。因此，制備低成本、高質量的美伐他汀對提高普伐他汀的收率和純度、降低生產成本具有重要的意義。

美伐他汀不溶于水，但在發酵液中以美伐他汀酸的形式存在，本文主要研究如何從發酵液中簡單易行地提取出高純度美伐他汀。

1 材料與方法

1.1 材料

美伐他汀粗品（批號130103），純度80%～90%，海正藥業原料藥生產車間。美伐他汀干菌絲（批號130105），海正藥業自制。

1.2 儀器與試劑

81-2型恒溫磁力攪拌器，上海司樂儀器有限公司；XPR205電子天平梅特勒-托利多稱量設備系統有限公司；PEF-6020型真空干燥箱，上海精宏實驗設備有限公司；W501B恒溫水浴鍋，上海申勝生物技術有限公司；SZB水環式真空泵，浙江真空泵有限公司；Buchi Rotavapov R-200旋轉蒸發儀，日本島津；C8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、LC-20AT型高效液相色譜儀，日本島津。

異丙醇，色譜純，蘇州駿赫化工有限公司；無水乙醇，色譜純，安徽安特食品股份有限公司；丙酮，色譜純，國藥集團化學試劑有限公司；乙酸乙酯，色譜純，杭州青辰化學試劑廠。

1.3 試驗方法

1.3.1 液相檢測方法

流動相∶乙腈∶水=80∶20（體積比）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：238 nm；進樣量：10 μL；采集時間：主峰出峰時間的3倍。

1.3.2 溶劑對母液中脫水美伐他汀含量的影響

以美伐他汀粗品為原料，選用丙酮、乙酸乙酯、乙醇和異丙醇分別進行回流溶解，回流溫度50～55 ℃，自然降溫結晶。過濾后，結晶產物于55～62 ℃干燥，母液于35～45 ℃下濃縮干。分別稱重，取樣進行效價檢測和EP檢測。

1.3.3 溶劑對母液中雙氫美伐他汀含量的影響

按照1.3.2中的溶解、過濾和干燥條件進行母液濃縮干燥，比較母液中雙氫美伐他汀含量。

1.3.4 溫度對蛋白去除率的影響

取美伐他汀干菌絲（130105）200 g，加入1 L乙酸乙酯，分別在 0 ℃、5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃和 25 ℃浸泡30 min，絮狀物即雜蛋白，經濾紙過濾后干燥稱重。

2 結果與分析

2.1 溶劑對母液中脫水美伐他汀含量的影響

溶劑對母液中脫水美伐他汀含量的影響如表1所示。以相同質量美伐他汀粗品為原料，采用4種溶劑結晶。在去除脫水美伐雜質方面，母液相中含量最多的為乙酸乙酯結晶母液，脫水美伐雜質去除效果順序為乙酸乙酯＞丙酮＞乙醇＞異丙醇。

表1 溶劑對母液中脫水美伐他汀含量的影響

2.2 溶劑對母液中雙氫美伐他汀含量的影響

溶劑對母液中雙氫美伐他汀含量的影響如表2所示。用上述4種溶劑結晶，以相同質量的美伐他汀粗品為原料進行結晶，在母液相中雙氫美伐他汀含量最高的是異丙醇，因此在去除雙氫美伐雜質方面，溶劑優先順序為異丙醇＞乙醇＞乙酸乙酯＞丙酮。

表2 溶劑對母液中雙氫美伐他汀含量的影響

2.3 溫度對蛋白去除率的影響

如表3所示，浸泡液在時間相同的情況下至0 ℃時，蛋白沉淀數量最多，同體積的浸泡液在0 ℃和5 ℃時雜蛋白濾除重量基本一致，且澄清度在5 ℃和0 ℃時已達到質量標準，考慮到動力成本，選擇5 ℃浸泡去除蛋白比較經濟合算。

表3 過濾相關數據

3 結論

通過實驗，發現乙酸乙酯對脫水美伐他汀的去除效果較好，異丙醇對雙氫美伐他汀的去除效果較好，綜合考慮應選擇異丙醇溶劑作為結晶溶劑；在5 ℃進行蛋白除雜效果較好，可滿足生產和節能需求。