艽龍膠囊對胃腸動力障礙小鼠的影響

林文明 陳曉艷 陳貴娥 孫陽 劉鐵明 董明芝 李宇華,

(1.中國人民解放軍南部戰區海軍第一醫院藥劑科，廣東 湛江 524005；2.空軍軍醫大學藥理學教研室/國家中藥胃腸藥理重點實驗室，陜西 西安710032；3.西安正大制藥有限公司，陜西 西安 710032)

胃腸動力障礙是功能性消化不良(FD)的主要病理生理基礎[1]。臨床上對胃腸動力障礙的治療主要以促動力藥、助消化藥、抑酸藥、抗幽門螺桿菌藥物等為主；近些年來，中醫藥在治療胃腸動力障礙上療效確切、不良反應小，故在臨床上應用廣泛[2]。艽龍膠囊的有效成分為中藥秦艽中提取的龍膽總苷，具有清肝泄熱之功效，臨床上用于功能性消化不良屬肝胃郁熱證者，療效顯著，不良反應少[3]。本文旨在探討艽龍膠囊對小鼠胃腸動力的影響，為臨床治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1動物與藥物 昆明種小鼠60只(雌雄各半，雌性未孕)，體質量20～25 g，由空軍軍醫大學實驗動物中心提供，動物合格證號為SCXK(軍)2015-0007。艽龍膠囊，0.08 g/粒(西安正大制藥有限公司，批號160202)；多潘立酮片(嗎丁啉)，10 mg/片(西安楊森制藥有限公司，批號：151203)。

1.2試劑與儀器 鹽酸左旋精氨酸(北京拜爾迪生物技術有限公司，批號150905)，活性碳(成都市科龍化工試劑廠，批號20061030)，血漿胃動素EILISA測定試劑盒(上海索萊寶生物科技有限公司，批號DRE30082)，血管活性腸肽EILISA測定試劑盒(上海索萊寶生物科技有限公司，批號DRE30543)，NO試劑盒(上海索萊寶生物科技有限公司，批號DRE30105)；電子天平(ME204，METTLER公司)、光學顯微鏡(Nikon H600L，日本Nikon公司)、酶聯免疫檢測儀、低速臺式離心機。半固體營養糊的配制：羧甲基纖維素鈉10 g溶于250 mL蒸餾水中，分別加入蔗糖12 g、奶粉16 g、淀粉10 g，攪拌均勻后，加入活性炭末2 g，配制成300 mL的黑色半固體糊，4℃冰箱儲存，用前取出恢復至室溫。

1.3方法 將60只昆明小鼠適應性飼養3 d后，隨機分為空白對照組、模型對照組、嗎丁啉對照組、艽龍膠囊低、中、高3個劑量組(30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg)，每組10只，雌雄各半。從實驗第1天開始，空白對照組和模型對照組給予蒸餾水，10 ml/kg灌胃，1次/d，連續7 d；嗎丁啉對照組1.4 mg/kg給藥，1次/d，連續7 d；艽龍膠囊分別按30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg給藥，1次/d，連續7 d。胃腸動力模型復制參照李瓊等[4]實驗方法基礎上改良，即模型組及各給藥組在實驗第4天以1.5 g/kg劑量腹腔注射左旋精氨酸注射液，第5、6、7天腹腔注射左旋精氨酸注射液0.75 g/kg復制胃腸動力障礙模型，每日先腹腔注射左旋精氨酸1 h后灌胃給藥。

1.4觀察指標 一般情況觀察：動物生長狀況、糞便性狀、被毛色澤、自主活動、行為活動。平均體質量和平均攝食量觀察。胃腸運動功能的測定：于給藥第6天晚上，禁食不禁飲水，次日腹腔注射左旋精氨酸1 h后給藥，1 h后按0.8 mL/只灌胃半固體營養糊，15 min后麻醉動物，打開腹腔，腹主動脈采血，肝素抗凝，收集血漿，按以下方法取樣并計算小鼠胃內殘留率和小腸推進率。(1)胃內殘留率：結扎賁門部和幽門下端，取出胃，用生理鹽水沖洗胃表面的血漬，稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內容物后在濾紙上擦干，稱重，計算胃內殘留率(%) =胃全重(g)-胃凈重(g)/炭末混懸液灌胃總質量(g) ×100%。(2)小腸推進率：摘取小腸管：上端至幽門下端，下端至回盲部；測量小腸全長和半固體糊在小腸中的推進距離，計算小腸推進率(%) =幽門部到炭末前沿的長度(cm)/小腸總長度(cm) ×100%。分離血漿生化指標：4℃，2 000 r/min，離心15 min，收集血漿，置于-80℃保存；按照試劑盒要求進行血漿胃動素(MTL)和一氧化氮(NO)測定。

2 結 果

2.1一般情況觀察 在給予左旋精氨酸注射液前，正常組、模型組及各給藥組小鼠未見活動異常、糞便異常及毛色改變，當在第5天，第二次給藥左旋精氨酸注射液造模后，模型組小鼠出現毛色不光澤、毛發豎起的改變。正常組和各給藥組無異常表現，均未出現死亡小鼠。

2.2平均體重和平均攝食量觀察 小鼠體質量在第4天給予左旋精氨酸后，模型組小鼠體重在造模后表現為下降趨勢，艽龍膠囊各給藥組及嗎丁啉組小鼠體重無明顯下降，由此表明，艽龍膠囊和嗎丁啉顯著改善小鼠胃腸動力功能，減緩小鼠體重下降(見圖1)。小鼠攝食量在給予左旋精氨酸注射液造模后，與模型組比較，給藥組攝食量均呈上升趨勢。其中艽龍膠囊高劑量組小鼠攝食量明顯上升，與嗎丁啉組小鼠攝食量基本一致，表明艽龍膠囊增加了左旋精氨酸誘導的胃腸動力障礙小鼠攝食量，明顯改善小鼠的胃腸動力功能(見圖2)。

注：A.雌性小鼠體重變化；B.雄性小鼠體重變化。圖1 各組小鼠體重變化圖

注：A.雌性小鼠攝食量變化；B.雄性小鼠攝食量變化。圖2 各組小鼠攝食量變化圖

2.3胃腸運動功能的測定 與正常組比較，給予左旋精氨酸注射液造模后，模型組小鼠胃內殘留率明顯增加，推進率明顯降低；與模型組相比，艽龍膠囊中、高劑量組胃內殘留率明顯降低，小腸推進率明顯增加。見表1。

表1 各組小鼠胃內碳末混懸糊胃內殘留率及小腸推進率比較

2.4血漿生化水平 與正常組比較，給予左旋精氨酸注射液造模后，模型組小鼠血漿中MTL含量明顯降低，NO含量明顯升高；與模型組相比，艽龍膠囊中高劑量組均可明顯升高小鼠血漿中MTL含量和降低小鼠血漿中NO含量。見表2。

表2 各組小鼠血漿中MTL和NO含量比較

3 討 論

FD是臨床常見病和多發病，50%以上的FD患者存在胃固體排空延緩，近端胃及胃竇運動異常，幽門十二指腸運動協調失常等胃腸動力障礙的表現[5]。胃腸動力障礙受胃腸激素(如MTL)、NO及某些藥物等多種因素的影響[6]。MTL、NO等神經遞質的釋放，對胃腸運動起興奮或抑制作用，如果這些遞質的分泌比例失調，勢必導致胃的運動功能障礙[7]。MTL是由胃黏膜內分泌細胞分泌[8]，同時存在于中樞神經系統和消化系統的一種活性肽類激素，又稱為“腦腸肽”，是調控胃腸運動的重要激素[9]。MTL可以使胃體、胃竇和幽門不同部位的肌細胞強烈收縮，并能誘發胃和小腸的移行性運動復合波MMCⅢ相，導致胃產生明顯的收縮運動和小腸明顯的分節運動，對胃排空有一定的促進作用。MTL的釋放量與胃活動有著密切的關系，MTL釋放減少時，胃蠕動減慢；MTL釋放增加時，胃蠕動加快[10]。NO為胃腸道非腎上腺能非膽堿(NANC)能神經的主要抑制性遞質之一[11]。NO是由左旋精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)作用下產生，NOS催化左旋精氨酸轉化為瓜氨酸和NO，可調節胃腸運動[1]。有研究[6-7]證明，NO在胃底基礎張力、食物進入胃生理性擴張及腸蠕動的生理性下行性抑制作用等方面均有參與，NO通過介導平滑肌來保護胃腸道黏膜的功能：NO增多，平滑肌松弛，抑制胃蠕動，從而產生動力障礙；NO減少，平滑肌收縮，增加胃蠕動，減緩消化不良的癥狀，并可以同時調節胃腸道的分泌功能。本實驗結果顯示，艽龍膠囊不僅使胃腸功能障礙小鼠的攝食量增加，胃內殘留率明顯降低，小腸推進率明顯增加，還明顯升高小鼠血漿中MTL含量和降低小鼠血漿中NO含量，表明艽龍膠囊具有明顯促胃腸排空作用并改善胃腸動力功能。

艽龍膠囊是臨床處方藥，用于FD屬肝胃郁熱證者，癥見胃脘飽脹、脘部燒灼、口干口苦，臨床常用日劑量為0.48 g，分3次口服。有研究[12]顯示，艽龍膠囊在2290例的臨床試驗中，發生的不良反應輕，均為不常見或罕見，主要表現為輕微的消化道自覺癥狀，未發生嚴重的不良事件，安全性評價良好。本實驗主要是探究艽龍膠囊治療功能性消化不良的機制，發掘其新的臨床適應癥。此外，本實驗劑量設置是依據臨床劑人用劑量，即：60 kg成人為0.48 g/d，約8 mg/kg， 以人與動物體表面積換算，小鼠劑量約為60 mg/kg，取其為中劑量，分別設計小劑量30 mg/kg和大劑量120 mg/kg。在本實驗中，連續給予小鼠灌胃艽龍膠囊，三個劑量組均未出現死亡小鼠，其體質量、攝食量等與正常組比較無差異，一定程度上反應其毒副作用小或無。為進一步明確實驗中使用劑量是否有毒副作用，我們將在后續研究中闡明。