宮頸癌患者放療敏感性與癌組織中HPV16-E6、p53 mRNA表達的關系分析

喬炳禮 兌偉華 王钖 唐亞輝

作者單位：1 鄭州市第三人民醫院腫瘤科，河南 鄭州 450000

2 鄭州黃河科技學院，河南 鄭州 450000

宮頸癌發病率在女性惡性腫瘤中排第二位，而在某些發展中國家其死亡率位于首位[1]。近些年的研究顯示[2]，我國宮頸癌發病率逐年增高，其原因可能與人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染率增高及國家對宮頸癌篩查工作的大力投入，導致部分隱形宮頸癌患者得以確診等有關。放療是宮頸癌主要治療方法之一，但不同個體對放療敏感度不同[3]。因此，評估患者個體的放療敏感度，并以此設計個性化的放療方案對提高放療療效具有重要意義。HPV感染是宮頸癌發生、發展的重要危險因素[4]，HPV 16-E6、p53 mRNA 則是一組與宮頸癌發生、發展密切相關的癌/抑癌基因，但關于該組基因對患者化療療效的影響，臨床研究較少。本研究探討宮頸癌組織中人乳頭狀瘤病毒（HPV）16-E6、p53 mRNA 表達及與放療敏感性的關系，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2018年1月～2020年1月在我院治療的宮頸癌患者76 例，年齡45～62 歲。納入標準：①均經病理學確診為宮頸鱗癌；②符合國際婦產科聯盟（FIGO）分期中的Ⅰ～Ⅱ期；③患者及家屬知情同意。排除標準：①非初治患者；②合并有肝腎功能障礙、急慢性感染、血液系統疾病等其他嚴重疾病者。

1.2 放療方法根治性放射治療方案：照射射線為直線加速器6/10 MV X 射線，選用X 線模擬定位，給予患者進行體外三維適形照射，每次劑量為2Gy，每周5 次，總劑量為30Gy。同時給予患者后裝腔內照射，每次劑量為6Gy，每周1 次，總劑量為30～42Gy。后裝放療時間需與三維適形放療錯開，不可于同一天進行[5]。

1.3 檢測方法根據患者放療療效分為放療敏感及放療抗拒兩組，并于放療前后活檢取樣，選用Trizol法提取RNA，取1μg RNA 進行反轉錄反應，將獲取的DNA 作為RT-PCR 樣本。PubMed.SNP 數據庫查詢HPV16-E6、p53 基因序列，引物由上海生工提供，PCR 反應體系為：2μl 樣本，1μl 上、下游引物，10μl PCR-mix，8μl 滅菌雙蒸水。反應條件設置如下：95 ℃，8min；94 ℃，40s；63 ℃，38s；72 ℃，40s，共32 個循環，選用蘇州雅睿生物技術有限公司生產的MA-6000 實時熒光定量PCR 儀讀取結果。

1.4 療效標準完全緩解（CR）：病灶消失，至少維持4 周及以上；部分緩解（PR）：病灶體積較治療前縮小＞50%，至少維持4 周及以上；疾病穩定（SD）：病灶體積較治療前縮小≤50%，或增加＜25%；疾病進展（PD）：病灶體積較治療前≥25%或出現新病灶。其中放療敏感為CR+PR，放療抗拒為SD+PD。

1.5 統計學方法采用SPSS 22.0 軟件，計量資料采用±s表示，兩組間比較使用t檢驗，計數資料比較使用χ2檢驗，采用Pearson 進行相關性分析。檢驗水準：雙側α=0.05。

2 結果

2.1 放療療效76 例患者中，放療療效達到CR 10例，PR 45 例，SD 14 例，PD 7 例，放療敏感率為72.37%；放療敏感和抗拒者年齡等一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 放療敏感和抗拒者一般資料比較

2.2 放療敏感和抗拒者放療前后HPV16-E6、p53 mRNA 表達比較放療敏感和抗拒者放療后HPV16-E6 mRNA 相對表達量較放療前降低（P＜0.05），而p53 mRNA 相對表達量較放療前升高（P＜0.05）；放療敏感者放療后HPV16-E6 mRNA相對表達量明顯低于放療抗拒者（P＜0.05），而p53 mRNA 相對表達量明顯高于放療抗拒者（P＜0.05）。見表2。

表2 放療敏感和抗拒者放療前后HPV16-E6、p53 mRNA表達比較

2.3 相關性分析將患者HPV16-E6 與p53 mRNA相對表達量進行相關性分析，結果顯示：放療前、放療后HPV16-E6 與p53 mRNA 相對表達量呈負相關（r=-0.530 和-0.754，P＜0.05）。見圖1。

3 討論

放療是一種借助放射能量破壞細胞DNA 雙鏈，進而殺傷癌細胞的治療技術[5]。本研究76 例宮頸癌患者中，放療療效達到完全緩解（CR）10 例，部分緩解（PR）45 例，疾病穩定（SD）14 例，疾病進展（PD）7 例，放療敏感率為72.37%，與同類研究[6]結果相似，提示放療是一種有效的宮頸癌治療方法。宮頸癌患者放療敏感性受病理分型、病灶體積及位置、放療方案以及HPV 病毒水平等因素影響，為探討HPV 病毒相關mRNA 對宮頸癌放療敏感性的影響，我們進行了本次研究。

HPV 屬于雙鏈嗜上皮性DNA 病毒，可通過整合宿主基因并破壞E2 病毒基因及對應染色體位點，進而導致細胞增殖失控，最終發生惡性病變[7]。HPV 具有多種分型，其中HPV16、HPV18 等高危型是宮頸癌的獨立危險因素[8]。HPV16、HPV18 具有抑制抑癌基因表達、促進增殖基因表達、增強細胞惡性生物學行為等功能[9]。臨床研究顯示[10]，HPV16-E6 是宮頸癌發生、發展的重要介質，E6 轉化基因及其功能是HPV16 誘導宮頸癌的關鍵。E6蛋白具有促端粒酶逆轉錄酶轉錄能力，并以此維護、修復染色體端粒末端重復DNA，進而促進細胞的不斷增殖[11]。HPV感染所引發的鱗狀上皮病變組織內可見明顯E6 蛋白高表達情況，而應用RNA干擾技術抑制沉默HPV16-E6 后，組織樣本內的HPV16 DNA 表達水平顯著下降，其復制功能也隨之降低，癌細胞生長、增殖速度下降[12]。有研究發現[13]，HPV16-E6 蛋白高表達，而p53 蛋白低表達是口腔癌進展的重要原因。p53 是抑癌基因的一種，該基因的突變是多種惡性腫瘤疾病的危險因素。HPV16-E6 蛋白與野生p53 蛋白結合后，p53 蛋白結構及其功能將隨之改變，p53 蛋白對細胞G1 期的阻滯功能將大幅衰退，細胞將快速進入S 期，進而出現增殖失控情況，最終參與腫瘤發生、發展[14]。本研究中，放療敏感者放療后HPV16-E6 mRNA 相對表達量明顯低于放療抗拒者，而p53 mRNA 相對表達量明顯高于放療抗拒者，表明HPV16-E6、p53 mRNA 異常表達與宮頸癌患者放療敏感度密切相關，分析其原因可能為：不同細胞具有的DNA 修復能力不同，細胞放療后的DNA 修復能力直接影響著患者的放療療效[15]。野生型p53 蛋白具有促細胞凋亡能力，而一旦p53 mRNA 突變，其蛋白的促細胞凋亡功能將減弱，細胞的DNA 修復能力將異常化，放療敏感性也隨之降低。HPV16-E6 mRNA 可與突變p53 基因相互結合，并在突變p53 基因生成對應功能前將其滅活，避免突變p53 基因誘導細胞惡性病變。有研究發現[16]，p53 基因高表達可增強宮頸癌患者放療敏感性，這與本研究結果相似。本研究還發現，放療前、放療后HPV16-E6 與p53 mRNA 相對表達量呈負相關，分析其原因可能為：HPV16-E6蛋白可通過結合p53 蛋白來影響其功能，導致p53蛋白失去對細胞周期的調控能力，促使細胞異常復制，進而導致細胞惡性增殖能力增強，并降低細胞對放療的敏感性。

本研究發現，HPV16-E6、p53 mRNA 表達不僅與宮頸癌發生、發展有關，還與患者放療敏感性有關。臨床可在放療之前對患者HPV16-E6、p53 mRNA 表達水平進行檢查，并根據患者HPV16-E6、p53 mRNA 表達水平選擇合理的放療方案及放療劑量，確保放療的有效性。此外，臨床還可靶向干預HPV16-E6、p53 基因的表達，以此增強患者的放療敏感性。受限于基礎條件，本研究還存在樣本量較小等不足，有待后期進行大數據分析。

綜上所述，宮頸癌組織中HPV16-E6、p53 mRNA表達與患者放療敏感有關，值得進一步研究。