新疆石河子地區部分規模化豬場高致病性豬藍耳病的病原學監測與分析

盧博敏， 云曉宇， 陳星宇， 楊靖宇， 陳鳳， 柳旭偉*

(1.新疆農業職業技術學院 動物科技分院，新疆 昌吉 831100； 2.新疆天康畜牧科技有限公司，新疆 昌吉 831100)

高致病性豬藍耳病是一種病毒性傳染病，由豬的繁殖與呼吸系統結合病毒引起，在國內外豬藍耳病都以其極大的危害性威脅著養豬業的發展[1]。豬藍耳病以高致病性和傳染性使豬群引發繁殖及呼吸障礙綜合征和腹瀉癥狀，使豬群出現較高的死亡率[2]。并且豬藍耳病屬于免疫抑制性疫病，其病毒通過抑制豬的體液免疫和細胞免疫致使豬的免疫力下降，從而引發多種其他疫病引發的并發癥[3]。為了促進石河子地區養豬業的發展，提高規模化養豬的經濟效益。作者于2020年7—12月對石河子周邊地區5個團場12個規模化豬場進行高致病性豬藍耳病的病原學監測，以期為科學防控高致病性豬藍耳病奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源

樣品來自2020年7—12月石河子地區5個監測團場共12個規模豬場。其中，A團5個豬場，包括132份血清樣、107份睪丸樣、32份組織樣，共計271份樣；B團3個豬場，包括112份血清樣、98份睪丸樣、22份組織樣，共計232份樣；C團2個豬場，包括72份血清樣、67份睪丸樣、13份組織樣，共計152份樣；D團1個豬場，包括43份血清樣、43份睪丸樣、7份組織樣，共計93份樣；E團1個豬場，包括46份血清樣、36份睪丸樣、7份組織樣，共計89份樣。

1.1.2 試劑與儀器

核酸提取試劑(上海之江生物科技有限公司)、異丙醇(分析純)、實時熒光RT-PCR檢測試劑盒(哈爾濱元亨生物藥業有限公司)、無水乙醇(分析純)、豬繁殖與呼吸綜合征(類NADC-30毒株)。

高壓蒸汽滅菌鍋(LS-50H D型)，超凈工作臺(BBS-SDC型)，高速離心機(Sorvall Legend Micro 17型)，核酸提取機(EX3600型)，實時熒光定量PCR分析儀(MICPOCDX48型)，移液器(LE196AL0440445型)。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集和處理

無菌條件下采集肺、睪丸液、肝、扁桃體、心、脾、腎等病變器官及血清等，將病樣研磨處理，使用消毒后的器械取心肝脾肺腎各5 g，置于研磨器玻璃管中(一豬一離心管一套處理器械)，加入0.5 mL生理鹽水反復擠壓研磨3 min，取1 mL研磨液置于離心管中備用。將處理后的樣本于12 000 r·min-1離心10 min，提取上清液備用。

1.2.2 提取病毒DNA

取200 μL的病樣上清液，通過核酸提取試劑(上海之江生物科技有限公司)的提取說明書進行核酸提取，獲得病毒DNA。

1.2.3 PCR檢測

設被檢樣品、陰性對照和陽性對照的總和為X，則反應體系：無菌無核酸酶水7.0(X+1)μL，RT-PCR反應液12.5(X+1)μL，酶混合液1.0(X+1)μL，熒光探針2.5(X+1)μL。

按照實時熒光RT-PCR檢測試劑盒(哈爾濱元亨生物藥業有限公司)說明書配制體系，分別加入2 μL DNA模板和2 μL陰陽性對照標準品。在熒光PCR儀上進行以下反應：42 ℃ 5 min，95 ℃ 10 s；循環95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，共40次，在每次循環第二步(60 ℃ 35 s)收集熒光信號。

2 結果與分析

2.1 不同生產階段病原監測

表1顯示，在監測的12個豬場為期半年的840份送檢樣品中，高致病性藍耳病樣品96份，病原監測陽性率平均為11.42%。其中，病原監測陽性率最高的為5～9周齡的保育豬，為12.35%；病原監測陽性率最低的為1～4周齡的仔豬，僅為8.33%，其余日齡豬的病原監測陽性率均≥10%。

表1 不同生產階段的病原監測結果

2.2 不同團場病原監測

表2顯示，在監測的5個團場規模豬場半年內送檢的840份樣品中，5個團場的平均陽性監測率≥10%。其中，高致病性豬藍耳病陽性率最高為C團，達13.55%；陽性率最低為E團，為10.11%。

表2 不同團場的病原監測結果

2.3 各監測團場每月病原監測對比

監測的5個團場規模豬場半年內送檢結果為陽性的96份樣品中，分別有A團場29份、B團場27份、C團場21份、D團場10份、E團場9份。圖1顯示，5個團場監測出陽性的數量在8—10月基本都有上升的趨勢，A、B、E團場有較為明顯的上升曲線，其中以A團場最具代表性。除D團場以外，其他團場的陽性檢出均在10月達到峰值。在10—12月，檢測出陽性數量均呈下降趨勢，其中A、B、E團場下降趨勢較為明顯，C、D團場下降雖不明顯，但總體來看檢出陽性量呈下降趨勢。

圖1 不同團場每月高致病性豬藍耳病病原監測結果

3 討論與分析

3.1 不同生產階段病原監測結果分析

從不同生產階段病原監測結果來看，陽性率均低于13.00%，在10.00%上下波動，平均值為11.42%，大大低于肖盛中等[4]報道的新疆北疆地區豬場高致病豬藍耳病毒79.01%的陽性率，高于彭曉玲等[5]報道的新疆地區生豬高致病性豬藍耳病的6.4%的陽性率。從監測結果以及石河子市高致病性豬藍耳病疫情發生的動態情況來看，各團場豬場未出現高致病性豬藍耳病的暴發，這可能與石河子市規模化豬場的科學養殖技術水平較高，有著較為完善、成熟的疫病防控系統及應急處置措施等有關。同時，石河子市規模化豬場主要是新疆的上市企業進行生產，各監測的規模化豬場均有自己較為完善的產業鏈，保證了飼料、藥品、器械及豬只的流通等各環節的供應安全，未攜帶病毒。

從監測結果來看，1～4周齡的仔豬的陽性率最低，這可能與這一階段較高的母源抗體水平有關。同時，還可能與其環境溫度、濕度較穩定，不隨外界溫度變化出現較明顯波動，以及接種疫苗的頻率和飼養管理等有關[6]。調查發現，各監測豬場使用的系統化標準手冊中關于初生仔豬更為規范詳盡。由此可見，要盡可能的控制一切人為因素，形成理論系統的養殖指導標準，對于每一階段的豬只都要形成系統標準的飼養體系。做到“一豬一策，一場一標準”的因地制宜、因豬防控，降低患病率及陽性檢出率。相比規模化養殖，小型經營管理的散養農戶應該更加重視這一問題，集力群策共同防控[7]。

3.2 不同團場病原監測結果分析

不同團場的樣品檢測陽性率均不相同。除C團場外，其他團場基本控制在11.00%左右，未出現大規模暴發較為穩定，稍高于張建新等[8]報道的全國高致病性豬藍耳病10.00%的陽性率，這可能與石河子地區地處新疆北部，氣候干燥，一年內溫度變化較極端，造成病原易在空氣中傳播有關。但C團場檢出陽性率較高，根據訪問與調查發現，C團場在2020年下半年從其他地方引進1批種豬，而其他團場的豬場未引進其他豬只，且在7月中旬對C團場送檢的樣品中，有1輛外省牌號運豬車輛檢測為弱陽性，但同時間段引進豬只并未檢測出陽性。因此，C團場豬藍耳病檢出陽性率較高，可能是因為引進豬群的運輸車輛攜帶病毒進入該豬場，因未消殺干凈而感染了易感豬群，或者引進豬群時豬的應激反應使免疫力下降，易被病豬感染。因此，需要做好隔離防控，堅持自繁自養原則不輕易引種[9]。如果必須進行引種，則須調查清楚所要引進豬場的疫情，之外還要進行血清學檢測，非陽性豬可引進。引進豬群后還應建立合適的隔離區，以方便做好監測，正常需要4～5周時間隔離檢疫，健康者方可混群飼養[10]。

3.3 不同監測月份病原監測結果分析

各團豬場送檢量與陽性檢出量具有一定的時間性，在9—10月時都較高，出現異常的病豬增加，檢測出患攜有高致病性豬藍耳病的豬只也有所增加，且在9—10月數量都偏大。但全國范圍來看，尤其對比南方某些地區規模化養豬場并未出現豬藍耳病陽性明顯的季節變化[11]。根據豬藍耳病毒的傳染途徑發現，病毒的傳播與風向、風速及溫度濕度有著密不可分的關系。根據新疆地區氣溫的變化可以大概推斷出，該病適宜的溫度是20～35 ℃，當超過35 ℃以上，濕度低，紫外線強，在空氣中就沒有了傳播能力。在進入11月以后，新疆石河子地區氣溫迅速下降，空氣濕度低，病毒的活性降低，且基于9、10月陽性率升高，人為進行緊急干預調整，病毒的傳播途徑被切斷，12月時藍耳病原檢出陽性率降低[12]。

4 小結

將各監測豬場送檢的病料，運用實驗室檢查、熒光定量PCR進行診斷，確定其為高致病性豬藍耳病病毒感染，確診之后對不同個體的疾病進行專項分析，并制定相應的防控措施。新疆石河子地區未出現大規模的高致病性豬藍耳病疫情，但受監測的豬場不同程度因為某些原因出現了高致病性禽流感的感染。在制定措施時需要根據各規模化豬場內的具體情況，關注重點突出情況，根據當地氣候條件及豬只生長最適條件有所側重，藥物預防需要根據場內豬只的藥敏程度對癥下藥[13]。

對豬場使用PCR技術進行病原性監測是當今比較流行的分子檢測技術，在各領域都進行了廣泛的應用，高致病性豬藍耳病病毒對規模豬場養殖危害極大。從利用病原學為期半年的集中監測來看，共監測的規模化豬場12個，監測樣品數840份，從2020年下半年所監測點的高致病性豬藍耳病陽性率來看，監測點平均病原陽性檢出率為11.42%，月均最高為10月，檢出率為14.88%，監測點陽性檢出率最高為13.55%。高致病性豬藍耳病的發病率高于秋季溫度，為20～35 ℃時，但其他季節也存在陽性感染。高致病性豬藍耳病病毒感染率高，難以根除，不容忽視。