原子吸收分光光度法測(cè)定注射用鹽酸頭孢替安中碳酸鈉含量

李何杏 彭潔 洪建文

(廣東省藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品快速檢驗(yàn)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510663)

鹽酸頭孢替安為第二代頭孢菌素類抗生素，通過(guò)阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁的合成而產(chǎn)生抗菌作用，近年來(lái)成為醫(yī)院常用的β-內(nèi)酰胺類抗生素之一[1]，其制劑為注射用鹽酸頭孢替安。該制劑有兩種原研品的處方，處方1為鹽酸頭孢替安-無(wú)水碳酸鈉(83:17)，原研廠家是日本富山化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社；處方2為鹽酸頭孢替安-無(wú)水碳酸鈉-精氨酸(66:5:29)，原研廠家日本武田藥品株式會(huì)社。鹽酸頭孢替安pH值為1.2～1.7，而注射劑pH要求與血液相等或相近，一般控制pH值在4～9范圍內(nèi)，制劑中加入堿性附加劑無(wú)水碳酸鈉或(和)精氨酸主要用以調(diào)節(jié)注射劑的pH值。本實(shí)驗(yàn)室在2018年注射用鹽酸頭孢替安國(guó)家評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)的探索性研究中發(fā)現(xiàn)多批次樣品碳酸鈉含量不符合規(guī)定，抽驗(yàn)結(jié)果也提示注射用鹽酸頭孢替安碳酸鈉含量的控制與溶液澄清度、制劑穩(wěn)定性及不良反應(yīng)相關(guān)[2]，為控制藥品質(zhì)量，保證用藥安全有效，應(yīng)采用相應(yīng)的方法測(cè)定注射用鹽酸頭孢替安中碳酸鈉的含量，但是注射用鹽酸頭孢替安現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)均為局頒標(biāo)準(zhǔn)或進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)[2]，碳酸鈉測(cè)定方法不統(tǒng)一，有電位滴定法、原子吸收分光光度單點(diǎn)法及原子吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線法，甚至個(gè)別廠家未對(duì)碳酸鈉進(jìn)行控制。為了更好地對(duì)注射用鹽酸頭孢替安中的碳酸鈉含量進(jìn)行控制，本實(shí)驗(yàn)采用原子吸收分光光度法，優(yōu)化建立了可同時(shí)適合兩種不同處方的碳酸鈉含量的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

原子吸收分光光度計(jì)(VARIAN AA240FS+Z；ThermoFisheriCE3500)；BP211D電子天平。

1.2 試劑與試藥

基準(zhǔn)氯化鈉(天津市天新精細(xì)化工開(kāi)發(fā)中心，20180305)、氯化鉀(分析純)、氯化銫(分析純)、硝酸(分析純)、純化水。

1.3 供試品

根據(jù)2018年國(guó)家評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)情況及市面生產(chǎn)使用的情況，征集到包含兩種處方的6個(gè)主流企業(yè)的供試品，見(jiàn)表1。

表1 供試品信息Tab.1 Test product information

2 方法

2.1 試驗(yàn)條件的優(yōu)化

本品現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)多采用原子吸收分光光度法測(cè)定碳酸鈉含量。測(cè)定方法中電離抑制劑的種類和硝酸的加入量不一致，電離抑制劑有氯化鉀和氯化銫，硝酸的加入量也不盡相同，甚至有些標(biāo)準(zhǔn)中未加入硝酸。考慮電離抑制劑是為了在同一條件下加入比待測(cè)離子(鈉離子)更易電離的金屬離子來(lái)降低干擾，在堿金屬元素中，銫元素的電離電位(3.95 eV)與鉀元素的電離電位(4.316 eV)均比鈉元素的電離電位(5.12 eV)低，當(dāng)三者共存時(shí)，銫與鉀先電離，使電離平衡向基態(tài)原子方向移動(dòng)，從而抑制鈉的電離。同時(shí)，本品pH值偏中性，加入硝酸，保證在酸性的測(cè)定環(huán)境，更有利于金屬元素溶出。為篩選合適的電離抑制劑及確定硝酸的加入量，統(tǒng)一本品碳酸鈉測(cè)定的方法，取供試品各6份，照表2設(shè)計(jì)4種試驗(yàn)方案，考察測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性。結(jié)果顯示，加入氯化鉀的供試品測(cè)定結(jié)果更穩(wěn)定，且氯化鉀比氯化銫更容易獲得，因此選擇氯化鉀作為電離抑制劑。硝酸的加入量中，1 mL硝酸已能滿足結(jié)果測(cè)定的要求，因此，確定試驗(yàn)條件按方案一(電離抑制劑為氯化鉀及硝酸加入量為1 mL)進(jìn)行。

表2 供試品溶液配制方案Tab.2 Test solution preparation plan

2.2 實(shí)驗(yàn)條件

光源：鈉空心陰極燈；原子化器：空氣-乙炔火焰原子化器；分析線：330.3 nm。

2.3 溶液制備

2.3.1 氯化鉀溶液

稱取氯化鉀19.07 g，加水溶解并稀釋至1000 mL。

2.3.2 對(duì)照品溶液

精密稱取經(jīng)110℃干燥2 h的氯化鈉對(duì)照品適量，加水溶解并定量稀釋成每1 mL中約含2.5 mg的溶液。精密量取氯化鈉溶液1、3、5、7和10 mL，分別置100 mL量瓶中，加硝酸1 mL和氯化鉀溶液10 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(1)、(2)、(3)、(4)和(5)。

2.3.3 供試品溶液

精密稱取本品適量(約相當(dāng)于含碳酸鈉60 mg)，置100 mL量瓶中，加適量水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶，加硝酸0.5 mL和氯化鉀溶液5 mL，用水稀釋至刻度，搖勻。

2.3.4 空白溶液

取硝酸1 mL和氯化鉀溶液10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

按“2.3.2”項(xiàng)下制備，進(jìn)樣分析，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列鈉離子的吸光度，以鈉離子濃度為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)作圖，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0038x+0.0093，相關(guān)系數(shù)r為0.9996。

2.4.2 重復(fù)性

取兩種處方供試品(處方1批號(hào)：1910214和處方2批號(hào)：19123201)各6份，照“2.3.3”項(xiàng)下制備，進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示處方1供試品(批號(hào)1910214)的平均含量為16.9%，RSD為1.2%(n=6)；處方2供試品(批號(hào)19123201)的平均含量為4.6%，RSD為2.1%(n=6)。該方法在兩種處方中的重復(fù)性均良好。

2.4.3 回收率

根據(jù)注射用鹽酸頭孢替安處方中碳酸鈉含量，用企業(yè)D提供的原料(批號(hào)：1912111)和相關(guān)輔料無(wú)水碳酸鈉、精氨酸按照處方的比例混合，每種處方各6份，照“2.3.3”項(xiàng)下制備，進(jìn)樣分析，處方1平均回收率為98.7%，RSD為0.5%(n=6)；處方2平均回收率為98.3%，RSD為0.8%(n=6)。該方法在兩種處方中的回收率均良好。

2.4.4 中間精密度

使用兩種不同儀器(VARIAN/AA240FS+Z和ThermoFisher/iCE3500)，取不同廠家供試品，照“2.3.3”項(xiàng)下制備，進(jìn)樣分析，兩臺(tái)儀器結(jié)果無(wú)明顯差異，結(jié)果見(jiàn)表3。該方法在兩種處方中的精密度均良好。

表3 中間精密度Tab.3 Intermediate precision

2.4.5 空白干擾實(shí)驗(yàn)

(1)稱取鹽酸頭孢替安原料藥，按照處方1比例，照“2.3.3”項(xiàng)下制備，進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示基本無(wú)吸收，與空白溶液測(cè)定值基本相同。

(2)稱取鹽酸頭孢替安原料藥與精氨酸，按照處方2比例混合，照“2.3.3”項(xiàng)下制備，進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示基本無(wú)吸收，與空白溶液測(cè)定值基本相同。

2.5 樣品測(cè)定

采用擬定的方法對(duì)6個(gè)廠家供試品進(jìn)行碳酸鈉的測(cè)定，并將結(jié)果與按法定質(zhì)量檢驗(yàn)方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果顯示本方法測(cè)定結(jié)果與法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定結(jié)果基本一致，見(jiàn)表4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，E企業(yè)產(chǎn)品中的碳酸鈉含量偏低，超出處方比例范圍(15.8%～19.2%)，其法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)產(chǎn)品中的碳酸鈉含量進(jìn)行控制。

表4 碳酸鈉測(cè)定結(jié)果Tab.4 Sodium carbonate measurement result

3 討論

本文系統(tǒng)地優(yōu)化并建立了適合兩種不同處方的注射用鹽酸頭孢替安中碳酸鈉含量測(cè)定方法，該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便，易于推廣。方法應(yīng)用于實(shí)際樣品檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，有企業(yè)產(chǎn)品存在碳酸鈉含量超出處方比例控制范圍的情況，亟須加強(qiáng)控制，保證藥品質(zhì)量。

注射用鹽酸頭孢替安現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)碳酸鈉的測(cè)定方法不統(tǒng)一，有電位滴定法和原子吸收分光光度法。電位滴定法不普及，需使用對(duì)溫度敏感、平衡時(shí)間較長(zhǎng)鈉離子電極；原子吸收分光光度法多采用589.0 nm作為分析線，研究發(fā)現(xiàn)，由于鈉原子在自然界中非常活潑[3]，當(dāng)波長(zhǎng)為589.0 nm時(shí)，檢測(cè)靈敏度過(guò)高，在火焰中電離而引起的干擾較大，影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。注射用鹽酸頭孢替安中碳酸鈉含量分別為17.5%和4.7%，含量相對(duì)較高，雖然波長(zhǎng)為330.3 nm時(shí)，靈敏度約為589.0 nm的1%，但吸光度值適中，能有效減少實(shí)驗(yàn)干擾，同時(shí)減少實(shí)驗(yàn)操作步驟，降低實(shí)驗(yàn)誤差，完全可滿足檢測(cè)分析要求。