基于RhoA/ROCK信號(hào)通路探討四逆湯對(duì)心肌缺血再灌注氧化損傷作用機(jī)制

張?jiān)撇ǎ櫳昙t，陳菊明，吳華珺

(海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科，海南 海口 570102)

急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)是目前全球發(fā)病率較高的心血管疾病之一。隨著血管再通技術(shù)的不斷發(fā)展和普及，AMI整體預(yù)后情況較以往得到明顯改善，但心肌再灌注損傷(Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)加重了心肌組織損傷，是AMI死亡的重要原因[1-3]。減輕MIRI、有效保護(hù)心肌細(xì)胞是目前AMI治療的重點(diǎn)。四逆湯是我國(guó)經(jīng)典中藥方，具有溫中祛寒、回陽(yáng)救逆的功效。劉耀武[4]研究發(fā)現(xiàn)，四逆湯聯(lián)合尿激酶溶栓能有效減輕AMI患者心肌缺血再灌注損傷，且安全性較好。尹翠翠等[5]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，四逆湯能有效清除自由基，減輕缺血對(duì)心肌組織造成的損傷。以上研究均證實(shí)，四逆湯能減輕缺血以及MIRI對(duì)心肌細(xì)胞造成的損傷，發(fā)揮心肌保護(hù)作用。本研究意在驗(yàn)證四逆湯是否通過(guò)抑制人RAS同源基因家族成員A(Ras homolog gene family member，ARhoA)/Rho激酶(Rho-associated protein kinase,ROCK)信號(hào)通路，調(diào)控細(xì)胞凋亡，減輕心肌組織損傷。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：60只SPF級(jí)健康雄性清潔級(jí)大鼠購(gòu)自江蘇艾菱菲生物科技有限公司，平均體重(250±10)g，飼養(yǎng)于獨(dú)立通風(fēng)系統(tǒng)內(nèi)，平均溫度(22±2)℃，濕度40%～70%，光照節(jié)律12L/12D。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑：RhoA一抗、ROCK1一抗、ROCK2一抗均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司(批號(hào)bs-1180R、SC-5560、BA0610)，髓過(guò)氧化物酶(Myelopexoxidase,MPO)、超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所(批號(hào)20161224、20161217、20160607)，臺(tái)盼藍(lán)劑購(gòu)自長(zhǎng)沙裕豐化玻器械公司(批號(hào)20190715)，BCA蛋白濃度檢測(cè)試劑盒、SDS-PAGE凝膠配制試劑盒均購(gòu)自碧云天生物試劑公司(批號(hào)20180607、20180524)，Tris購(gòu)自北京Topbio公司(批號(hào)20170513)，鼠單克隆抗體β-Actin、兔抗鼠Bcl-2、兔抗鼠Bax均購(gòu)自Santa Cruz公司(批號(hào)20180709、20181213、20191116)，氟伐他汀膠囊購(gòu)自瀚暉制藥公司(國(guó)藥準(zhǔn)字H20070167)。……