利伐沙班片經鼻胃管給藥方式的體外試驗研究

唐 謙，郭艷超，周 璐，馬雯霞

1 浙江省藥品化妝品審評中心，杭州 310012；2 杭州朱養心藥業有限公司，杭州 310018

口服固體仿制藥一致性評價旨在仿制藥的研究過程中，力求在質量和療效上與參比制劑一致性，是一系統評價工程，其內容包含體外藥學研究、體內生物等效性研究。對于臨床吞咽困難的患者，采用鼻飼管給藥可以解決口服給藥存在的缺陷和困難，此類藥物在體外藥學研究中，除了常規的溶出曲線對比，還應進行仿制藥與參比制劑在經鼻飼管給藥時、各物理指標的一致性，確保仿制藥質量與參比制劑相同。

利伐沙班片在“用法用量”項下標明對于不能吞咽的患者可將藥品分散于水中，通過鼻管或胃管給藥。借鑒2020 年8 月美國FDA 發布的個藥指南《Draft Guidance on Rivaroxaban》[1]，提出了本品除體內生物等效性試驗外，還包括體外鼻胃管給藥的試驗研究。本實驗參考了相關文獻[2]，結合藥物特性，開發鼻飼管給藥體外研究方法，分別開展了沉降試驗、粒徑分析試驗和回收試驗等，經對比研究，在模擬鼻飼管給藥的情況下，所選研究指標穩定，藥物損耗可控，自制制劑與參比制劑均一致。本研究除了證明本公司自制品與參比制劑在特殊給藥方式下、具有相同的體外給藥效果，還給予同樣給藥方式的其他藥物體外研究提供了參考。

1 儀器與藥材

儀器：高效液相色譜儀Agilent1260；馬爾文激光粒度儀Mastersizer 3000；電子天平XSE205。

藥材：16 Fr（Fr 為管徑單位French 的簡稱，1French=0.33 mm）規格的鼻胃管，灌注器；利伐沙班片自制品（批號：180601，含量103.5%，杭州朱養心藥業有限公司）；參比制劑（批號：BJ50488，含量100.9%，拜耳醫藥保健有限公司）；利伐沙班對照品（批號：20200310，含量：100.0%，浙江省食品藥品檢驗研究院標化）；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 沉降試驗

結合臨床用藥過程的時間，選0 min（代表剛配制完的時間，下同）和15 min 進行對比研究。

取12 片自制品壓碎，倒入60 mL 注射器中，抽取50 mL 純化水，劇烈振搖30 s 后，倒置注射器，靜止15 min。記錄0 min 和15 min 的沉降高度，重復以上操作，平行制備6 份供試品溶液。結果見表1。

從表1 可知，自制制劑與參比制劑的沉降情況無明顯差異。

表1 沉降高度

2.2 粒徑分析試驗

《中國藥典》收載的粒度及粒度分布測定法有3種，分別為顯微鏡法、篩分法、光散射法。其中光散射法更能準確對比自制品和參比制劑的粒度分布情況，結合臨床用藥過程，選擇選0min 和15min 進行對比試驗，兩個時間點配制兩組供試品溶液進行比較。

2.2.1 供試品溶液配制將自制品12 片壓碎成小塊狀，全部投入60 mL 規格的灌注器內；吸取40 mL純化水，上下劇烈振搖30 s，立即將灌注器與16 Fr規格的鼻胃管連接，將顆粒分散液收集到燒杯中；吸取分散介質5 mL，純化水沖洗灌注器和鼻管，沖洗2 次，并收集到同一份燒杯中，即得0 min 供試品混懸液；劇烈振搖灌注器30 s，倒置灌注器15 min后再進行操作，得15 min 供試品混懸液。每個試驗制備6 份樣品，每份樣品測3 次，取平均值。

2.2.2 粒徑檢測方法驗證 樣品折光率1.63，吸收率0.01，轉速1000 r·min-1，遮光率10%～15%，內置超聲關閉，分散介質為純化水。按照“2.2.1”制備6份0 min 供試品溶液進行精密度試驗。結果見表2。

表2 粒徑檢測精密度試驗結果（μm，n=6）

12 份自制品的D50 的RSD%不大于10%，D10、D90 的RSD%不大于15%，中間精密度符合要求。

2.2.3 粒徑分析對比試驗取自制品與參比制劑按照“2.2.1”方法制備0 min 和15 min 樣品進行粒徑檢測，粒徑對比結果見表3。

表3 自制品與參比制劑粒徑測試結果（μm，n=6）

從表3 可知，自制品與參比制劑0 min 與15 min結果均無明顯差異，說明經鼻胃管給藥的粒徑一致。

2.3 回收試驗

利伐沙班屬于難溶性藥物，故在設計回收試驗時，同時對比了直接加水混懸（模擬臨床鼻胃管給藥）和加稀釋劑助溶后自制制劑與參比制劑的回收情況。

2.3.1 檢測方法驗證按照高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Purospher Star RP endcapped，55 mm×4.0 mm，3 μm），乙腈-水（30∶70）為流動相，檢測波長為250 nm，柱溫為40 ℃，進樣量10 μL。對檢測方法進行方法驗證，結果為：濃度在2.03～12.18 μg·mL-1，r 為0.999 9；回收率在99.71%～102.71%，RSD 為1.2%；6 份供試品重復性的RSD 為0.3%，12 份供試品中間精密度的RSD 為0.6%。從驗證結果可知，方法準確可靠。

2.3.2 自制品與參比制劑回收對比試驗精密稱取利伐沙班對照品約10 mg，置20 mL 量瓶中，加稀釋劑（乙腈-0.01 mol·L-1磷酸溶液，3∶2）超聲溶解，冷卻至室溫，稀釋至刻度，搖勻，吸取1 mL 置50 mL量瓶中，加入純化水稀釋至刻度，搖勻即得。

供試品溶液的制備：取自制品1 片壓碎，全部投入60 mL 規格的灌注器內，吸取40 mL 純化水，上下劇烈振搖30 s，立即將灌注器與16 Fr 規格的鼻胃管連接，然后使顆粒分散液經由灌注器和鼻胃管推入50 mL 量瓶內。吸取5 mL 的稀釋劑后輕輕搖晃灌注器，使液體經由鼻飼管推入量瓶，對系統進行沖洗，重復兩次，加入稀釋劑稀釋定容至刻度線。搖勻后過濾，取續濾液即得0 min 供試品溶液；振搖30 s，將灌注器倒置15 min 再行同法操作，即得15 min 供試品溶液。平行制備12 份樣品。計算自制制劑（T）與參比制劑（R）的初始劑量回收率，并報告T/R 回收率比以及T/R 回收率比的可信區間，結果見表4、表5。

由表4、表5 回收試驗結果可知，自制制劑在難溶的情況下（純化水作為溶劑，模擬臨床給藥）和完全溶解情況下（純化水作為溶劑，并加入助溶劑），主成分回收情況均與參比制劑一致。

表4 供試品溶液1（稀釋劑為水）回收試驗結果（%）

表5 供試品溶液2（稀釋劑為乙腈）回收試驗結果（%）

3 討論

本實驗樣品屬于普通口服固體制劑，且無pH依賴性，故在研究過程中未考察不同來源純化水pH 值的影響，如為腸溶制劑可參考相關文獻[2]進行不同類型的水及耐酸性進行對比考察。

在臨床給藥過程中，樣品處于混懸狀態，考察自制品與參比制劑的混懸液的粒度是否一致顯得尤為重要；檢測粒度的方法雖然比較多，但篩分法和顯微鏡法都存在明顯的局限性，而光散射法可以充分對比，說明自制品與參比制劑混懸液狀態是否一致。同時，對于試驗中的難溶類藥物，有必要進行兩種溶劑的回收試驗：一種模擬臨床實際用藥，采用50mL 水作為溶劑，經鼻胃管給藥；另一種以50mL水作為溶劑，經鼻胃管后加助溶劑使藥品主成分完全溶解，這樣可以更充分表明鼻胃管對藥品有無吸附，以及吸附情況是否一致。

本實驗就特殊給藥途徑的藥物作了體外對比研究，包括沉降試驗、粒徑分析試驗及回收試驗，為自制品與參比制劑具有相同的給藥效果提供了數據支持，也希望對同仁提供借鑒。