上皮性卵巢癌組織中XIAP、HIF-1a表達及臨床意義

朱麗娟 王愛華 段曉艷 李 淵

在我國，上皮性卵巢癌發病率非常高，是女性生殖系統腫瘤最常見的卵巢癌類型，其死亡率最高，5年生存率非常低，不足20%[1]。在患病早期，由于其缺乏高特異性的腫瘤標志物和早期診斷的特異性臨床癥狀，故難以發現或診斷。目前，對于該病的發病機制各種理論并不統一，但都認為可以從分子或基因水平研究細胞周期的相關調控機制對惡性腫瘤的發生、發展過程的作用。X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白(X-linked apoptotic suppressor proteins,XIAP)對內源性天冬氨酸蛋白酶具有較強的抑制性，并具有明顯的特征性。文獻[2]提示XIAP可在乳腺癌、甲狀腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤的發生、發展過程發揮作用，并與化療耐藥具有密切關系。相關的研究指出[3]在缺氧的微環境下，惡性腫瘤是通過乏氧誘導因子-1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)來改善腫瘤內細胞代謝的，同時還能夠促進腫瘤內部新的血管的生成，進而對腫瘤的生長具有加速作用，其中HIF-1a是HIF-1最重要的亞型單位之一。本研究探討了上皮性卵巢癌組織中XIAP、HIF-1a表達及臨床意義，旨在為卵巢癌的發生、發展機制提供新的思路，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院在2017年1月至2020年2月期間保存的上皮性卵巢癌標本92例作為研究對象，均經病理學確診且術前未接受過放療、化療等抗腫瘤的治療，所有臨床病理資料保存完整。排除合并有其他系統惡性腫瘤、合并有免疫性疾病、血液系統疾病、急慢性感染者等等。同時選取良性卵巢腫瘤60例(34例黏液性囊腺瘤、26例漿液性囊腺瘤)，正常卵巢44例(因宮頸癌或內膜癌手術切除的，經病理證實為正常卵巢組織)作為對照，各組在一般資料上進行比較，無統計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 各組一般資料比較(例，%)

1.2 實驗方法

本次研究采用免疫組化染色法對XIAP、HIF-1a表達進行檢測，具體操作：將上皮性卵巢癌標本組織用甲醛固定后，采用石蠟包埋，并行常規連續切片后烤片，然后采用二甲苯及梯度乙醇脫蠟至水化并3次PBS沖洗；EDTA修復抗原；3%過氧化氫孵育10 min封閉過氧化物酶， 3次PBS沖洗；滴加山羊血清溫育30 min，分別滴加XIAP、HIF-1a二抗，室溫2 h孵育；PBS沖洗后滴加生物素標記的二抗，溫育30 min，PBS沖洗，DAB溶液顯色；蘇木精復染；封片觀察[4]。

1.3 判斷標準

XIAP在細胞膜、細胞質及細胞核均有表達，表現為淡藍色背景下棕褐色染色團塊或顆粒；HIF-1a主要在細胞膜及細胞質中表達，表現為淡藍色背景下棕褐色染色顆粒或團塊。染色結果評價采用半定量評分，染色范圍為：0分為陽性細胞比例≤5%，1分為陽性細胞比例范圍>5%～25%，2分為陽性細胞比例范圍>25%～50%，3分為陽性細胞比例范圍>50%～75%，4分為陽性細胞比例范圍>75%；染色強度為：0分無著色，1分黃色，2分棕黃色，3分棕褐色。陽性表達為染色范圍和染色強度得分之積≥4分[5]。

1.4 統計學方法

本次研究涉及的數據采用SPSS22.0軟件包進行統計分析，其中計數資料行χ2檢驗，相關性分析采用Spearman秩相關分析，當P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組織XIAP、HIF-1a表達比較

上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a陽性表達率分別為81.52%和68.48%，明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢(P<0.05)；良性卵巢腫瘤和正常卵巢XIAP、HIF-1a陽性表達率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組織XIAP、HIF-1a表達比較(例，%)

2.2 XIAP、HIF-1a表達與上皮性卵巢癌臨床病理關系

FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者XIAP、HIF-1a陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)。見表3。

表3 XIAP、HIF-1a表達與上皮性卵巢癌臨床病理關系(例，%)

2.3 相關性分析

上皮性卵巢癌組織XIAP與HIF-1a表達呈正相關(γs=0.340，P<0.05)，見表4。

表4 相關性分析

3 討論

上皮性卵巢癌是卵巢腫瘤最常見的病理類型，但是在臨床上，早期該病無明顯的臨床表征，很難及時確診，以至有超過80%的患者在被確診時，就已經有腹腔內種植、淋巴轉移或處于中晚期階段了，這也是該病高死亡率的最主要原因[6]。有臨床研究人員發現[7]上皮性卵巢癌可根據患者的分級或分期不同，給予不同的手術方案，由此可見，提高上皮性卵巢癌早期診斷和評估疾病進展準確率對提高治療效果具有非常重要的指導意義。

目前，針對上皮性卵巢癌的診斷臨床上主要有影像學檢查(B超等)聯合血清標志物(CA125等)，但其結果不明顯，特異性較低，無法準確地確定腫瘤的分期。XIAP在惡性腫瘤組織的成人與胎兒的所有組織中均有高表達，與腫瘤的進展、化療耐藥及預后不佳均相關[8]；HIF-1a能夠對細胞凋亡、血管新生及糖酵解進行調控[9]。各組織XIAP、HIF-1a表達比較結果形式上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a陽性表達率分別為81.52%和68.48%，明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢；良性卵巢腫瘤和正常卵巢XIAP、HIF-1a陽性表達率比較差異無統計學意義。上述結果證實上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a存在較高的陽性表達率，XIAP、HIF-1a具有成為診斷上皮性卵巢癌重要指標的潛力。

本研究結果顯示FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者XIAP陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，該結果提示XIAP參與了上皮性卵巢癌的發生與發展過程，XIAP的表達與惡性腫瘤的惡性程度有關。XIAP是IAP家族的重要成員之一，它被認為是家族中功能最強和最具有特征性的Caspase抑制因子，可與凋亡效應因子caspase-3，caspase-7及啟動因子caspase-9結合的凋亡抑制蛋白，進而參與上皮性卵巢癌的發生、發展過程[10-11]。

本研究結果顯示FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者HIF-1a陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，該結果也提示HIF-1a的表達與惡性腫瘤的惡性程度有關，其參與了上皮性卵巢癌的發生、發展過程。HIF-1a是人體參與細胞內氧代謝的重要調節因子，有氧環境下HIF-1可經羥基化后結合泛肽連接酶，進而通過自身泛肽化從而降解；在缺氧環境下HIF-1是無法被羥基化，所以體內HIF-1濃度會升高。有研究結果表明當HIF-1含量升高時，其可能參與了惡性腫瘤相適應的基因轉錄，從而形成新生血管和維持腫瘤細胞的能量代謝[12]。有文獻也指出[13]當缺氧時，抑制了HIF-1的表達可作為腫瘤治療的新方法。在腫瘤迅速增長的過程中，患者會出現因惡性腫瘤細胞快速增殖進而誘發細胞內部缺氧的現象，在多種腫瘤患者中均發現HIF-1的高表達，因此可以推測HIF-1參與了腫瘤的浸潤、生長和轉移等病理生理過程。

相關性分析上皮性卵巢癌組織XIAP與HIF-1a的表達呈正相關，主要是因為HIF-1a能夠并對細胞凋亡、血管新生及糖酵解有良好的調控作用；在正常條件下，HIF-1a能夠與基因產物pYHL結合并被降解，其半衰期僅為數分鐘，但在pVHL和缺氧環境下HIF-1a會快速上升[14-16];而XIAP是細胞凋亡的調節器，通過BIR1結構域的linker區調節Caspase相關因子，進而通過多種信號途徑參與抑制內源性或外源性凋亡誘導信號引起的細胞凋亡，因此XIAP與HIF-1a均通過調節惡性腫瘤細胞的凋亡來影響上皮性卵巢癌的發生、發展。

總之，在上皮性卵巢癌患者的組織中XIAP、HIF-1a表達上調，與FIGO分期有關，兩者間表達存在正相關關系。