XPF基因多態性與晚期非小細胞肺癌鉑類聯合化療效果及不良反應的相關性研究

宋 瑋 李 英 宋瓊珠

肺癌的發病率和死亡率在惡性腫瘤種類中居世界首位，非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占80% 左右，嚴重影響人類的生命健康[1-2]。對于早期患者，通常使用手術治療，至于晚期患者，全身化療成了重要的治療方法[3-4]。目前鉑類藥物在內的細胞毒藥物是晚期NSCLC的標準一線化療藥物，其腎毒性、胃腸道毒性和神經毒性等差異均較大[5]。有研究結果表示，遺傳因素與個體差異性相關，如單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)[6]。研究表明核苷酸切除修復酶(xeroderma pigmentosum group F，XPF) 功能缺陷罹患皮膚癌的風險增加，說明其與腫瘤之間關系密切[7]，XPF已被證明與胃癌、胰腺癌等風險有關[8]，然而XPF與肺癌發生之間的相關性研究較少，仍需要進一步探索。本研究對XPF的多態性位點(rs28360317、rs2836007、rs1805377) 與NSCLC鉑類聯合化療效果及毒性反應的相關性進行分析，為了NSCLC的未來關于臨床預測的研究提供了一定的參考依據。

1 資料與方法

1.1 對象

選擇2016年5月至2018年5月于本院確診并治療的晚期NSCLC患者100例，男性58例、女性42例，年齡28～79歲，平均(59.21±8.76)歲。納入標準：①年齡18～80歲；②可測量的腫瘤病灶，組織病理學或細胞學確診為ⅢA～Ⅳ期NSCLC；③身體體力狀態評分≤2分 ；④患者化療前血常規、心電圖檢查、肝腎功能正常且接受鉑類化療；排除標準：①已接受手術治療或同步放療方案患者；②合并嚴重心、肝、肺、腎等臟器及骨髓功能異常的肺癌患者；③合并心、肝、脾、腎等嚴重疾病。其中納入研究對象100例，腺癌65例、鱗癌20例、腺鱗癌4例、其他11例 ；ⅢA期11例、ⅢB期34例、Ⅳ期55例；PS評分0～1 分78例、2分22例；吸煙者56例、不吸煙者44例。

1.2 化療方案

患者均經靜脈滴注，卡鉑(CBP)或順鉑(DDP)作為基礎，聯合紫杉醇(paclitaxel，TAX)、長春瑞濱(navelbine，NVB)、多西紫杉醇(docetaxel，DOC)、吉西他濱(gemcitabine，GEM)的兩藥聯用一線化療方案。給藥方案如下，①NP/NC：給予DDP 75 mg·m-2，d1+NVB 25 mg·m-2，d1、d8，共48例 ；②GP/GC：給予DDP 75 mg·m-2，d1+GEM 1200 mg·m-2，d1、d8，共17例；③TP/TC：給予DDP 75 mg·m-2，d1+TAX 175 mg·m-2，d1，共28例；④DP/DC：給予DDP 75 mg·m-2，d1+DOC 75 mg·m-2，d1，共7例。

1.3 收集樣本以及臨床資料

患者于化療前抽取2 ml靜脈血 ，采用QIAamp DNA試劑盒提取DNA。記錄患者性別、年齡、腫瘤病理組織分型、PS評分、化療方案、療效、臨床分期和不良反應等臨床資料。

1.4 基因分型

根據NCBI數據庫獲取3個基因多態性位點的序列，運用Taqman SNP Genotyping Assays檢測XPF基因多態性位點(rs28360317、rs1805377、rs2836007)。設計熒光素藍色和綠色熒光標記探針，AppliedBiosystems Step One Software v2.1進行基因分型，并重復3次(試劑均購自ABI公司)。隨機抽取10%樣品，經分子量陣列技術鑒定不同基因型的DNA樣本，如果一致性100%，則說明其準確性和可靠性。

1.5 患者的化療療效和不良反應標準

化療2個周期后，經CT復查，由實體瘤療效評價標準評價療效，分完全緩解(complete response，CR)、部分緩解(partial response，PR)、疾病穩定(stable disease，SD)和疾病進展(progressive disease，PD)，其中CR+PR為客觀有效，CR+PR+SD為疾病控制。不良反應由美國國立癌癥研究所常規毒性分級標準(NCICTC 3.0)判定，分為0～Ⅳ級。評估血液學毒性和胃腸道毒性，其中低毒性為0～Ⅱ級，嚴重不良反應為Ⅲ～Ⅳ級，見表1。

表1 胃腸道及血液學毒性評價標準

1.6 統計分析

收集的實驗數據經SPSS21.0分析，計數資料采用頻數以及構成比表示，比較時卡方檢驗法，采用校正Logistic法對發病風險分析，相對風險度用比值比(odds ratio，OR)以及95%可信區間(95% confidential intervals，95%CI)表示，相關性分析采用Spearman相關性分析法，統計檢驗均經雙側檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 基因型分布

攜帶rs28360317Ⅱ、ID和DD基因型的患者分別為47例(47.00%)、39例(39.00%)和14例(14.00%)，攜帶rs1805377 AA、AG和GG基因型的患者分別為52例(52.00%)、43例(43.00%)和5例(5.00%)，攜帶rs2836007 CC、CT和TT基因型的患者分別為63例(63.00%)、33例(33.00%)和4例(4.00%)。

2.2 患者化療療效以及不良反應情況

接受化療患者中的客觀有效率為20.00%(20/100)，疾病控制率為80.00%(80/100)；22例(22.00%)發生嚴重的血液學毒性，18例(18.00%)出現嚴重的惡心、嘔吐等胃腸道毒性反應。

2.3 XPF 基因多態性與鉑類聯合化療療效的相關性

XPF的3 個位點多態性均與鉑類聯合化療的療效相關。對于 rs28360317，相對于Ⅱ基因型，ID基因型療效較好(P<0.05)。對于rs1805377，GG 基因型患者的療效顯著優于 AA 基因型患者(P<0.05)；隱性模型結果的差異具有統計學意義(P<0.05)。對于 rs2836007 ， TT 基因型療效顯著優于 CC 基因型(P<0.05)，隱性模型差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 XPF基因多態性與患者鉑類聯合化療療效的相關性分析

2.4 XPF 基因多態性與患者血液學毒性的相關性

XPF的rs28360317和rs2836007位點多態性與鉑類聯合化療的血液學毒性相關。對于rs28360317，ID、DD發生Ⅲ～Ⅳ級血液學毒性的幾率顯著高于Ⅱ級(P<0.05)；對于rs2836007，相較于CC ，CT出現Ⅲ～Ⅳ級血液學毒性的概率偏低(P<0.05)(表 3)。

表3 XPF基因多態性與患者血液學毒性的相關性分析

2.5 XPF基因多態性與患者胃腸道毒性的相關性分析

rs1805377多態性與胃腸道毒性有相關性，其他2個位點多態性與胃腸道毒性無相關性。rs1805377位點的AA基因型發生Ⅲ～Ⅳ級胃腸道毒性的幾率顯著低于AG基因型(P<0.05)(表 4)。

表4 XPF基因多態性與患者胃腸道毒性的相關性分析

3 討論

目前NSCLC是臨床常見的惡性腫瘤，晚期NSCLC患者已出現腫瘤遠處轉移，無法采用手術治療[9]。由于擁有較強的抗腫瘤作用，臨床治療方案常常選擇鉑類藥物聯合化療[10]。本研究發現患者鉑類聯合化療的客觀有效率為20.0%，疾病控制率為80.0%，與現有的研究報道一致[11]。

目前NSCLC患者預后主要通過療效和毒性來評價，還會受其他因素的干擾，比如有遺傳因素，如單核苷酸多態性，與鉑類藥物化療的個體性差異密切相關[12-13]。有研究報道lncRNA可以在生物學過程中起著重要的調控作用，包括細胞的生長以及凋亡等[14]。其中XPF可以參與識別損傷的DNA，結合受損傷的片段，核酸內切酶活性被激活。DNA的修復功能是細胞遺傳物質維持穩定與完整性的主要作用機制之一。所有編碼DNA修復酶的基因，單核苷酸多態都對基因的結構與功能產生了影響，SNPs與個體的遺傳易感性可能有一定的相關性。XPF基因多態性在腫瘤方面的研究也備受醫學界關注[15]。XPF作為NER途徑的一種重要的蛋白質，并且它與多種癌癥引起的順鉑為主的化療的相關[16]。且已有研究表明XPF基因多態性與NSCLC治療效果相關[17]。鑒于此本研究選取了rs1805377和rs2836007位在第7內含子、rs28360317位在XPF第3內含子，結果發現XPF的3個位點多態性均與鉑類聯合化療的療效相關，其中XPF的rs28360317，相對于Ⅱ基因型患者，ID基因型的患者療效較好；攜帶Ⅱ+ID基因型的患者療效顯著優于DD基因型患者。對于rs1805377，GG基因型患者的療效顯著優于AA 基因型患者。對于rs2836007，TT基因型的患者療效顯著優于CC基因型患者。這與目前研究結果一致，且結果表明鉑類聯合化療對rs28360317和rs2836007純合子突變基因型的患者療效更好。

目前有研究結果發現XPF多態性與晚期NSCLC患者的疾病嚴重程度相關[18]，本研究表明對于rs28360317，ID、DD發生Ⅲ～Ⅳ級血液學毒性的幾率顯著高于Ⅱ級；對于rs2836007，相較于CC，CT出現Ⅲ～Ⅳ級血液學毒性的概率偏低。rs1805377位點的AA基因型發生Ⅲ～Ⅳ級胃腸道毒性的幾率顯著低于AG基因型。這與現有的研究結果一致，但仍需要進一步研究。

綜上所述，XPF基因多態性與晚期NSCLC鉑類聯合化療的療效以及不良反應相關，基因位點rs28360317、rs1805377和rs2836007多態性可能是晚期NSCLC潛在的生物標志物之一，但仍需要多中心以及大樣本量來減少研究結果的偏移。