Th1/Th2型免疫反應相關基因在巨噬細胞RAW264.7應對細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激時的表達譜研究

王正榮，馬 勛，張艷艷，孟季蒙,薄新文

(1.省部共建綿羊遺傳改良與健康養殖國家重點實驗室/新疆農墾科學院畜牧獸醫研究所，石河子 832000； 2.石河子大學動物科技學院，石河子 832000)

包蟲病是由棘球絳蟲幼蟲寄生于人或動物臟器引起的一種危害嚴重的人獸共患寄生蟲病，該病是被世界衛生組織嚴重忽視的疾病之一[1]。其中，細粒棘球絳蟲的幼蟲寄生導致的囊型包蟲病，是造成我國包蟲病流行的主要因素。同時由多房棘球絳蟲幼蟲寄生引起的泡型包蟲病在我國也有發生[1]。包蟲病給患者及其家庭造成嚴重的健康危害和沉重的經濟負擔，同時給畜牧業帶來巨大損失。目前，該病已在全國二十幾個省份發生，主要分布在西北部分牧區，包括青海、西藏、新疆等地。據估計，我國包蟲病患者人數約為100萬，受威脅人口近6 600萬， 患者數量巨大。與現有的全球包蟲病流行數據相比，中國包蟲病受威脅人口數和患者人數仍居世界首位[1-2]。同時據農業部門推算，全國每年患包蟲病的家畜在5 000萬頭以上，因家畜死亡和臟器廢棄造成的直接經濟約30億元，是導致我國西部農牧區群眾因病致貧、因病返貧的主要原因之一。

最近在免疫學方面的研究已經發現了一些關于宿主應對細粒棘球絳蟲固有免疫系統建立相關的一些證據。有學者利用流式細胞儀分析了感染細粒棘球蚴和多房棘球蚴的BALB/c小鼠脾和血液中淋巴細胞亞群變化情況，為進一步研究細粒棘球蚴和多房棘球蚴感染的免疫機制提供試驗依據[3]。也有學者報道了宿主MHC-DRB1基因多態性與包蟲病抗性相關性方面的研究[4]。然而，有關棘球絳蟲與宿主動物相互作用的機制尚未被廣泛研究[5]。同時，由于細粒棘球絳蟲復雜的生命周期，以及各種免疫調節功能導致難以對其實施有效的控制措施，也阻礙了人用疫苗以及終末宿主疫苗的研發進程。有文獻證明蠕蟲感染可以刺激宿主產生Th2型免疫保護反應[6]。宿主對棘球絳蟲的免疫反應可以經典地分為適應性免疫反應和先天性免疫反應[6]。先天性免疫反應是宿主抵御各種寄生蟲感染的第一道防線[7]，寄生蟲通過模式識別受體(pattern recognition receptors，PRRs)，如toll樣受體(TOLLs)和核苷酸結合寡聚結構域(NOD)樣受體(NLRs)，識別與病原體相關的分子模式(PAMPs)。這些受體主要表達于宿主的免疫細胞，包括巨噬細胞、中性粒細胞、內皮細胞、樹突狀細胞和淋巴細胞，它們通過不同的機制調節宿主的免疫反應[7-9]。

巨噬細胞是一種重要的免疫細胞，在宿主固有免疫和適應性免疫過程中均發揮著重要的作用。已有的研究表明，宿主巨噬細胞在抗細粒棘球絳蟲感染的先天和適應性免疫反應中發揮著至關重要的作用[10]。但目前仍未見系統解析巨噬細胞應對細粒棘球絳蟲原頭蚴感染時其基因差異表達及調控機制的文獻報道。因此，本研究采用RNA-seq測序技術系統分析了巨噬細胞RAW264.7應對細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激過程中其基因的表達譜特性，以期篩選鑒定巨噬細胞RAW264.7抗細粒棘球絳蟲原頭蚴感染相關的功能分子。這些數據將為進一步研究這些功能分子在巨噬細胞應對細粒棘球絳蟲感染過程中發揮的作用及其調控機制提供新的視角，同時有望為控制包蟲病提供新的藥物以及疫苗靶點。

1 材料與方法

1.1 材料

在屠宰場收集被細粒棘球絳蟲感染的帶有包囊的羊肝，帶回實驗室，無菌條件下抽取含有原頭蚴的包囊液，離心收集原頭蚴，用加有雙抗的PBS洗滌3～5次， 最后將收集的原頭蚴培養至含有10%胎牛血清以及雙抗的RPMI1640培養液中，放至37 ℃二氧化碳培養箱中培養備用。在細胞培養瓶中培養RAW264.7細胞，待細胞生長穩定時將其傳代培養至新的培養瓶，當培養瓶中細胞交匯率達到80%時，接種細粒棘球絳蟲原頭蚴，接種濃度為每毫升2 000個， 設PBS為對照組，每組3個生物學重復，共培養6、24和72 h后，棄去培養上清液，然后胰酶消化收集RAW264.7細胞，將每組3個生物學重復做混池測序。

1.2 總RNA的提取、lncRNA庫的建立以及測序

使用美國Clontech 公司的SMARTer Ultra Low RNA Kit for Illumina Sequencing試劑盒進行RAW264.7細胞的裂解和第一條cDNA鏈的合成，使用美國Beckman公司的AMPure XP beads試劑盒純化后，用美國Clontech 公司的Advantage 2 PCR kit試劑盒擴增第一條cDNA鏈，并再次純化，最終得到雙鏈cDNA。Qubit 2.0定量檢測，合格后用Covaris系統超聲打斷雙鏈cDNA短片段進行末端修復，加 A尾并連接測序接頭后，純化，選擇片段大小在200 bp左右的文庫進行PCR富集得到最終的cDNA文庫。先使用 Qubit 2.0進行文庫的初步定量，稀釋文庫至2 ng·μL-1，隨后用Agilent 2100對文庫的 insert size進行檢測，符合預期后，使用qPCR方法對文庫的有效濃度進行準確定量(文庫有效濃度>2 nmol·μL-1)，以保證文庫質量。文庫檢驗合格后，把不同文庫按照有效濃度及目標數據量的需求，進行Hiseq/MiSeq測序。

使用Tophat v2.0.12將得到的原始測序序列比對到小鼠參考基因組上，用Cufflinks v2.1.1軟件組裝出高質量的轉錄本，用Cuffcompare v2.2.1將其與已注釋的轉錄本信息進行比較，得到潛在的轉錄本。

1.3 差異基因的表達分析

使用Stringtie v2.1.1軟件對轉錄本在轉錄水平上進行表達量分析，皮爾遜相關系數表示樣品間基因的表達水平相關性，使用R語言的procmp函數，根據表達量對各樣品進行PCA主成分分析。采用DESeq(1.18.0)對轉錄本表達進行差異分析，篩選條件為表達差異倍數|log2Fold Change|>1，顯著性Pvalue<0.05。

使用R語言ggplots 2 v3.3.5軟件包繪制差異表達轉錄本的火山圖，Pheatmap v1.0.12軟件包根據同一轉錄本在不同樣品中的表達水平和同一樣品中不同轉錄本的表達模式進行聚類，采用Euclidan方法計算距離，使用層次聚類最長距離法進行聚類。

1.4 差異表達基因的GO分析

對于差異表達的轉錄本，利用GO(gene ontology，www.geneontology.org)對其進行功能聚類分析。研究差異表達轉錄本在 Gene Ontology 中的分布狀況將闡明試驗中樣本差異在基因功能上的體現。

1.5 差異表達基因的KEGG分析

采用KEGG(kyoto encyclopedie of genes and genomes，www.kegg.jp/kegg/pathway)數據庫對差異表達的基因進行了信號通路分析，通過 Pathway 顯著性富集能確定特異基因參與的最主要生化代謝途徑和信號轉導途徑。具體分析方法是以 KEGG Pathway 為單位，應用超幾何檢驗，找出與整個基因組背景相比，在特異基因中顯著性富集的pathway，最終將FDR≤0.05的pathway定義為在差異表達基因中顯著富集的pathway。

1.6 部分差異表達基因的轉錄水平分析

將無菌采集的細粒棘球絳蟲原頭蚴保存于液氮中，備用。總RNA提取采用美國Invitrogen公司的 Trizol Reagent 試劑，提取方法參照試劑說明書實驗步驟進行。反轉錄采用康為世紀公司10 μL反轉錄體系的CW2582 cDNA合成試劑盒。靶標基因的qRT-PCR擴增引物由本實驗室采用Primer 3.0在線軟件設計，詳細情況見表1。

表1 實時定量PCR試驗相關引物

以上述cDNA為模板，以gapdh為內參基因，對隨機篩選的差異表達基因進行qRT-PCR擴增，反應體系：SYBR PremixExTaqMix(2×) 10 μL， 上游引物(10 mmol·L-1)0.4 μL，下游引物(10 mmol·L-1)0.4 μL ， cDNA1 μL，加ddH2O 至20 μL。反應條件為：95 ℃預變性30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 20 s，共40個循環。每個基因做三個重復，采用相對比較△Ct(Qr=2-△△Ct)[11]法計算目的基因的相對表達量。

2 結 果

2.1 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養6 h差異基因表達分析

當巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養6 h時，和PBS對照組相比，原頭蚴處理組的RAW264.7細胞共有848個基因的表達出現顯著變化，其中415個基因出現上調表達，433個基因出現下調表達。GO分析結果顯示，差異表達基因主要富集在GO功能聚類的生物過程(BP)中的細胞代謝過程等；細胞組分(CC)中的細胞以及細胞組分等；分子功能(MF)中的DNA、RNA、蛋白及各種酶的結合等。KEGG信號通路的分析結果表明差異表達的基因主要參與自然殺傷細胞介導的細胞毒性、病毒致癌物形成、HIF-1信號通路、AMPK信號通路、胰島素信號通路以及FoxO等信號通路。詳見圖1。

圖1 原頭蚴(PSC)與RAW264.7共培養6 h差異表達基因的火山圖、GO分析以及KEGG分析圖Fig.1 Volcano plot，heatmap and KEGG of differentially expressed genes in RAW264.7 co-cultured with Echinococcus granulosus protoscoleces(PSC)for 6 hours

2.2 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養6 h Th1、Th2型免疫反應相關基因的差異表達

當巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養6 h時，共有31個Th1、Th2型免疫反應相關基因的表達出現顯著變化，其中16個基因出現顯著上調，15個出現顯著下調。包括8個germline-encode receptor，其中3個上調，5個下調；15個PRRs下游相關分子，其中5個上調，10個下調；以及8個PRRs下游相關效應分子，其中7個上調，1個 下調。詳見圖2、表2。

2.3 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養24 h差異基因表達分析

當巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養24 h時，和PBS對照組相比，原頭蚴處理組的RAW264.7細胞共有3 745個基因的表達出現顯著變化，其中1 159個基因出現上調表達，2 586個基因 出現下調表達。GO分析結果顯示，差異表達基因主要富集在GO功能聚類的生物過程(BP)中的代謝過程、初級代謝過程、有機物代謝過程以及細胞代謝過程等；細胞組分(CC)中的細胞內組分、細胞內、細胞器以及膜結構細胞器等。KEGG信號通路的分析結果表明差異表達的基因主要參與代謝通路、核糖體通路、剪接體通路、RNA轉運以及泛素介導的蛋白水解等通路。詳見圖3。

圖2 原頭蚴(PSC)與RAW264.7共培養6 h Th1、Th2免疫反應相關基因差異表達聚類熱圖及部分基因的qRT-PCR驗證Fig.2 The heatmap of the differential expression genes in the RAW264.7 related to Th1 and Th2 immune response during the protoscoleces(PSC)and RAW264.7 co-cultured for 6 hours and validation of the differntially expressed genes by qRT-PCR

表2 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養6 h Th1、Th2型免疫反應相關基因的差異表達

2.4 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養24 h Th1、Th2型免疫反應相關基因的差異表達

當巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養24 h時，共有111個Th1、Th2型免疫反應相關基因的表達出現顯著變化，其中34個基因出現顯著上調，78個出現顯著下調。包括50個germline-encode receptor，其中18個上調，32個下調；53個 PRRs下游相關分子，其中12個上調，41個下調；以及8個PRRs下游相關效應分子，其中4個上調，4個下調。詳見圖4、表3。

2.5 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養72 h差異基因表達分析

當巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養72 h時，和PBS對照組相比，原頭蚴處理組的RAW264.7細胞共有7 009個基因的表達出現顯著變化，其中2 237個基因出現上調表達，4 772個基因出現下調表達。GO分析結果顯示，差異表達基因主要富集在GO功能聚類的生物過程(BP)中的代謝過程、初級代謝過程、有機物代謝過程以及細胞代謝過程等；細胞組分(CC)中的細胞、細胞組分、細胞內組分、細胞內、細胞器以及細胞內細胞器等。KEGG信號通路的分析結果表明差異表達的基因主要參與代謝通路、老年癡呆癥通路、亨廷頓氏病通路、癌癥通路、PI3K-Akt通路、內吞通路以及MAPK等通路。詳見圖5。

圖3 原頭蚴(PSC)與RAW264.7共培養24 h差異表達基因的火山圖、GO分析以及KEGG分析圖Fig.3 Volcano plot，heatmap and KEGG of differentially expressed genes in RAW264.7 co-cultured with Echinococcus granulosus protoscoleces(PSC)for 24 hours

圖4 原頭蚴(PSC)與RAW264.7共培養24 h Th1、Th2免疫反應相關基因差異表達聚類熱圖及部分基因的qRT-PCR驗證Fig.4 The heatmap of the differential expression genes in the RAW264.7 related to Th1 and Th2 immune response during the protoscoleces(PSC)and RAW264.7 co-cultured for 24 hours and validation of the differntially expressed genes by qRT-PCR

表3 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養24 h Th1、Th2型免疫反應相關基因的差異表達

圖5 原頭蚴(PSC)與RAW264.7共培養72 h差異表達基因的火山圖、GO分析以及KEGG分析圖Fig.5 Volcano plot，heatmap and KEGG of differentially expressed genes in RAW264.7 co-cultured with Echinocolcus granulosus protoscoleces(PSC)for 72 hours

2.6 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養72 h Th1、Th2型免疫反應相關基因的差異表達

我們的分析結果顯示，當巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養72 h時，共有212個Th1、Th2型免疫反應相關基因的表達出現顯著變化，其中50個基因出現顯著上調，162個出現顯著下調。包括78個germline-encode receptor，其中20個上調，58個下調；97個PRRs下游相關分子，其中16上調，81下調；以及37個PRRs下游相關效應分子，其中14個上調，23個下調。詳見圖6、表4。

圖6 原頭蚴(PSC)與RAW264.7共培養72 h Th1、Th2免疫反應相關基因差異表達聚類熱圖及部分基因的qRT-PCR驗證Fig.6 The heatmap of the differential expression genes in the RAW264.7 related to Th1 and Th2 immune response during the protoscoleces(PSC)and RAW264.7 co-cultured for 72 hours and validation of the differntially expressed genes by qRT-PCR

表4 巨噬細胞RAW264.7與細粒棘球絳蟲原頭蚴共培養72 h Th1、Th2型免疫反應相關基因的差異表達

3 討 論

迄今為止，研究者已經對先天免疫系統控制1型免疫反應抵抗病原微生物做了大量研究。宿主體內有一組胚系基因編碼受體，也稱為模式識別受體(PRRs)，可以識別病原體相關的分子模式(PAMPs)，這些分子是來自病原體的保守分子[12]。PRRs對PAMPs的識別可以激活下游信號通路，誘導炎癥細胞因子的轉錄[13]。相比之下，寄生蟲已經發展出復雜的策略，可以將宿主的免疫反應轉變為抗炎性的2型免疫反應[14-16]，而人們對先天免疫系統如何控制2型免疫卻知之甚少。一些來自蠕蟲的產物可以作為免疫調節劑被宿主PRRs識別。TLR4可以識別嚙齒類絲蟲的排泄分泌產物ES-62，使宿主的免疫反應偏向于抗炎的Th2表型[17]。由曼氏血吸蟲卵可溶性提取物制備的碳水化合物免疫調節劑LNFPIII通過激活非典型NF-κB家族成員BCL3，以DC-SIGN和TLR4依賴的方式驅動Th2極化[18-19]。此外，來源于曼氏血吸蟲蟲卵和成蟲的脂質，可以激活TLR2并使樹突狀細胞成熟極化，導致機體偏向Th2免疫反應[20-21]。

本研究結果表明，當細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激巨噬細胞RAW264.7時，可引起巨噬細胞內相關基因的差異表達。并且不同的時間點，差異表達的基因也在發生變化，進而調控不同的免疫反應。當細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激巨噬細胞RAW264.7 6 h后，上調表達的基因主要參與MAPK通路、TNF通路、Rap1通路、TGF-beta通路、趨化因子通路、泛素介導的蛋白水解通路以及Fc受體介導的吞噬通路等。其中MAPK通路在細胞將外界刺激轉化為一系列細胞反應過程起著關鍵作用，包括細胞生長、遷移、增殖、分化和凋亡[22-23]。而TNF是由活化的巨噬細胞和淋巴細胞表達的一種強有力的促炎性細胞因子，能誘導不同的細胞反應，參與調控從細胞凋亡到早期炎癥和獲得性免疫反應相關基因的表達。TNF可以誘導 NF-κB介導的細胞存活(和促炎癥)途徑，或者根據細胞情況誘導凋亡反應[24]。研究發現克氏錐蟲、弓形蟲、惡性瘧原蟲等的感染，都能激活NF-κB的表達，抑制細胞凋亡，從而增強寄生蟲的復制[25-28]。同時研究還表明，胞內寄生的旋毛蟲的感染，可以誘導機體感染肌肉細胞中TNF、TNFR1、TRADD、caspase-3、caspase-8、TRAF-2以及RIP 的表達，進而誘導細胞凋亡或者誘導肌肉細胞轉化為滋養細胞[29]。而FcγR受體是機體體液免疫和細胞免疫的重要紐帶，表達于淋巴細胞的FcγR受體具有介導細胞吞噬、抗體依賴性細胞毒性、釋放炎癥介質、產生氧自由基和調節抗體產生等免疫效應功能[30]。Rap1屬于RAS家族中小的GTPases，它參與了多種細胞信號轉導通路，與癌癥的發生和轉移相關。Rap1在哺乳動物細胞中的功能相對保守，包括細胞極性、底物和細胞-細胞黏附以及其他涉及細胞骨架動力學調節的過程[31]。當細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激巨噬細胞RAW264.7 24 h后，上調表達的基因主要富集在代謝通路、核糖體通路、Rap1通路、HIF-1通路、PI3K-Akt通路、MAPK通路以及泛素介導的蛋白水解等通路。當細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激巨噬細胞RAW264.7 72 h后，上調表達的基因主要富集在代謝通路、HIF-1通路、剪切體及泛素介導的蛋白水解等通路，但與細胞炎性免疫相關的MAPK通路、TNF通路和Fc受體介導的吞噬通路等均出現下調表達的趨勢，在整個過程中，泛素介導的蛋白水解通路一直處于上調表達的狀態。綜上，從細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激巨噬細胞RAW264.7不同時間點差異表達基因的KEGG富集結果可以得出以下結論，在蟲體刺激巨噬細胞RAW264.7 6、24 h時，巨噬細胞的免疫反應主要以炎性反應為主，而當互作72 h，巨噬細胞的免疫反應則變為以抑炎反應為主。

模式識別受體(PRRs)能識別病原體相關的分子模式，激活下游信號通路，調節宿主對病原體的免疫反應。PRRs包括Toll樣受體(TLR)、NOD樣受體(NLR)、RIG樣受體(RLR)、C型凝集素受體(CLR)、甘露糖受體以及清道夫受體等。因此，為了解析巨噬細胞中PRRs在應對細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激時功能，本研究系統分析了不同作用時間點巨噬細胞PRRs及其相關分子的差異表達情況。結果表明，原頭蚴刺激可引起巨噬細胞中PRRs及其相關分子的差異表達，并隨著刺激時間的不同而不同。當原頭蚴刺激巨噬細胞6 h時，清道夫受體CD36以及G蛋白偶聯受體Adgre5的表達出現上調，同時PRRs下游相關效應分子Tnfrsf1a和Ifnar1的表達也出現上調。其中，CD36是一種膜蛋白，存在于各種類型的細胞中，包括單核細胞和巨噬細胞等。是一種多配體受體，參與葡萄糖和脂質代謝、免疫反應、炎癥反應、血栓形成和纖維化等過程[32]。巨噬細胞CD36通過與氧化型低密度脂蛋白的相互作用，進而引發炎癥反應[33]。Tnfrsf1a屬于腫瘤壞死因子超家族，其編碼的受體可以調控炎型細胞因子的活性[34]。而Ifnar1是一種可以激活細胞表達一型干擾素的受體，該受體表達于所有的有核細胞[35]。當原頭蚴刺激巨噬細胞24 h時，C型凝集素受體Reg1、Reg2、Reg3b、Reg3d、Reg3a和Reg3g的表達出現上調，研究表明，C 型凝集素受體作為模式識別受體的重要成員，通過識別和結合微生物表面的碳水化合物，在區分自我和非自我的先天免疫系統中發揮著重要作用[36]。近期的研究表明，有3個宿主來源的C 型凝集素受體可以識別弓形蟲卵囊壁抗原，可能在宿主的先天免疫中起到重要作用[37]。同時，研究發現宿主來源的C 型凝集素受體Mgl-1和 mcl 是犬弓首蛔蟲感染過程中潛在的免疫調節基因[38]。PRRs下游相關效應分子Fam132a、Cbln2和Tnfrsf12a的表達出現上調，其中Fam132a和Cbln2屬于腫瘤壞死因子樣的結構域，而Tnfrsf12a屬于腫瘤壞死因子受體12，都屬于炎型細胞因子調節因子。當原頭蚴刺激巨噬細胞72 h時，有12個富亮氨酸重復結構域的蛋白LRRCs包括Lrrc7、Fbxl22、Lrrc4b、Lrrc63、Epyc、Xrra1、Snrpa1、Atp5s、Anp32a、Lrrc28、Anp32b和Lrrc40的表達出現上調，LRRCs是一種與先天免疫反應相關的蛋白，在許多物種中相對保守。國內的研究者發現長角血蜱體內表達LRRCs，此蛋白可以抑制蜱蟲體內寄生巴貝斯蟲的生長[39]。弓形蟲的感染可以激活宿主LRRCs的表達，進而調控宿主對感染的抵抗[40]。同時有6個G蛋白偶聯受體GPCRs，包括Olfr456、Olfr837、Olfr600、Olfr1170、Olfr933和Olfr482的表達出現上調。GPCRs是細胞表面最大的受體家族，它們負責細胞外信號的傳導，幾乎調節哺乳動物生理的所有方面[41]。Olfr型的受體可以被短鏈脂肪酸乙酸酯和丙酸酯激活，此類受體可以介導慢性炎癥反應[42]。對PRRs下游效應分子分析結果顯示，IL-4和IL-6的表達呈上調趨勢，這兩個細胞因子是典型的Th2型免疫反應調控細胞因子，而Th2型免疫反應屬于炎癥抑制反應[43]。綜上所述，細粒棘球絳蟲原頭蚴的刺激，可以使巨噬細胞中部分C型凝集素受體、G蛋白偶聯受體GPCRs以及富亮氨酸重復結構域的蛋白LRRCs的表達出現上調。由此推測，上述受體可能在巨噬細胞免疫識別細粒棘球絳蟲原頭蚴的過程過發揮作用，但其具體調控機制尚不清楚。同時，對PRRs下游效應分子的分析結果提示，細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激巨噬細胞6、24 h，細胞主要以炎癥反應為主，而當細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激巨噬細胞72 h，巨噬細胞的免疫反應則以炎癥抑制反應為主，此結果與差異表達基因KEGG分析結果一致。

4 結 論

系統解析了巨噬細胞RAW264.7應對細粒棘球絳蟲原頭蚴刺激時其免疫相關基因的差異表達譜規律，篩選鑒定出了大量與巨噬細胞抗細粒棘球絳蟲原頭蚴感染相關的模式識別受體PRRs以及其下游效應分子。為進一步揭示宿主巨噬細胞與細粒棘球絳蟲原頭蚴免疫互作調控機制提供了理論數據，同時為囊型包蟲病疫苗和藥物的研發提供了新的視角。