藏紅花素誘導(dǎo)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤自噬性死亡并抑制細(xì)胞侵襲和PI3K/AKT的活化*

林 珊 屈思萌 張 榮 王生海 韋秋紅Δ

（1 保定市第一中心醫(yī)院眼一科，2 河北大學(xué)附屬醫(yī)院ICU重癥醫(yī)學(xué)科，保定 071000）

視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（retinoblastoma，Rb）是全世界兒童中最常見(jiàn)的眼內(nèi)腫瘤，盡管盡早發(fā)現(xiàn)可治愈，但在發(fā)展中國(guó)家Rb死亡率高達(dá)70%[1]。盡管在放射療法和化學(xué)療法以及手術(shù)切除治療Rb方面取得了進(jìn)步，但晚期Rb很難治療，因?yàn)镽b可以迅速填充眼睛，侵入視神經(jīng)，并最終擴(kuò)散到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而致命[2]。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)用于治療Rb新的藥物。藏紅花素（Crocin）是鳶尾科番紅花屬球根類草本植物藏紅花中提取的一種水溶性類胡蘿卜素。相關(guān)研究表明藏紅花素具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，可抑制腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散，包括結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、骨髓癌和白血病[3-9]，這表明它可以作為癌癥化療和癌癥預(yù)防劑。本研究旨在探究藏紅花素對(duì)Rb自噬、凋亡、侵襲和PI3K/AKT活化的影響，以期為藏紅花素應(yīng)用于Rb的治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物和主要試劑

藏紅花素購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich，化學(xué)式為C44H64O24，分子量976.96；Roswell Park Memorial Institute 1640（RPMI 1640）培養(yǎng)基、胎牛血清、青-鏈霉素、胰蛋白酶購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司；Transwell購(gòu)自美國(guó)Corning Costar；CCK-8試劑盒、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG、免疫熒光染色試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)研究所；兔抗LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Beclin1、ATG7、PI3K、p-PI3K、AKT（ab106693）、p-AKT、GAPDH單克隆抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

人Rb細(xì)胞Y79來(lái)源于美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，將細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)基中，添加10%胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素，置于37℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每24 h更換新鮮培養(yǎng)基，1：2傳代。……