NOD樣受體C5對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡及核轉(zhuǎn)錄因子-κB表達(dá)的影響

王海燕 趙潤(rùn)根 肖高健

（河南平煤集團(tuán)總醫(yī)院消化內(nèi)科，平頂山 467000）

肝癌具有高發(fā)生率和死亡率[1-2]。肝癌病理過(guò)程較復(fù)雜，其中肝慢性炎癥因素得到學(xué)者們的認(rèn)可。研究表明，核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）在炎癥誘發(fā)肝癌中起重要作用[3]，其可參與免疫、炎癥、癌變等多種生理病理過(guò)程[4-5]。機(jī)體中多種有效的抗凋亡基因可被NF-κB激活，且激活NF-κB可使細(xì)胞對(duì)凋亡失去敏感性，從而產(chǎn)生抗凋亡作用，促進(jìn)肝癌的發(fā)生發(fā)展[6]。最新研究報(bào)道稱(chēng)，天然免疫系統(tǒng)中的NOD樣受體（NOD-like receptor，NLP）家族成員之一，NLRC5的蛋白分子直接與先天免疫細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路中IKKα和IKKβ結(jié)合，從而抑制其磷酸化，能夠有效調(diào)控免疫細(xì)胞活性，以避免炎癥反應(yīng)不斷增加造成對(duì)機(jī)體本身的傷害[7-8]。研究顯示，NLRC5可通過(guò)調(diào)控NF-κB炎癥體通路和基因的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能[9-10]，但NLRC5具體作用機(jī)制尚未有明確報(bào)道。因此，本研究通過(guò)向肝癌細(xì)胞株SMMC-7721轉(zhuǎn)染NLRC5 miRNA，并分析NLRC5對(duì)肝癌細(xì)胞的凋亡和增殖能力的影響，探究其對(duì)NF-κB的調(diào)控作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞

本實(shí)驗(yàn)所用有正常的肝細(xì)胞株HL-7702和人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721均購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物寶藏中心。

1.2 試劑和儀器

NLRC5（Abcam公司）；NF-κB抗體（美國(guó)PTG）；TRIzol Reagent 試劑（美國(guó) Invitrogen公司）；RNA提取試劑盒（TaKaRa Bio公司）；逆轉(zhuǎn)錄以及qPT-PCR試劑盒（廣州Gene Copoeia公司）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó) Thermo Fisher 公司）；凝膠電泳儀、半干轉(zhuǎn)儀、濕干轉(zhuǎn)儀（美國(guó)伯樂(lè)生物公司）；臺(tái)式冷凍離心機(jī)（德國(guó) Eppndorf 公司）。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)

HL-7702、SMMC-7721細(xì)胞在RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中均補(bǔ)充有10% FBS和雙抗青霉素（100 UI/mL）-鏈霉素（100 μg/mL），于37℃、5% CO2的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，每天更換培養(yǎng)液1次，2～3 d傳代1次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。……