現(xiàn)代化中藥質(zhì)量控制中液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用與展望

熊曉莉，萬書源，龔來覲，李 鶴

（江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，江西 樟樹 331200）

我國物產(chǎn)豐富，中藥作為我國民族特色治療手段，是祖輩通過千百年的實踐積累流傳下來的，是中華民族燦爛輝煌傳統(tǒng)文化的重要組成部分。中藥種類繁多、成分復(fù)雜且特性差異大、分離較困難等，因“說不清，道不明”而在國內(nèi)外飽受非議，國際化發(fā)展受到限制[1]。由于中藥的質(zhì)量控制不夠規(guī)范、存在一些偏差，中藥進入國際市場的阻力很大，同時也導(dǎo)致患者用藥不夠標準，嚴重影響了中藥的藥效。通過應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，中藥的化學(xué)成分群根據(jù)極性高低被分離，然后經(jīng)過質(zhì)譜解析，不但能明確中藥的部分化學(xué)成分，還能準確測定一些標志性成分的含量，既定性又定量，質(zhì)量得到準確控制，臨床藥效得到保證。本研究通過查閱大量文獻，試圖對液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用現(xiàn)狀進行綜述，以期為藥學(xué)行業(yè)工作者更好地使用和推廣該技術(shù)提供借鑒。

1 液質(zhì)聯(lián)用儀器的類型和特點

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)又稱液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，原理是待測物質(zhì)被分離兩次，先利用液相色譜完成初次分離，再利用荷質(zhì)比完成二次分離；然后根據(jù)被測成分保留時間和離子豐度比雙重特性進行定性，根據(jù)被測組分在質(zhì)量分析器中的響應(yīng)曲線關(guān)系進行定量計算[2]。檢測樣品經(jīng)流動相和質(zhì)譜儀分離成為離子碎片，后經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器按物質(zhì)的量大小得到分離，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖[3]。由于質(zhì)譜檢測類型存在多樣性，儀器也存在多樣性。目前，主要有液相色譜串聯(lián)四級桿質(zhì)譜、液相色譜串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜和液相色譜串聯(lián)四級桿離子阱質(zhì)譜等[4]。

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)起源于20世紀90年代，是當代最重要的分離和鑒定分析方法之一，彌補了紫外檢測儀定量靈敏度差、高效液相色譜儀無法進行全成分分析等缺點，具有靈敏度高、分離能力好等優(yōu)點。該技術(shù)不僅能對樣品中的微量成分進行準確定量，還能對復(fù)雜物質(zhì)進行全成分分析，進而提供大量化合物的結(jié)構(gòu)信息。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的開創(chuàng)讓中藥可以通過指紋圖譜分析進行質(zhì)量鑒別[5]。目前，該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于單味中藥及中成藥的鑒別、有效成分和毒性成分的分析，為中藥的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

2 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用

2.1 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥鑒別中的應(yīng)用

中藥鑒別是中藥質(zhì)量控制的第一個環(huán)節(jié)，沒有出現(xiàn)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)之前，中藥鑒別主要靠藥學(xué)工作者的經(jīng)驗，主觀性強，缺乏嚴格的標準和評定依據(jù)。有了液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)后，藥材的鑒別可以通過數(shù)據(jù)、圖譜判斷，有理有據(jù)。

劉宇文等[6-7]采用超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜的多反應(yīng)檢測技術(shù)，分離出鱉甲膠、龜甲膠等多個動物甲殼中的差異性特征肽段，通過比對特征肽段二級質(zhì)譜圖，確定了鱉甲膠專屬性檢測離子m/z784.90（雙電荷）→872.45、1 028.55，建立了鱉甲膠專屬性鑒別方法。他們還進一步利用特征肽二級質(zhì)譜圖建立了專屬性龜甲特征肽鑒別方法，用于區(qū)分常見的8種混淆龜甲（中華花龜、巴西龜、黃喉擬水龜、黃緣閉殼龜、馬來閉殼龜、印度楞背龜、小鱷龜和緬甸陸龜），采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)準確鑒定了鱉甲和龜甲。戴媛媛等[8]應(yīng)用高效液相-高分辨飛行時間質(zhì)譜技術(shù)對夏枯草消瘤方進行化學(xué)成分鑒別，共發(fā)現(xiàn)30多種化學(xué)物質(zhì)，為其后續(xù)臨床應(yīng)用研究和質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。季榮榮等[9]利用液相梯度洗脫對辣椒素類物質(zhì)中的各成分進行分離，并采用質(zhì)譜對各成分進行定性分析，鑒定出辣椒堿、高辣椒堿、二氫辣椒堿、降二氫辣椒堿、高二氫辣椒堿等5種辣椒素類物質(zhì)。此方法為提純辣椒素物質(zhì)提供了準確依據(jù)。甄亞欽等[10]通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜比較薄荷配方顆粒和傳統(tǒng)飲片中綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸等16種非揮發(fā)性化學(xué)成分的含量，明確了薄荷配方顆粒的優(yōu)勢。建立的液質(zhì)聯(lián)用分析方法快速、簡便、準確，為中藥中非揮發(fā)性成分的質(zhì)量控制提供了新方法。曲珍妮等[11]通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法研究枳實薤白桂枝湯的化學(xué)成分，初步確定了枳實薤白桂枝湯中的19個化合物，主要包含新橙皮苷、柚皮苷等，成分類型包括生物堿類、黃酮類、糖苷類等，闡明了其體內(nèi)發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.2 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥含量測定中的應(yīng)用

中藥有效成分和毒性成分的含量是直接評定藥材質(zhì)量優(yōu)劣的指標，而中藥質(zhì)量的高低又決定了中藥的臨床藥效及中醫(yī)藥的發(fā)展，中藥的現(xiàn)代化道路要求中藥必須進行成分含量測定。吳笛等[12]采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測定槐花散中蘆丁、柚皮苷、新橙皮苷、槲皮素等黃酮類成分的含量。此方法相比于高效液相簡單、準確、重現(xiàn)性好，可用于槐花散的質(zhì)量控制，為中藥的含量測定提供了好的借鑒。王少敏等[13]利用QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測中藥瓜蔞皮中22種真菌毒素的含量，設(shè)定低、中、高3個組別，測得真菌毒素的平均加樣回收率為80%～90%（n=5），且各真菌毒素線性關(guān)系良好，說明液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)靈敏度高，能高質(zhì)量完成瓜蔞真菌毒素的測定。江夏娟等[14]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法測定中藥鉤藤中鉤藤堿、異鉤藤堿、去氫鉤藤堿、異去氫鉤藤堿、毛鉤藤堿與去氫毛鉤藤堿的含量，測定結(jié)果：線性關(guān)系r＞0.995，定量下限為5 ng/mL，日內(nèi)精密度和日間精密度的相對標準偏差不超過10%，準確度在90%～110%。應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)進一步提高了鉤藤含量測定的準確度和精確度。羅華玲等[15]應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用法監(jiān)測和控制復(fù)方板藍根顆粒中板藍根、大青葉的投料，并同時測定(R，S)-告依春、靛玉紅的含量，為企業(yè)全面把控復(fù)方板藍根顆粒中原料藥的投料情況及指標成分的質(zhì)量控制提供了新方法。馬傳江[16]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜可同時測定中藥口服液中的20多種防腐劑，如苯甲酸、三氯卡班、山梨酸等，大大縮短了中藥口服液中防腐劑的篩查時間，方便市場監(jiān)督中藥口服液防腐劑的過量使用。

2.3 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥代謝組學(xué)中的應(yīng)用

代謝組學(xué)是中藥研究的組成部分之一，亦是眾多“組學(xué)”領(lǐng)域的一大分支，代謝組學(xué)主要研究中藥在動物或人體內(nèi)被吸收后各種小分子代謝物在血液或尿液中的動態(tài)變化[17]。中藥在體內(nèi)的代謝發(fā)生了變化，可能預(yù)示著中藥的功效發(fā)生了改變。吳昊等[18]基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)比較雷公藤在甘草炮制前后小鼠血清中代謝產(chǎn)物的差異，試圖找出可能的代謝通路，為甘草制雷公藤能降低肝毒性的說法提供支撐。周國洪等[19]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法比較炒王不留行、生王不留行在大鼠血漿中的代謝組學(xué)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，炒王不留行代謝組成分在大鼠血液中的含量更高，說明王不留行經(jīng)炒爆后能增強藥效有科學(xué)依據(jù)。劉騰等[20]嘗試采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析小鼠注射黃芪注射液后血清中的代謝產(chǎn)物，為后續(xù)黃芪注射液的臨床研究打下基礎(chǔ)。楊琳琳等[21]利用超高效液相色譜-四級桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜對不同采收期的黃芩葉樣本數(shù)據(jù)進行采集，發(fā)現(xiàn)黃芩葉差異性代謝物的含量和變化趨勢與黃芩葉生長月份和采收期等因素密切相關(guān)，春季采收的黃芩葉代謝產(chǎn)物中有效成分含量高、吸收好。

3 總結(jié)及展望

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分離效果好、靈敏度高、選擇性強，獲得的指紋圖譜能較好地解決中藥質(zhì)量控制全成分分析的難題。其在中藥鑒定和中藥含量測定中的應(yīng)用，可在定性的基礎(chǔ)上進行定量，同時完成中藥真?zhèn)舞b別和質(zhì)量優(yōu)劣的判定。相比于高效液相，液質(zhì)聯(lián)用的檢測限更低，能對中藥中的微量物質(zhì)進行高通量測定。中藥經(jīng)過動物或人體代謝后，在血漿或尿液中的含量低、成分復(fù)雜，以往采用高效液相或氣相難以測定，而液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用讓中藥藥物代謝組學(xué)研究更切實可行，促進了中藥藥理學(xué)研究的發(fā)展。隨著科技的發(fā)展和技術(shù)的進步，精密儀器不斷更新?lián)Q代，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)也越來越成熟，被廣泛應(yīng)用于常規(guī)和高通量定性定量的中藥成分分析，對多組分中藥的分析能力強，優(yōu)點顯著。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)在中藥質(zhì)量標準化監(jiān)測中發(fā)揮巨大作用，逐漸使中藥走向國際化，得到全世界的關(guān)注。相信在不久的將來，越來越多的學(xué)者能克服液質(zhì)聯(lián)用儀器昂貴、體積龐大、運行費用較高、操作相對復(fù)雜等缺點，將其廣泛應(yīng)用于基層的藥品質(zhì)量監(jiān)測。