支氣管舒張試驗聯合T淋巴細胞亞群檢測對小兒哮喘的診斷價值

羅淑娟，徐暢，楊婷，饒花平，陳艷萍

支氣管哮喘是兒童時期常見慢性氣道疾病，對患兒生長發育及健康造成影響，且受環境變化等因素影響，兒童哮喘發病率呈逐年升高趨勢，并已成為威脅公共健康的常見慢性肺部疾病[1]。故早期診斷及干預對疾病控制具有重要裨益。支氣管激發試驗/舒張試驗為臨床主要協助診斷哮喘的方法，但支氣管激發試驗因需要患兒反復用力呼吸，易導致肌疲勞從而影響檢查結果，導致臨床應用存在較大局限性[2-3]。而支氣管舒張試驗(bronchodilator test，BDT)安全、簡便，可通過早期和持續的第1秒用力呼氣量(FEV1)監測對異常肺功能發育軌跡作出判斷，對識別肺功能異常增長風險兒童具有重要幫助，但有部分兒童肺功能正常，BDT呈陽性，需輔助其他方式進行更加有效地診斷[4-5]。研究表明，T淋巴細胞亞群失衡是哮喘發病的重要機制，而Th1/Th2平衡是機體免疫調節的基本方式，一旦失衡即可誘發相關變應性疾病[6]?；诖耍F分析支氣管舒張試驗聯合T淋巴細胞亞群水平檢測對小兒哮喘的診斷價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020年2月—2021年2月湖南省兒童醫院呼吸內科診治的哮喘患兒73例為觀察組，男43例，女30例，年齡4～15(9.50±4.67)歲；體質量指數(BMI)10.55～14.10(12.30±1.53)kg/m2; 有家族遺傳病史11例； 根據“支氣管哮喘基層診療指南(2018年)”[7]分為緩解期38例，急性期35例。選取同期醫院體檢健康兒童70例為健康對照組，男 39例，女31例，年齡5～13(9.00±3.40)歲；BMI 10.21～14.50(12.36±1.82)kg/m2。2組研究對象性別、年齡、BMI比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究取得醫院倫理委員會批準[(2020)倫審第(58)號]，兒童監護人知情同意并簽署知情同意書。

1.2 選擇標準 (1)納入標準：符合“兒童支氣管哮喘規范化診治建議(2020版)”中小兒哮喘診斷標準[8]；健康兒童無任何疾病，近2個月內無感染性疾病；兒童均≥4歲。(2)排除標準：合并嚴重心、肺等臟器功能障礙者；先天性心臟病者；合并肺纖維化、先天肺發育異常、支氣管肺發育不良等慢性肺疾病者；合并免疫缺陷性疾病、神經系統疾病者；合并支氣管異物、結核菌感染者；合并急性/慢性呼吸道感染者；存在肺功能檢查禁忌證者。

1.3 觀察指標與方法

1.3.1 支氣管舒張試驗：所有受檢兒童在檢查前48 h停用茶堿類、膽堿能受體拮抗劑、β受體激動劑等藥物。利用德國百瑞空氣壓縮霧化泵霧化吸入短效β2受體激動劑(0.5%硫酸沙丁胺醇溶液， Glaxo Wellcome Operations)，吸入結束15～20 min后，對所有受試兒童急性基礎通氣功能檢查：FEV1、一秒率(FEV1/FVC)、最大呼氣流量(PEF)、用力呼出25%肺活量瞬間流量(FEF25)、FEF50、FEF75。計算用藥前后肺功能指標改善率。

1.3.2 T淋巴細胞亞群水平檢測：哮喘患兒于入組次日晨、健康兒童于體檢當日采集空腹外周靜脈血3 ml，分別加入100 μl同型對照、20 μl雙色標記單抗試劑抗凝血混勻，避光孵育20 min，加入紅細胞溶解液2 ml，常溫下避光孵育10 min，離心棄上清，PBS緩沖液洗滌1次，棄上清，加入PBS 0.5 ml均勻混合制備為懸液，使用流式細胞儀[默瑞(上海)生物科技有限公司，型號 CytoFLEX S]檢測CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+NK細胞水平，嚴格按照儀器說明進行操作。

1.4 判斷標準[9]改善率計算公式為FEV1改善率=[FEV1(吸入支氣管舒張劑后)-FEV1(吸入支氣管舒張劑前)]/FEV1(吸入支氣管舒張劑前)×100%。參考馬俊國等[10]研究中陽性判斷標準：如果FEV1改善率≥12%或FEF25、FEF50、FEF75、FEV1/FVC改善率≥20%為支氣管舒張試驗陽性，反之為陰性。

2 結 果

2.1 2組支氣管舒張試驗后肺功能比較 與健康對照組比較，觀察組FEF25、FEF50、FEF75、PEF、FEV1、FEV1/FVC值均降低(P<0.05)。與緩解期比較，觀察組患兒急性期FEF25、PEF、FEV1、FEV1/FVC值均降低(P<0.05)，而FEF50、FEF75比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2 急性期和緩解期哮喘患兒BDT陽性率比較 與緩解期比較，急性期患兒FEF25、PEF、FEV1、FEV1/FVC陽性率升高，差異具有統計學意義(P<0.05)；FEF50、FEF75陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3 2組T淋巴細胞亞群水平比較 與健康對照組比較，觀察組血清CD8+、CD16+CD56+NK水平降低，

CD4+、CD4+/CD8+水平升高(P均<0.05)；而急性期哮喘患兒血清CD8+、CD16+CD56+NK水平低于緩解期患兒，CD4+、CD4+/CD8+水平高于緩解期患兒(P<0.05)，見表3。

2.4 BDT后肺功能改善與T淋巴細胞亞群水平相關性 FEF25、FEF50、FEF75、PEF、FEV1、FEV1/FVC值與血清CD8+、CD16+CD56+NK水平呈正相關(P<0.05)；與血清CD4+、CD4+/CD8+水平呈負相關(P<0.05),見表4。

2.5 T淋巴細胞亞群、BDT后肺功能改善與哮喘患兒病情嚴重程度相關性 CD8+、CD16+CD56+NK、BDT改善率與哮喘患兒病情嚴重程度呈負相關，CD4+、CD4+/CD8+與哮喘患兒病情嚴重程度呈正相關，見表5。

2.6 ROC曲線分析T淋巴細胞亞群、BDT診斷小兒哮喘的價值 ROC結果顯示，高CD4+、低CD8+、高CD4+/CD8+、低CD16+CD56+NK、低BDT診斷小兒哮喘的曲線下面積(AUC)為0.742、0.818、0.859、0.871、0.892，均低于多項聯合的0.966(Z/P=2.523/0.001、2.645/0.001、2.779/0.001、2.864/0.001、2.965/0.001)，見表6、圖1。

表1 健康對照組及觀察組受試兒童支氣管舒張試驗后肺功能指標比較

表2 不同時期哮喘患兒支氣管舒張試驗通氣功能指標陽性率比較 [例(%)]

表3 健康對照組及觀察組受試兒童T淋巴細胞亞群水平比較

表5 T淋巴細胞亞群、BDT后肺功能改善與哮喘患兒病情嚴重程度相關性

圖1 T淋巴細胞亞群、BDT診斷小兒哮喘價值的ROC曲線分析

3 討 論

支氣管哮喘由T淋巴細胞、中性粒細胞等多種細胞和細胞組分共同參與氣道的慢性炎性疾病，其引發的氣道高反應性，是導致兒童支氣管平滑肌痙攣的重要因素[10]。哮喘患兒若未及時得到有效治療可發展為成人哮喘，因疾病遷延不愈極大地增加了哮喘患者肺損傷及死亡風險，對兒童健康生長造成影響。故早期診斷并給予有效干預，對哮喘防治及預后改善具有重要意義[11-12]。

本研究指出，支氣管舒張試驗、測定T淋巴細胞亞群水平對評估小兒哮喘病情具有重要意義，臨床可根據BDT改善率對哮喘患兒肺功能情況作出準確判斷，為臨床治療及防治提供重要參考。研究表明，支氣管舒張試驗為測定氣流受限可逆性的重要檢測手段，但部分患兒肺功能正常，其BDT呈陽性[13]。而肺功能測定的可逆性對哮喘患者控制情況的評估具有重要意義，可預測未來風險參數[14]。FEV1作為大氣道功能指標，是BDT常用預測因子，是治療后持續存在對支氣管舒張劑的反應，是哮喘控制不佳的標志物[15]。有學者指出，PEF、FEV1、FEV1/FVC作為大氣道功能反映指標，在哮喘診斷及預測哮喘控制不良等方面具有重要意義，對小氣道功能評價特異度較高，但敏感度較低，臨床應用存在一定局限性[16-17]。隨著醫學技術不斷發展，小氣道功能檢測在臨床哮喘診斷、病情評估中得到廣泛應用。相關研究指出，約有12%哮喘控制患兒存在小氣道功能障礙，但呈一定程度可逆性，可利用小氣道檢測對支氣管舒張反應、氣道高反應等作出預測[18-19]。本結果顯示，與健康兒童比較，哮喘患兒小/大氣道指標水平降低，同時研究通過對比不同嚴重程度哮喘患兒BDT改善率發現，急性期患兒FEF25、PEF、FEV1、FEV1/FVC水平低于緩解期患兒，表明患兒病情嚴重程度不同可對BDT改善率造成影響，證實BDT檢查可有效評估氣道可逆性，對患兒哮喘控制情況作出客觀反映。但本研究中通過對比哮喘患兒BDT陽性率發現，哮喘患兒PEF、FEV1的BDT 陽性率均未達到60%，故建議在進行BDT結果評判中同時結合小氣道指標對氣道可逆性進行判斷，以期更為全面的對哮喘病情控制情況進行評定。

表4 哮喘患兒BDT后肺功能改善率與T淋巴細胞亞群水平相關性

表6 T淋巴細胞亞群、BDT及兩項聯合診斷小兒哮喘的價值

本研究指出，通過支氣管舒張試驗、T淋巴細胞亞群水平檢測聯合應用對哮喘患兒檢查具有良好的診斷價值。相關學者表明，哮喘患兒均存在不同程度的T細胞功能缺陷，證實哮喘患兒機體存在細胞免疫功能紊亂[20-21]。研究指出，在哮喘患兒中CD4+、CD4+/CD8+水平高于健康兒童，CD8+、CD16+CD56+NK低于健康兒童，從而影響氣道炎性反應。而NK細胞作為機體非特異性免疫的重要組成部分，是機體免疫中的重要效應細胞，其功能異?？蓪е聶C體嚴重病毒感染[22-23]。本結果顯示，與健康兒童、緩解期患兒比較，急性期哮喘患兒血清CD4+、CD4+/CD8+水平升高，CD8+、CD16+CD56+NK水平降低，同時研究中對疾病嚴重程度進行分析發現，血清CD4+、CD4+/CD8+水平與疾病嚴重程度呈正相關，血清CD8+、CD16+CD56+NK水平與疾病嚴重程度呈負相關，提示檢測T淋巴細胞亞群水平在診斷小兒哮喘中具有重要臨床意義，為治療方案選擇提供重要依據。

綜上所述，支氣管舒張試驗、T淋巴細胞亞群水平與哮喘疾病嚴重程度存在一定相關性，但單一采用T淋巴細胞檢測或支氣管舒張試驗對哮喘患者進行診斷存在局限性，而二者聯合應用可有效反映哮喘患兒肺功能變化情況及機體免疫力，為哮喘患兒病情嚴重程度診斷、治療提供重要參考，有助于提高低齡兒童哮喘疾病管理水平，具有良好的診斷價值。但因研究中樣本納入較少，且未對小兒哮喘進展及預后情況進行分析，導致研究存在局限性，需進一步增加樣本進行多中心研究確認。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

羅淑娟：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；徐暢：資料收集整理；楊婷：分析統計試驗數據；饒花平：論文修改；陳艷萍：論文審核