痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎與外周血T 淋巴細(xì)胞關(guān)系的研究

張昊 劉暢 鄧瀚文 戴冰冰

近年來(lái)隨著人們生活水平的提高,痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(gouty arthritis,GA) 的發(fā)病率逐年升高,其發(fā)病機(jī)制也廣泛受到關(guān)注,既往研究表明,痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是以嘌呤代謝異常導(dǎo)致的一種炎癥及免疫性疾病,嚴(yán)重者可導(dǎo)致腎功能不全甚至殘疾［1］。近些年對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎免疫機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),外周血CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群中的輔助性T 細(xì)胞17(helper T cell 17,Th17)、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)及兩者之間的平衡在痛風(fēng)的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,并與關(guān)節(jié)癥狀的嚴(yán)重程度相關(guān)［2-5］。本研究通過檢測(cè)不同時(shí)期痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血清Th17 與Treg 水平,探討T 淋巴細(xì)胞與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的關(guān)系,進(jìn)而指導(dǎo)臨床診療。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年9月～2020年11月于大連市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科就診的101例痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者作為痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎組,另將同時(shí)期于大連市中心醫(yī)院體檢的101例健康志愿者作為健康對(duì)照組。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎組男92例,女9例；平均年齡(55.2±10.6)歲；所有患者均符合2015年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)與歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR) 公布的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎分類診斷標(biāo)準(zhǔn)；痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎分為急性期及緩解期,急性期為急性發(fā)作24 h 內(nèi)的患者,緩解期為急性發(fā)作后疼痛及關(guān)節(jié)腫痛緩解的患者,約急性期后7～10 d。對(duì)照組男 92例,女9例；平均年齡(56.4±6.4)歲。兩組性別、年齡一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。該研究取得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),且所有參與者均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①均排除可影響免疫功能的疾病及藥物,主要包括近1 周內(nèi)使用抗生素以及近6 個(gè)月內(nèi)應(yīng)用免疫抑制劑患者；②患有心、肺、腎等系統(tǒng)嚴(yán)重功能不全或影響生存的重大疾病者；③其他結(jié)締組織病、惡性腫瘤、急慢性感染性疾病、貧血者；④妊娠或哺乳期；⑤繼發(fā)于其他疾病的繼發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者。

1.2 方法 采集兩組空腹12 h 后肘靜脈血4 ml,采用美國(guó)Beckman Coulter AU5400 全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清樣本的肝功能、腎功能和免疫學(xué)指標(biāo),全血細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)采用Sysmex XE-2100 進(jìn)行測(cè)定。再次采集兩組清晨空腹外周靜脈血2 ml 于肝素抗凝管中,并于4 h 內(nèi)完成檢測(cè),FC500 流式細(xì)胞儀(美國(guó)Beckman Coulter公司)及CXP 分析軟件分析結(jié)果,獲得淋巴細(xì)胞亞群。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較兩組尿酸、肌酐、低密度脂蛋白膽固醇水平及體質(zhì)量指數(shù),外周血Th17、Treg 及Th17/Treg；比較痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性期與緩解期患者外周血Th17、Treg、CRP 水平及VAS 評(píng)分。采用VAS 評(píng)價(jià)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性期與緩解期患者的疼痛程度,具體方法為：0～10 橫線,其中0 表示無(wú)痛,10 表示劇痛,以患者主觀自我感覺在橫線上劃一記號(hào),評(píng)分越高代表疼痛越重［6］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 ()表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組尿酸、肌酐、低密度脂蛋白膽固醇水平及體質(zhì)量指數(shù)比較 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎組尿酸、肌酐、低密度脂蛋白膽固醇及體質(zhì)量指數(shù)均高于健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組尿酸、肌酐、低密度脂蛋白膽固醇水平及體質(zhì)量指數(shù)比較 ()

注：與健康對(duì)照組比較,aP＜0.05

2.2 兩組外周血Th17、Treg 及Th17/Treg 比較 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎組血清Th17、Th17/Treg 水平均高于健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組血清Treg 水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 兩組外周血Th17、Treg 及Th17/Treg 比較 ()

表2 兩組外周血Th17、Treg 及Th17/Treg 比較 ()

注：與健康對(duì)照組比較,aP＜0.05

2.3 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性期與緩解期患者外周血Th17、Treg、CRP 水平及VAS 評(píng)分比較 隨訪完成測(cè)試的48例痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者急性期血清Th17、CRP 水平及VAS 評(píng)分均高于緩解期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；急性期Treg 水平與緩解期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表3。

表3 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性期與緩解期患者外周血Th17、Treg、CRP 水平及VAS 評(píng)分比較(,n=48)

表3 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性期與緩解期患者外周血Th17、Treg、CRP 水平及VAS 評(píng)分比較(,n=48)

注：與緩解期比較,aP＜0.05

3 討論

痛風(fēng)(gout)是多種原因引起的代謝性免疫系統(tǒng)疾病,關(guān)節(jié)炎由單鈉尿酸鹽(monosodium urate,MSU)晶體沉積所致,以痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎為突出臨床特點(diǎn)的晶體相關(guān)性關(guān)節(jié)病,屬于代謝性風(fēng)濕病范疇。隨著痛風(fēng)動(dòng)物模型的研究和患者臨床研究的不斷深入,痛風(fēng)的炎癥激活機(jī)制得到了進(jìn)一步的揭示。研究表明,促炎因子如內(nèi)皮素-1(ET-1)及血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素(IL-6)均參與MSU 誘導(dǎo)的痛風(fēng)炎癥過程［7］。而痛風(fēng)的免疫細(xì)胞,包括中性粒細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制中都起著重要的作用。最近研究還表明,針對(duì)促炎性T 細(xì)胞亞群或其相關(guān)細(xì)胞因子的治療策略可以改善MSU 晶體誘導(dǎo)的小鼠關(guān)節(jié)炎［8］。多項(xiàng)研究強(qiáng)調(diào)了T 細(xì)胞亞群在痛風(fēng)發(fā)病機(jī)制中的新作用。此外,T 細(xì)胞在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中的重要作用可能為嚴(yán)重高尿酸血癥患者無(wú)急性痛風(fēng)發(fā)作或MSU 晶體沉積的臨床證據(jù)提供了一些解釋,進(jìn)而在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制中具有重要意義,T 淋巴細(xì)胞亞群在多種自身免疫性疾病中均有主要致病作用,主要產(chǎn)生及激活細(xì)胞因子,進(jìn)一步促進(jìn)B 細(xì)胞分化產(chǎn)生多種自身抗體等,CD4+T 淋巴細(xì)胞作為T 淋巴細(xì)胞活化后的主要亞群,參與多種免疫系統(tǒng)疾病,包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等,但CD4+T 淋巴細(xì)胞及其亞型對(duì)痛風(fēng)發(fā)病機(jī)制尚無(wú)大樣本研究報(bào)道［9］。有研究表明,痛風(fēng)患者CD4+T 細(xì)胞其中亞型的表達(dá)具有年齡特異性,年齡相關(guān)的CD4+T 細(xì)胞亞群的生長(zhǎng)增加有助于痛風(fēng)合并腎功能損害,這也是首次研究結(jié)果提示T 細(xì)胞亞群與痛風(fēng)及器官惡化的關(guān)系［10］。本研究結(jié)果顯示,痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎組血清Th17、Th17/Treg 水平均高于健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組血清Treg 水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。由此提示血清Th17 參與了痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程,而血清Treg 對(duì)痛風(fēng)的影響暫未確定。同時(shí)作者還研究了急性期和緩解期痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血清中各種標(biāo)志物的變化,結(jié)果顯示,痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者急性期血清Th17、CRP 水平及VAS評(píng)分均高于緩解期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；急性期Treg 水平與緩解期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎組尿酸、肌酐、低密度脂蛋白膽固醇及體質(zhì)量指數(shù)均高于健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。由此提示血清Th17 與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者的疼痛程度有關(guān)系,可能成為評(píng)估疾病嚴(yán)重程度及治療效果的指標(biāo)。另外痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者的炎癥指標(biāo)水平及血脂均較高,證實(shí)了痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者多數(shù)存在高血脂、炎癥反應(yīng)和血管內(nèi)皮損傷,而這些因素可能影響高尿酸血癥發(fā)展［11］。

綜上所述,痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是一類與免疫因子及炎癥發(fā)生有關(guān)的疾病,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,多種炎性指標(biāo)及炎性因子參與發(fā)病及發(fā)展,探究外周血T 淋巴細(xì)胞在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程中的變化有助于闡明其發(fā)病機(jī)制,可能更好預(yù)估病情及療效。本次研究目前處于初始階段,下一步通過對(duì)上述患者進(jìn)行繼續(xù)隨訪,探究不同時(shí)期痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者外周血CD4+T 細(xì)胞亞群的變化,明確CD4+T 細(xì)胞亞群對(duì)疾病發(fā)展的指導(dǎo)作用。