核酸檢測與酶聯免疫吸附試驗在血液標本內乙肝病毒檢測中的價值

朱曉晨

核酸檢測(nucleic acid testing,NAT)可直接在檢測當中使用,在診斷乙肝上意義重大。有相關研究顯示,此種檢測方式優點在于高靈敏度且結果準確,在臨床檢驗當中得到了廣泛使用,針對于各種原因導致的漏檢血液具有高準確度,顯著減少了因輸血引起的病毒感染發生率,為臨床檢查提供了有效措施［1,2］。為探究NAT、酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)在血液標本內HBV 檢測中的價值,故選擇20140例合格血液標本進行檢測,現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2019年7月～2020年8月間20140 份無償獻血血液合格標本納入研究,經過干化學法進行谷丙轉氨酶(ALT)檢測,選擇金標試紙法對乙肝病毒表面抗原(HBsAg)進行檢測,結果合格。

1.2 方法

1.2.1 血液采集方法 樣管離心速率3000 r/min,離心力1600 g,時間為15 min,在4℃環境下進行保存,檢測時間在48 h 內,對血液采集日期、樣品編碼等信息進行記錄保存。對標本的處理時間在2 h 內,轉存至冰箱,冰箱溫度設定在2～8℃,經過2～3 h 后進行離心儲存處理,在24 h 內進行血清學檢查。

1.2.2 檢測方式 所有操作均按照規定進行,試劑在有效期內使用,選擇STAR 全自動樣儀、BEHRUNG全自動酶免后處理機、Cobas s201 核酸檢測系統、COBAS Ampliprep 核酸提取儀、COBAS Taqman 核酸擴增檢測儀。ELISA 檢測：對血液標本進行HBsAg 檢測,選擇2 種ELISA 試劑,在實驗中設定陰性對照組、陽性對照組、室內質控品組與空白對照組,檢驗結果判定：樣本光密度值與臨界值的比值(S/CO)≥1 為陽性,此狀態血液不符合標準；0.5＜S/CO＜1 為灰區,此狀態血液不符合標準；S/CO＜0.5 為陰性,此狀態血液符合標準。NAT 檢測：選擇混樣方案進行NAT 檢測,在混樣中設定6 個標本,設定對照組,混合測定陰性為陰性,對混合測定陽性者進行拆分,如拆分檢測表現陰性則為NAT 陰性,如拆分測定呈現陽性,則為NAT 陽性。針對NAT 陽性標本中,經過NAT 檢查判定為陽性,HBsAg 檢測結果為陰性與NAT 判定陰性獻血者進行隨訪,在2 個月后進行重新采樣。

2 結果

20140 份血液標本中,ELISA 檢測雙試劑陽性6 份,單試劑陽性8 份,雙試劑陰性20126 份。在雙試劑陰性標本中,NAT 檢測呈陰性20111 份,陽性15 份,在確認陽性的15 份標本中,對符合診斷條件的獻血者進行追蹤,ELISA 陰性轉化陽性3 份,均在ELISA 窗口期經過NAT 檢測確認,NAT 檢測中發現2 份隱匿性HBV 感染。

3 討論

HBV、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒三類病毒的特點在于均為血液傳播,嚴重威脅了人們的生命安全。相關資料顯示,對發展中國家的血液標本進行分析,發現5%～20%的血液中存在感染的危險,歷年的輸血以及非安全性注射當中,HBV 感染人數為1600 萬,丙型肝炎病毒感染人數為470 萬,艾滋病病毒感染人數為16 萬,高感染率對人民的生命安全造成了威脅,且對國家經濟以及社會安全造成了嚴重影響［3,4］。當患者身體虛弱時,免疫功能顯著下降,相比于健康者有更大幾率感染血液中的病毒,且因為病毒感染造成嚴重后果,嚴重影響了醫患關系,為保證患者的輸血安全性,維護正常的醫療秩序,我國臨床對血液的安全性十分重視。

我國是HBV 感染高發國家,HBV 作為一種可通過血液傳播的病毒,對獻血人群進行血液檢測是防控HBV 感染的最佳手段。在臨床診斷中ELISA 的使用較為廣泛,在正常情況下,HBsAg 是臨床檢測的常用指標,同時ELISA 檢測方式的優點在于價格低廉、操作便捷［5］,所以在血液檢查當中具有重要意義。但因為隱匿性HBV、HBV 感染窗口期的存在,在臨床檢驗中同樣有較高的漏診情況。NAT 作為臨床血清學診斷方法,也是新型分子生物學診斷措施,同時對HBV-DNA含量進行檢測能直接檢測出患者的感染情況,因為有高靈敏性、高特異性等優點,在臨床血液檢查中得到了廣泛使用［6］。在輸血的過程中是否有可靠的安全性,關鍵在于檢查病毒的窗口期,根據相關結果顯示,通過NAT 檢測后能顯著降低HBV 的窗口期,降低率已經達到了40%～75%,能有效減少病毒通過血液傳輸途徑傳播的可能性。在本研究中,對NAT 檢驗結果陽性標本中,NAT 確認為陽性,但檢驗結果為陰性以及NAT 確認陰性獻血者進行隨訪追蹤,經過ELISA 檢測陰性轉化為陽性3例,該血樣于ELISA 窗口期通過NAT 檢測方法確認,并且發現隱匿性HBV 感染者,同時說明了NAT 在血液檢驗中具有重要價值［7］。NAT 檢測中所選擇的試劑同樣具有高靈敏性和高特異性,同時對實驗環境也有一定的要求,在血液篩查的過程中所應用的設備和試劑應當具有更高要求,盡管顯著提升了血液篩查的成本,但同時也大大提升了血液安全的保證,同時,NAT 自身存在一定約束,如果病毒含量較低,選擇NAT 檢測無法得到準確結果［8］。然而在檢測當中選擇NAT 檢測方式能有效提升病毒檢測準確率,為輸血安全性提供了保障,并且NAT 檢測可以顯著減少窗口期,降低了通過輸血方式傳播病毒的可能,不過在血液檢測中可能會發生漏檢情況,在進行NAT 檢測的時候,應當特別注意病毒核酸,ELISA 則為抗原或抗體,所以,兩種方法在檢測原理上具有一定差異性,所以,兩種檢測方式可以同時應用于血液檢測中,發揮互補的效果,兩種措施針對于血液篩查均為關鍵檢測方案。因為HBV 作為一種能通過血液傳播的病毒,能使患者傳染乙肝,在近年來,外界環境逐漸復雜,乙肝傳染率開始逐漸上升,所以為降低感染發生、縮短輸血傳播的窗口期,開展了NAT 檢測,增強獻血血液的檢查力度。ELISA 作為臨床中最常見的血液標本HBV 檢驗方式,能通過血液標本中HBsAg 的檢測對HBV 進行篩查,具有高檢出率的特點,但是對于窗口期、特異性以及靈敏度存在一定的局限性,有一定的漏診情況［9,10］。然而NAT 檢測法能通過直接檢測血液標本內的HBV數量進行HBV 篩查,所以能更直觀的篩查出檢測血液標本內是否存在HBV,對血液標本的篩查和排查具有積極意義。

因為血液傳播是HBV 感染的重要途徑之一,所以HBV 篩查是血液系統中最為主要的內容,當下ELISA作為一類血清學方法,也成為了診斷HBV 使用最為廣泛的方法,在臨床診斷和血液篩查當中具有關鍵作用,HBV-DNA 檢測是近年來快速發展起來的分子生物學診斷措施,對于發現早期HBV 具有重要意義,且結果可靠,根據相關資料顯示,ELISA 檢測HBV-DNA和HBsAg 的結果存在一定差異,主要原因可能是HBV感染早期,獻血者血液中病毒數量較低,HBsAg 不能被ELISA 檢測到,然而DNA 已經存在于血清當中,所以,HBV-DNA 檢測呈現陽性。雖然HBV-DNA 檢測是快速發展的分子生物學診斷措施,但是針對于早期HBV 感染并不能對病毒進行定量,盡管近年來ELISA試劑盒的靈敏度、特異性正在改善,但依然無法避免病毒感染窗口期、病毒免疫、免疫沉默等因素引發的漏檢情況,然而NAT 技術不斷被亞洲歐美等多個國家作為篩查獻血者血液的主要方法,作為高度敏感、特異的篩查輸血傳染因子的檢測方法主要針對人類免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒以及HBV,在我國,NAT 檢測HBV 的方法正逐漸被推廣開來,根據相關研究表示,在獻血者的血液篩查當中,選擇NAT 檢測技術能顯著提升輸血的安全性,在經過NAT 檢測后,能夠顯著縮短人類免疫缺陷病毒、HBV、丙型肝炎病毒的ELISA 窗口期,在一定程度上降低了病毒經過血液傳播的風險。

綜上所述,NAT 以及ELISA 在臨床診斷中均存在一定效果,兩種試驗方式具有一定互補性,且NAT 在臨床診斷中具有高靈敏度以及高特異性,在進行血液檢查中能顯著降低漏診情況的發生,縮短了HBV 的窗口期,確保輸血治療安全性。上述兩種檢測方式在原理以及方法上存在區別,但在篩查結果中不存在重復性,均為血液篩查的關鍵檢測方式。