p63、TLR3和 Leptin在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義

麻卲 李曉茹 呂志華

宮頸癌是常見的女性生殖系統(tǒng)癌癥，與人乳頭瘤病毒(HPV)感染具有密切關(guān)系。隨著國外思想文化對(duì)國人的沖擊、普遍的性早熟以及性教育缺失等多種原因，我國HPV感染以及宮頸癌的發(fā)病率逐年上升且趨于年輕化[1]。雖然目前臨床上液基細(xì)胞學(xué)檢測(TCT)和病毒檢測(DH3)等輔助檢查能夠?qū)m頸癌早期病變進(jìn)行診斷，但仍有一部分患者在確診時(shí)已錯(cuò)過最佳治療時(shí)期，因此進(jìn)一步提高對(duì)宮頸癌的早期診斷和治療具有積極意義[2]。研究顯示，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與基因表達(dá)異常有關(guān)[3]。p63是一種核蛋白，在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中調(diào)控細(xì)胞的增殖與凋亡，瘦素(Leptin)可通過調(diào)節(jié)多個(gè)信號(hào)通路來抑制細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)不良細(xì)胞的增殖。HPV感染可抑制機(jī)體免疫功能，產(chǎn)生炎癥因子，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，造成組織損傷。Toll樣受體3(TLR3)具有調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的作用，與炎癥反應(yīng)、宮頸癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。本研究通過檢測宮頸組織中p63、TLR3和Leptin的表達(dá)情況，分析各因子水平與腫瘤分期的關(guān)系，為宮頸癌的早期診斷與治療提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

納入2018年3月至2020年1月在我院保留的118例婦科手術(shù)標(biāo)本作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合宮頸癌診斷或正常宮頸組織[4]；②患者年齡在30～60歲之間。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他炎癥或腫瘤疾??；②已行放化療。本次納入正常宮頸組織43例，宮頸癌組織75例。

1.2 檢測方法

使用多聚甲醛充分固定標(biāo)本，石蠟包埋，4 μm厚切片，脫蠟脫水后采用高壓熱修復(fù)，磷酸緩沖鹽(PBS)液沖洗，免疫組化法檢測p63、TLR3和 Leptin的表達(dá)，染色采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法(SP)，二氨基聯(lián)苯胺法(DAB)顯色，鼠抗人p63、TLR3、Leptin抗體均購自武漢奧科博泰生物科技有限公司。已知陽性組織切片和PBS一抗分別為陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。

1.3 檢測結(jié)果判定

p63、TLR3、Leptin的陽性表達(dá)均為細(xì)胞內(nèi)的棕黃色顆粒，視野內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)≤10%則判定陰性(-)，視野內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)>10%～25%則判定為弱陽性(+)， 視野內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)>25%～49%則判定為中陽性(++)，視野內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)≥50%以上則判定為強(qiáng)陽性(+)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 宮頸組織中p63、TLR3、Leptin表達(dá)情況

如表1所示，正常宮頸組織與宮頸癌組織中p63、TLR3、Leptin的表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 正常宮頸與宮頸癌組織中p63、TLR3、Leptin的表達(dá)/例

2.2 p63、TLR3、Leptin表達(dá)與宮頸癌病理特征的關(guān)系

如表2所示，p63表達(dá)與FIGO臨床分期、分化程度相關(guān)(P<0.05)，與年齡無關(guān)(P>0.05)。TLR3表達(dá)與分化程度相關(guān)(P<0.05)，與臨床分期、年齡無關(guān)(P>0.05)。Leptin表達(dá)與臨床分期、分化程度相關(guān)(P<0.05)，與年齡無關(guān)(P>0.05)。

表2 p63、TLR3、Leptin表達(dá)與宮頸癌病理特征的關(guān)系/例

2.3 不同指標(biāo)間的相關(guān)性

TLR3與Leptin和p63的表達(dá)均呈顯著負(fù)相關(guān)(γTLR3 vs Leptin=-0.549，PTLR3 vs Leptin=0.000；γTLR3 vs p63=-0.645，PTLR3 vs p63=0.000)，Leptin與p63呈顯著正相關(guān)關(guān)系(γ=0.677，P=0.000)。

3 討論

宮頸癌好發(fā)于35～55歲人群，在早期易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，患者遠(yuǎn)期生存質(zhì)量差，生存期短，研究顯示，宮頸癌患者的中位生存期不足3年[5]。目前臨床使用的宮頸癌評(píng)估指標(biāo)仍然具有一定局限性，對(duì)宮頸組織中相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測，一方面能夠作為宮頸癌療效評(píng)估指標(biāo)，另一方面，可為宮頸癌的診治提供新的靶點(diǎn)，具有積極的臨床意義。

HPV感染可抑制p63蛋白表達(dá)的下調(diào)，導(dǎo)致p63蛋白表達(dá)持續(xù)在一個(gè)高水平[6]。本研究顯示，p63在正常宮頸組織中幾乎不表達(dá)，而在宮頸癌組織中表達(dá)的陽性率可高達(dá)95.12%，這與方慧英等[7]的研究結(jié)果基本相符合。此外，本研究還顯示，Ⅱ期宮頸癌和低-中分化的宮頸癌組織中p63的中強(qiáng)度陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ期宮頸癌和高分化的宮頸癌，表明p63的表達(dá)與宮頸癌的惡性程度相關(guān)，檢測p63有助于對(duì)宮頸癌患者的病情、預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。

TLR3是一種多功能受體，能夠維持組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡與增殖，可通過TLR3/NF-KB信號(hào)通路參與免疫、炎癥以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。研究顯示[8]，免疫介導(dǎo)的TLR3在病毒感染的抵御中具有重要作用。本研究顯示，在正常組織中TLR3表達(dá)處于高水平，而宮頸癌組織中TLR3表達(dá)陽性率顯著低于正常宮頸組織，且分化程度低的宮頸癌組織TLR3表達(dá)陽性率顯著低于分化程度高的組織。分析認(rèn)為，病毒的免疫逃逸是HPV持續(xù)復(fù)制和感染的重要因素，而有研究顯示TLR3的正常表達(dá)能夠增進(jìn)病毒的清除，當(dāng)TLR3異常下調(diào)時(shí)，可能出現(xiàn)HPV病毒的免疫逃逸，從而大量復(fù)制，導(dǎo)致宮頸的惡性病變[9]。

Leptin主要在脂肪細(xì)胞中表達(dá)，可通過結(jié)合相關(guān)受體來調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的第二信使，進(jìn)一步影響PI3K/AKT等下游信號(hào)，促進(jìn)細(xì)胞的異常增殖，抑制細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)細(xì)胞的異常分化[10]。Leptin在多種惡性腫瘤中高表達(dá)。本研究顯示，Leptin在正常宮頸組織中低表達(dá)，在宮頸癌組織中表達(dá)的陽性率高，且Ⅱ期宮頸癌和低-中分化的宮頸癌組織中強(qiáng)度陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ期宮頸癌和高分化的宮頸癌，這表明，leptin的表達(dá)與宮頸癌的惡性程度具有一定的相關(guān)性，這與趙靚等[11]的研究結(jié)果相符合，提示leptin可作為宮頸癌患者預(yù)后和病情評(píng)估的指標(biāo)之一。

此外，本研究對(duì)p63、TLR3、Leptin表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)TLR3與Leptin和p63的表達(dá)均呈顯著負(fù)相關(guān)，Leptin與p63呈顯著正相關(guān)關(guān)系。其原因可能是TLR3的表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致了HPV感染加重，導(dǎo)致p63表達(dá)上調(diào)，Leptin的表達(dá)上調(diào)可能是因腫瘤細(xì)胞的增殖誘導(dǎo)而產(chǎn)生的，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

綜上所述，p63、TLR3、Leptin均在宮頸癌組織中異常表達(dá)，與病理分期、分化程度存在相關(guān)性，且三者之間存在一定的關(guān)聯(lián)。p63、TLR3、Leptin可作為宮頸癌的可靠標(biāo)志物，用以評(píng)估患者病情和預(yù)后。