一起豬流行性腹瀉病毒與博卡病毒混合感染病例分析

朱小甫，吳旭錦，鄭紅青，尹寶英

(咸陽職業技術學院，咸陽市動物疫病分子生物學診斷技術研究重點實驗室，陜西 咸陽 712000)

近幾年來，陜西省豬場仔豬腹瀉問題突出，造成的經濟損失較大[1]。其臨床表現以仔豬腹瀉脫水為主，仔豬發病率和病死率高。研究顯示，引起仔豬腹瀉的病因復雜，病毒方面主要有豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬德爾塔冠狀病毒(PDcoV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬輪狀病毒(PoRV)和博卡病毒(PBoV)[2～4]。2006年初，我國PEDV毒株出現變異現象，引發免疫失敗導致PED暴發流行，2010年PEDV毒株再次變異，疫情蔓延全國[5]。PBoV最早是在患有PMWS仔豬群中被發現并報道，但后來有研究發現PBoV在腹瀉豬群中有很高的感染率，被認為是一種腹瀉相關的新型病毒[6]。2021年2月份，陜西省渭南市某豬場出現仔豬腹瀉癥狀，豬場采用抗生素治療以及補水止瀉等對癥療法，但收效甚微，仔豬死亡較多，損失較大，隨后送檢4頭發病死亡仔豬到本重點實驗室進行診斷，現總結分析以供同行參考。

1 臨床癥狀

豬場母豬存欄530頭，分娩仔豬連續發病，從病初至送檢1月時間，已死淘224頭仔豬。臨床癥狀表現:仔豬出生1～3 d突然拉稀，精神迅速變差，不吮乳，初期排黃色稀糞，常見未消化的凝乳塊，迅速演變為水樣腹瀉，可見脫落的腸道黏膜。個別仔豬有嘔吐現象。體溫無明顯變化。

2 剖檢病變

剖檢4頭送檢死亡仔豬，病變基本一致。仔豬尸體嚴重脫水，眼窩深陷，肋骨突出。其主要病變集中在消化系統，胃底及幽門部散布數量不等的出血斑；部分小腸充盈，壁薄半透明狀，部分小腸漿膜可見出血斑；剖開可見小腸黏膜出血，內有黃色帶泡沫的液體。腸系膜淋巴結腫大、充血出血。個別仔豬肺臟充血，腎臟有小出血點，肝臟淤血。

3 實驗室診斷

根據臨床癥狀與病理變化，初步判斷為仔豬腹瀉性傳染病。為確診腹瀉病原，采集小腸內容物，在營養瓊脂平板、麥康凱平板上進行細菌劃線分離。采集4份腸道組織，加適量滅菌生理鹽水，剪碎后用組織研磨器研磨為混懸液，凍融3次后12 000 g離心5 min，收集上清液-80℃凍存，用于病毒檢測。采用本實驗室建立的RT-PCR方法，檢測PEDV、TGEV、PDcoV、PoRV與PBoV，以上5種病毒陽性樣品分別出現412 bp、264 bp、303 bp、621 bp與500 bp特異性條帶。結果發現，從腸道內容物中未分離到細菌；病毒檢測結果4份腸道組織樣品中PEDV均為陽性，3份PBoV陽性(見圖1)，TGEV、PDcoV、PoRV均為陰性，最終確診仔豬腹瀉為PEDV和PBoV混合感染引起。

圖1 病毒RT-PCR檢測結果

4 防治措施

由于仔豬病毒性腹瀉發生后進行治療效果不佳，對嚴重腹瀉脫水的仔豬淘汰無害化處理。發生腹瀉的圈舍采用干粉消毒劑進行消毒處理，可有效降低圈舍濕度和殺滅病原。對輕癥仔豬及時隔離，人工哺乳或寄養，5%葡萄糖水和生理鹽水按照1∶1比例混合腹腔注射50 mL，肌肉注射頭孢噻呋鈉預防繼發性細菌感染，嚴格控制人員流動，派專人照護病仔豬。強化母豬產房管理，對進出產房人員工作服和膠鞋嚴格消毒，保持地面衛生，母豬產床勤清理、消毒。維持舒適溫度對控制腹瀉極為重要，要求產房溫度保持在25℃以上，護仔箱溫度保持在30℃以上。豬舍附近的通道和場地兩天消毒一次。采集腹瀉仔豬腸道組織制作本場組織滅活苗，給懷孕母豬臨產前1個月免疫注射5 mL，間隔10 d再次注射5 mL，經過自家苗免疫后的母豬分娩的仔豬再沒有發生腹瀉，成功控制了仔豬腹瀉的流行。

5 小結與體會

該豬場對母豬群采用了PEDV與TGEV二聯滅活疫苗進行免疫，但還是發生了仔豬腹瀉。分析發病原因，主要是PEDV流行毒株發生了較為顯著的變異，其毒株與疫苗毒株同源性較低(內部資料)，導致疫苗免疫抗體不能完全保護仔豬抵御流行毒株的感染。其次是由于PBoV的混合感染，PBoV是一種新型的細小病毒，其感染豬主要引起腹瀉，對產房哺乳仔豬致病性高，死亡率高達70%以上[7]。這兩種致病性強的病毒性腹瀉病原混感，更是加重了臨床表現和病死率。在流行病學調查時發現，豬場在疫情發生后，獸醫曾診斷為仔豬黃痢，反復使用多種抗生素治療，延誤了確診時間，耽誤了采取有效措施的時間，導致豬場損失擴大。由于仔豬腹瀉病原多樣，且臨床表現和病理變化多有類似，臨床診斷和病理診斷難度大，必須進行實驗室檢測分析才能確診病原[8]。本課題組應用自行開發的RT-PCR技術，直接以病料組織中提取的總RNA為模板，檢測4種腹瀉相關病毒核酸片段，短時間內即可確定病原種類，針對病原及時采取有效應對措施，有助于迅速控制疫情，最大限度降低豬場損失。此外，需要指出的是，由于PEDV毒株變異導致商品苗預防效果不佳，而PBoV尚無商品化疫苗可用，制作自家組織滅活疫苗進行母豬群免疫，提高母源抗體水平，通過被動免疫保護仔豬不再感染腹瀉病原，是控制仔豬腹瀉的重要措施。