液相色譜串聯質譜法測定水稻中三氟苯嘧啶殘留量

沈亞飛，徐長亮，郝國輝，卞 軍

（1.江蘇省宿遷市泗洪縣梅花鎮農業農村工作局，江蘇宿遷 223954；2.江蘇省宿遷市農畜產品質量檢測中心，江蘇宿遷 223800；3.江蘇省農產品質量檢驗測試中心，江蘇南京 210036；4.江蘇省宿遷市宿豫區農產品質量檢驗檢測中心，江蘇宿遷 223800）

三氟苯嘧啶對飛虱等同翅目害蟲及其傳播的病毒具有很好的防控效果，可用于水稻、玉米、馬鈴薯、棉花和大豆等作物在大田栽培過程中的蟲害防治。水稻是我國的重要糧食作物，遏制蟲害、保護水稻穩產、高產是影響國計民生的大事[1]。稻飛虱是水稻生產中的主要害蟲之一[2]，晚稻后期，稻飛虱難治，這是因為發生頻次多且稻飛虱對大部分新煙堿類殺蟲劑、吡蚜酮、噻嗪酮等產生了較高的抗性[3]。三氟苯嘧啶是新型介離子類殺蟲劑，具有安全、高效的特點[4]，對水稻褐飛虱和白背飛虱有特效，可用于該類害蟲的抗性管理。但是，在環境行為上，有研究發現三氟苯嘧啶在pH值4～9的水中的穩定性較好，幾乎不會發生水解，因此具有污染地下水的潛在風險[3]。因此，準確檢測三氟苯嘧啶的產品及其環境中的殘留量，為環境及膳食風險評估提供準確數據尤為重要。本文采用液相色譜串聯質譜儀，通過母離子、子離子以及多重反應監測（Multiple Reaction Monitoring，MRM）掃描方法，摸索出相應的離子對信息以及優化相關的質譜參數，建立三氟苯嘧啶殘留檢測的方法，為進一步分析和評價其在其他產品和環境中的殘留提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

液相色譜質譜聯用儀：三重四極桿液相串聯質譜儀Waters TQS，美國Waters 公司；高速離心機：TG1650-WS，上海盧湘儀離心機儀器有限公司；電子天平：感量0.01 mg、0.01 g，梅特勒-托利多公司；高速勻漿機：IKA-T19，德國IKA公司。

三氟苯嘧啶標準品：純度≥96.0%，Anpel公司；氯化鈉：分析純；無水硫酸鎂：分析純；乙腈：HPLC級別，CNW；甲酸：HPLC級別，CNW；乙酸銨：HPLC級別，CNW；QUECHERS凈化管：50 mg無水硫酸鎂和100 mg PSA-C18（Agilent，質量比1∶1）；一次性注射器（5 mL）以及針式濾器（直徑13 mm，濾膜孔徑0.22 μm，CNW）均采購自上海安譜實驗科技股份有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 儀器條件

流動相（有機相）：乙腈；流動相（水相）：5 mmol乙酸銨水溶液（含0.1% 甲酸）；梯度洗脫程序見表1；色譜柱：C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；離子源：電噴霧離子源（正離子模式）；色譜柱溫：40 ℃；流動相流速：0.30 mL·min-1；進樣量：1 μL；干燥氣溫度：500 ℃；干燥氣流速：1 000 mL·min；離子源溫度：150 ℃；三氟苯嘧啶的定性離子對：399/121，定量離子對：399/279[5]。

表1 液相色譜梯度洗脫程序

1.2.2 樣品制備

稱取水稻樣品5 g（±0.01 g）于離心管中，加入5 mL純水浸潤混勻并過夜，再加入1 g NaCl、2 g無水MgSO4和5 mL乙腈進行勻漿，然后用離心機在6 000 r·min-1條件下離心5 min，取上清液2 mL，加入含50 mg無水MgSO4和100 mg PSA-C18（質量比1∶1）的QUECHERS凈化管，振蕩混勻后再于6 000 r·min-1下離心5 min，使凈化填料于上清液徹底分離；取1 mL上清液在50 ℃水浴下氮吹至近干，用1 mL色譜純乙腈復溶解，溶液過0.22 μm有機濾膜，使用三重四極桿液相串聯質譜儀進行分析[5]。

1.2.3 標準溶液制備以及標曲繪制

稱量一定量的三氟苯嘧啶標準品配制三氟苯嘧啶標準儲備液，濃度為155 mg·L-1，并根據《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）[6]要求進行保存。用微量注射器和移液管移取三氟苯嘧啶標準儲備液并配制成質量濃度分別為0.031 mg·L-1、0.078 mg·L-1、0.155 mg·L-1、0.248 mg·L-1和0.310 mg·L-1的三氟苯嘧啶標準工作溶液（用基質溶液進行配制），按照1.2.1 所述儀器條件測定三氟苯嘧啶含量，并根據濃度擬合其標準曲線方程，確定回歸系數是否滿足GB/T 27417—2017對定量分析的相關系數的要求。

2 結果與分析

2.1 三氟苯嘧啶定性和定量離子流圖

本實驗采取正離子掃描反應離子檢測模式檢測三氟苯嘧啶。三氟苯嘧啶總離子流圖、定量離子及定性離子圖中的保留時間均為1.89 min，由定量離子和定性離子組成的提取離子流圖見圖1。

圖1 三氟苯嘧啶定性和定量離子流圖

2.2 三氟苯嘧啶標準曲線

由圖2可知，三氟苯嘧啶的線性回歸方程為y=85.529 1x+3 388.93。該標準曲線由5個校準點組成，線性回歸方程相關系數為0.997，符合《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017）[7]中相關系數不低于0.99的規定。

圖2 三氟苯嘧啶標準溶液擬合曲線

2.3 三氟苯嘧啶定量限分析

在未檢測到三氟苯嘧啶殘留的水稻中添加三氟苯嘧啶，使水稻樣品中三氟苯嘧啶理論添加濃度分別 為 0.01 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1、0.03 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1和 0.50 mg·kg-1，每個添加水平做5個平行實驗，按照方法1.2.2進行樣品制備（表2）。當添加濃度小于0.03 mg·kg-1時，儀器的信噪比不能滿足定量檢測要求，無法獲得穩定的回收率，因此選擇0.03 mg·kg-1作為其最低定量限。此外，當添加濃度為0.03 mg·kg-1時，樣品中的回收率為90%～110%，相對標準偏差為5.78%，滿足《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017）中相關要求，因此方法認定三氟苯嘧啶在水稻中的方法定量限為0.03 mg·kg-1。

表2 方法定量限確定數據分析

2.4 三氟苯嘧啶精密度及準確度分析

對 添 加 濃 度 為 0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1的3組樣品（每個樣品5個重復）經前處理后上機檢測，回收率和相對標準偏差結果見表3。當添加濃度為0.05 mg·kg-1時，平均回收率為91.5%，相對標準偏差為4.14%；當添加濃度為0.10 mg·kg-1時，平均回收率為89.2%，相對標準偏差為1.66%；當添加濃度為0.50 mg·kg-1時，平均回收率為101.4%，相對標準偏差為1.24%，各濃度添加水平下的準確度精密度均符合GB/T 27417—2017中質量控制要求。

表3 三氟苯嘧啶在水稻中的添加回收結果分析

3 結論

采用QUECHERS方法對水稻中三氟苯嘧啶進行提取，使用高效液相色譜-串聯質譜對樣品中三氟苯嘧啶進行檢測。結果表明，該方法滿足GB/T 27417—2017中對準確度和精密度的質量控制要求。該方法可用于水稻中三氟苯嘧啶殘留量的檢測，其方法定量限為0.03 mg·kg-1，在該定量限水平下，三氟苯嘧啶的平均回收率為90%～110%，相對標準偏差為5.78%。