六師地區(qū)規(guī)?；i場7種主要豬病的病原學檢測結(jié)果分析

趙陳霞

（新疆兵團第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，新疆 五家渠 831300）

豬產(chǎn)業(yè)是我國的傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，在畜牧業(yè)乃至整個農(nóng)業(yè)經(jīng)濟中都占有非常重要的地位，是農(nóng)民經(jīng)濟收入的重要來源。同時，我國也是豬肉消費第一大國，豬肉消費占居民肉類消費總量的60%以上[1]。六師作為新疆生產(chǎn)建設兵團離新疆首府烏魯木齊最近的一個師，一直就有養(yǎng)豬傳統(tǒng)，具有獨特的地域優(yōu)勢。受非洲豬瘟影響，近年來國務院、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部出臺多項政策、方針以保障豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，六師吸引了大批的規(guī)?；B(yǎng)殖企業(yè)、投資者在本地建場，截至目前，兵團六師轄區(qū)內(nèi)生豬規(guī)?；B(yǎng)殖水平已達到86%。隨著養(yǎng)殖數(shù)量逐漸增多，集約化、規(guī)?；潭鹊脑鰪?，與之產(chǎn)生的飼養(yǎng)管理不當或疫苗免疫不規(guī)范，會導致豬場相關疾病的流行與發(fā)生，給養(yǎng)殖場造成嚴重的經(jīng)濟損失[2]，因此對六師轄區(qū)內(nèi)的規(guī)?；i場主要疾病進行檢測意義重大。

根據(jù)歷年內(nèi)轄區(qū)內(nèi)豬病的發(fā)生情況，確定了豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、支原體（MYCO）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬流感病毒（SIV）、傳染性胸膜肺炎放線桿菌（APP）、傳染性胃腸炎（TGEV）等7種疾病，并在25個規(guī)?；i場中采集了1 478份全血、肛拭子、鼻拭子、扁桃體、病死豬組織（心、肝、脾、肺、腎、淋巴），采用熒光PCR和熒光RT-PCR的方法對上述7種病進行了病原學檢測，為本地規(guī)?；B(yǎng)豬場的疾病防治提供參考。

1 材料

1.1 樣品及保存

2021年4—5月間采集六師轄區(qū)內(nèi)25個規(guī)?；i場活豬的全血308份、肛拭子378份、鼻拭子378份、扁桃體321份等1 385份樣品，收集該段時間內(nèi)的病死豬的組織樣品（心、肝、脾、肺、腎、淋巴混合樣）93份，拭子樣品、扁桃體樣品、病死豬組織樣品中倒入2～4 mL生理鹽水置于-20 ℃以保存，全血樣品在ENTA Na的下玻璃管中置2～4 ℃冷藏保存。采集的各種樣品按養(yǎng)殖規(guī)模分類詳見表1。

表1 各規(guī)?；B(yǎng)殖場采集樣品的分類統(tǒng)計

1.2 主要儀器設備

全自動核酸提取儀（型號Duo Prime），芬蘭ThermoFisher制造；組織研磨儀（型號BSHCL2），杭州遂真生物技術有限公司制造；熒光定量PCR儀（型號Gentier 96），西安天隆科技有限公司；病毒DNA/RNA提取試劑盒（批號20210111），北京億森寶生物科技有限公司提供。

1.3 反應試劑

熒光PCR和熒光RT-PCR反應試劑來源于哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司和廣州維伯鑫生物科技有限公司兩個公司。使用哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司的試劑主要包括：豬圓環(huán)病毒2型實時熒光PCR檢測試劑盒（批號PCV2 20210226P）、豬流行性腹瀉實時熒光RT-PCR檢測試劑盒（批號PEDV 20210303P）、豬流感病毒通用型實時熒光RT-PCR檢測試劑盒（批號SIV 20210112P）、支原體實時熒光PCR檢測試劑盒（批號MYCO 20210302P）、豬傳染性胃腸炎病毒實時熒光RT-PCR檢測試劑盒（批號TGEV 20210205P）。使用廣州維伯鑫生物科技有限公司試劑主要：偽狂犬病病毒通用型（PRV-gB）核酸檢測試劑盒（熒光PCR法，批號21040101）、傳染性胸膜肺炎放線桿菌核酸檢測試劑盒（熒光PCR法，批號21040101）。以上試劑盒均符合國家要求，其引物的設置也是根據(jù)國家標準、行業(yè)標準等標準要求設計的特異性引物和引物序列。

1.4 樣品處理

全血樣品無需處理，鼻拭子、肛拭子取上清液為樣品，病死豬組織在無菌環(huán)境下取每只豬的心、肝、脾、肺、腎、淋巴各取米粒大小一塊放置于含碳化鎢小球的組織研磨管中，扁桃體直接置于含碳化鎢小球的組織研磨管中，加0.1 mol/L的滅菌PBS（pH 7.4）1 mL，將組織研磨管配平放置于組織研磨儀中，設置破碎速度為4 m/s，單次破碎時間為10 min，共計循環(huán)6次，制備為組織勻漿液。將該勻漿液于2 000 r/min離心處理10 min，取上清液并標記編號，用于核酸提取。

1.5 熒光RT-PCR/PCR試驗

1.5.1 DNA/RNA提取 在病毒DNA/RNA 提取試劑盒的A列各孔加入制好樣品、陰性對照、陽性對照各200 μL、每孔加入20 μL蛋白酶K，用全自動核酸提取儀上機提取模板DNA/RNA，F(xiàn)列為模板DNA/RNA。

1.5.2 熒光PCR試驗 按照各種疾病的病原學試劑盒使用說明書配制反應體系、反應階段、反應時間，詳見表2。

表2 病原試劑的反應體系、階段及反應時間

2 結(jié)果

2.1 PCV2檢出情況

PCV2在病死豬組織內(nèi)檢測出的陽性率為1.08%，在全血中檢測出的陽性率為3.25%；25個養(yǎng)殖場有6個養(yǎng)殖場檢出陽性，陽性率為24%，在中型規(guī)模場中的病死豬組織樣品中未檢出PCV2，在大型養(yǎng)殖場的病死豬組織樣品中檢出1份陽性樣品，大、中、小型養(yǎng)殖場的全血樣品中均檢出陽性，詳見表3。

表3 PCV2檢出結(jié)果統(tǒng)計

2.2 PEDV檢出情況

PEDV在肛拭子豬檢出的陽性率為3.7%，在病死豬組織內(nèi)未檢出PEDV；小型養(yǎng)殖場未檢出PEDV，大型場檢出的較多，為36.36%；場陽性率為20%（表4）。

表4 PEDV檢出結(jié)果統(tǒng)計

2.3 SIV檢出情況

SIV在鼻拭子豬檢出的陽性率為1.32%，在病死豬組織內(nèi)未檢出SIV；大、中、小型養(yǎng)殖場均檢出SIV，中型養(yǎng)殖場檢出的最多，為28.57%；SIV陽性率為1.06%，詳見表5。

表5 SIV檢出結(jié)果統(tǒng)計

2.4 MYCO檢出情況

MYCO在病死豬組織內(nèi)檢測出的陽性率為5.38%，在鼻拭子中檢測出的陽性率為12.96%；在大、中、小型養(yǎng)殖場均檢出MYCO且檢出率較高，其中，在小、中型養(yǎng)殖場內(nèi)檢出率為100%；場陽性率為88%，詳見表6。

表6 MYCO檢出結(jié)果統(tǒng)計

2.5 PRV檢出結(jié)果

PRV在病死豬組織內(nèi)檢測出的陽性率為1.08%，在鼻拭子中檢測出的陽性率為0.53%；僅在中型養(yǎng)殖場的鼻拭子樣品和大型養(yǎng)殖場的病死豬組織樣品中檢出，小型規(guī)模養(yǎng)殖場未檢出；場陽性率為12%，詳見表7。

表7 PRV檢出結(jié)果統(tǒng)計

2.6 APP檢出結(jié)果

APP在病死豬組織內(nèi)檢出率為1.08%，在鼻拭子中檢出率為1.06%，在扁桃體中檢出率為1.56%；大、中、小型規(guī)模養(yǎng)殖場均檢出PRV，其中，大型養(yǎng)殖場檢出的最多，為36.36%；場陽性率為32%，詳見表8。

表8 APP檢出結(jié)果統(tǒng)計

2.7 TGEV檢出情況

在25個養(yǎng)殖場采集的肛拭子和病死豬組織樣品均內(nèi)未檢出TGEV。

3 討論

由表3—表8可以看出：25個不同規(guī)模的豬場檢出的6種病原總陽性率依次為MYCO 11.46%、PEDV 2.97%、PCV2 2.74%、APP 1.26%、SIV 1.06%、PRV 0.64%，說明上述6種疾病在該地區(qū)普遍存在，據(jù)了解，25個豬場中大多數(shù)豬場，特別是中、小型豬場未進行過上述幾種疾病的免疫，說明這些豬場對以上幾種疾病防控的重視力還不夠。極個別豬場因之前發(fā)生過上述1～2種疾病，有針對性的對這幾種疾病進行了一定的疫苗免疫，但由于免疫力度不夠或免疫效果不好，導致這些疾病依然在豬場存在。

由表3—表8可以看出，6種檢出疾病在活體豬樣品內(nèi)的檢出率依次為MYCO 12.96%、PEDV 3.7%、PCV2 3.25%、SIV 1.32%、APP 1.29%、PRV 0.53%，這基本與6種疾病總陽性率排序和比值相近，說明活體樣品檢測可作為評判豬場內(nèi)這幾種疾病發(fā)生情況的重要指標。同時，活體樣品擁有采樣方法簡單、對豬只傷害較小、樣品易于保存、便于檢測等優(yōu)點、推薦使用活體樣品檢測。

表3—表8檢測結(jié)果表明，6種疾病在大、中、小型豬場中發(fā)生的情況也不相同。PCV2在中型養(yǎng)殖場中比其他兩種規(guī)模養(yǎng)殖場發(fā)生的少，其他兩種規(guī)模養(yǎng)殖場相差不大；PEDV在中型、大型養(yǎng)殖場中發(fā)生，且大型養(yǎng)殖場發(fā)現(xiàn)的較多，據(jù)了解中小型養(yǎng)殖場大多數(shù)僅為肥育豬場，這與PEDV感染豬只的性質(zhì)相適應；SIV在中型養(yǎng)殖場感染程度較高，據(jù)了解中型養(yǎng)殖場中進行SIV免疫的不多，應加強該類疾病疫苗的免疫；MYCO在3種類型的養(yǎng)殖場中發(fā)生率均很高，在中小型養(yǎng)殖場中發(fā)生率為100%，MYCO的防控主要靠豬場生物安全防控，有效的消毒和動物營養(yǎng)保健是控制該病發(fā)生的主要方法；PRV未在小型養(yǎng)殖場中發(fā)現(xiàn)，在中型養(yǎng)殖場中發(fā)生率大于大型養(yǎng)殖場，據(jù)了解7個小型養(yǎng)殖場都為肥育場，其豬只來源簡單，密度低，更利于PRV的防控，而大型場較中型場更注重PRV的免疫；APP在大型場發(fā)生率略大于其他兩個類型，這可能與大型養(yǎng)殖場養(yǎng)殖密度高，而APP為呼吸道感染有關系。

統(tǒng)計顯示，多個豬場存在以上6種病原的兩種及兩種以上的混合感染，其中雙重感染占52%，三重感染占12%，四重感染占8%，感染1種的占20%，無感染的占8%，同時MYCO可和多種疾病混合感染。說明該地區(qū)規(guī)?；i場感染疾病以MYCO、APP、PCV2、PEDV、SIV、PRV為主，且多呈混合感染趨勢，MYCO可作為評估豬場疾病發(fā)生的監(jiān)控者。

4 結(jié)論

規(guī)?；i場因養(yǎng)殖技術水平較高，一般具有完整的免疫程序和生物安全防控體系，對疾病的防控有一定的好處，但又因其飼養(yǎng)密度大，養(yǎng)殖品種較單一，個別場的免疫程序不規(guī)范，生物安全體系不完善，缺乏消毒程序，獸醫(yī)保健未到位等原因易發(fā)生各種疾病，因此，在規(guī)模化豬場生產(chǎn)中，要注重疾病的混合感染狀況，利用活體采樣方式取樣進行實驗室病原檢測，確定早期感染情況，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早預防、早治療。做到以上幾個方面，可提高豬只群體免疫水平，降低豬場各種疾病的發(fā)生。